ବର୍ତ୍ତମାନ†ବର୍ତ୍ତମାନ ଠିକଣା: OX11 0DE, UK, ଡାଇମଣ୍ଡ ବିଲଡିଂ, ହାରୱେଲ୍ ସାଇନ୍ସ ଆଣ୍ଡ୍ ଇନୋଭେସନ୍ ପାର୍କ, ଡାଏଟକୋଟ, ଅକ୍ସଫୋର୍ଡଶାୟାର, UK, ଡାଇମଣ୍ଡ ଲାଇଟ୍ ସୋର୍ସ କୋ., ଲିମିଟେଡ୍, ଇଲେକ୍ଟ୍ରୋନିକ୍ ବାୟୋଲୋଜିକାଲ୍ ଇମେଜିଂ ସେଣ୍ଟର।
ପ୍ରତିକ୍ରିୟା କେନ୍ଦ୍ର ଆଲୋକ-ଅମଳ ଜଟିଳ 1 (RC-LH1) ହେଉଛି ବାଇଗଣୀ ଫଟୋଟ୍ରୋଫିକ୍ ଜୀବାଣୁର ମୁଖ୍ୟ ଆଲୋକସଂଶ୍ଳେଷଣ ଉପାଦାନ। ଆମେ Rhodopseudomonas palustris ରୁ RC-LH1 ଜଟିଳର ଦୁଇଟି କ୍ରାଇଓ-ଇଲେକ୍ଟ୍ରୋନ୍ ମାଇକ୍ରୋସ୍କୋପି ଗଠନ ପ୍ରଚଳନ କରିଥିଲୁ। RC-LH114-W ଜଟିଳର 2.65-Å ରିଜୋଲ୍ୟୁସନ୍ ଗଠନ RC ଚାରିପାଖରେ 14 ସବୟୁନିଟ୍ LH1 ଲୁପ୍ ନେଇ ଗଠିତ, ଯାହା ପ୍ରୋଟିନ୍ W ଦ୍ୱାରା ବାଧାପ୍ରାପ୍ତ ହୁଏ, ଯେତେବେଳେ ପ୍ରୋଟିନ୍-W ବିନା ଜଟିଳ ସମ୍ପୂର୍ଣ୍ଣ ଭାବରେ RC ରଚନା RC ଦ୍ୱାରା ଘେରି ରହିଥାଏ। ବନ୍ଦ 16 ସବୟୁନିଟ୍ LH1 ଲୁପ୍। ଏହି ଗଠନଗୁଡ଼ିକର ତୁଳନା RC-LH1 ଜଟିଳରେ କ୍ୱିନୋନର ଗତିବିଧି ବିଷୟରେ ଅନ୍ତର୍ଦୃଷ୍ଟି ପ୍ରଦାନ କରେ, ଯେଉଁଥିରେ RC QB ସାଇଟରେ କ୍ୱିନୋନ୍ ବାନ୍ଧିବା ସମୟରେ ପୂର୍ବରୁ ଅନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ସଂରଚନାମୂଳକ ପରିବର୍ତ୍ତନ, ଏବଂ ସହାୟକ କ୍ୱିନୋନ୍ ବାନ୍ଧନ ସ୍ଥାନଗୁଡ଼ିକର ସ୍ଥାନ ଅନ୍ତର୍ଭୁକ୍ତ, ଯାହା ସେମାନଙ୍କୁ RC କୁ ପାସ୍ କରିବାରେ ସାହାଯ୍ୟ କରେ। W ପ୍ରୋଟିନର ଅନନ୍ୟ ଗଠନ LH1 ଲୁପ୍ ବନ୍ଦ ହେବାରୁ ରୋକିଥାଏ, ଯାହା ଦ୍ଵାରା କ୍ୱିନୋନ୍/କ୍ୱିନୋଲୋନ୍ ବିନିମୟକୁ ତ୍ୱରାନ୍ୱିତ କରିବା ପାଇଁ ଏକ ଚ୍ୟାନେଲ୍ ସୃଷ୍ଟି କରିଥାଏ।
ଆଲୋକସଂଶ୍ଳେଷଣ ଦ୍ୱାରା ପ୍ରଦାନ କରାଯାଇଥିବା ଶକ୍ତି ପୃଥିବୀର ପ୍ରାୟ ସମସ୍ତ ଜୀବନକୁ ବଜାୟ ରଖିପାରେ, ଏବଂ ଏଥିରେ ସୌର ଜୈବପ୍ରଯୁକ୍ତି ପାଇଁ ପ୍ରଚୁର ସମ୍ଭାବନା ରହିଛି। ବିଶ୍ୱ ଆଲୋକସଂଶ୍ଳେଷଣକୁ ପ୍ରୋତ୍ସାହିତ କରିବା ସହିତ, ବାଇଗଣୀ ଫଟୋଟ୍ରୋଫିକ୍ ଜୀବାଣୁ ମଧ୍ୟ ବିଭିନ୍ନ ଶକ୍ତି ଧାର ଏବଂ ମେଟାବୋଲିକ୍ କ୍ଷମତା ପ୍ରଦର୍ଶନ କରନ୍ତି। ସେମାନେ ଆଲୋକସଂଶ୍ଳେଷଣକୁ ଏଡ଼ାଇ ପାରିବେ ଏବଂ ଅନ୍ଧାରରେ ହେଟେରୋଟ୍ରୋଫିକ୍ ଜୀବାଣୁ ଭାବରେ ବୃଦ୍ଧି ପାଇପାରିବେ, ନାଇଟ୍ରୋଜେନ୍ ଏବଂ କାର୍ବନ ଡାଇଅକ୍ସାଇଡ୍ ସ୍ଥିର କରିପାରିବେ, ହାଇଡ୍ରୋଜେନ୍ ଉତ୍ପାଦନ କରିପାରିବେ ଏବଂ ସୁଗନ୍ଧିତ ଯୌଗିକଗୁଡ଼ିକୁ ହ୍ରାସ କରିପାରିବେ (1-3)। ଏହି ପ୍ରକ୍ରିୟାଗୁଡ଼ିକ ପାଇଁ ଶକ୍ତି ପ୍ରଦାନ କରିବା ପାଇଁ, ଆଲୋକକୁ ଶୀଘ୍ର ଏବଂ ଦକ୍ଷତାର ସହିତ ରାସାୟନିକ ଶକ୍ତିରେ ରୂପାନ୍ତରିତ କରିବାକୁ ପଡିବ। ଏହି ପ୍ରକ୍ରିୟା ଆରମ୍ଭ ହୁଏ ଯେତେବେଳେ ଆଲୋକ-ଟ୍ରାପିଂ ଆଣ୍ଟେନା ଜଟିଳ ଆଲୋକକୁ ଶୋଷଣ କରେ ଏବଂ ଫସି ରହିଥିବା ଶକ୍ତିକୁ ପ୍ରତିକ୍ରିୟା କେନ୍ଦ୍ର (RC) କୁ ସ୍ଥାନାନ୍ତର କରେ, ଏହା ଦ୍ୱାରା ଚାର୍ଜ ପୃଥକୀକରଣ ଆରମ୍ଭ ହୁଏ (4 - 7)। ବାଇଗଣୀ ଫଟୋଟ୍ରୋଫିକ୍ ଜୀବାଣୁରେ ଆଲୋକସଂଶ୍ଳେଷଣର ମୌଳିକ ଏକକ ପ୍ରକାର 2 RC ଦ୍ୱାରା ଗଠିତ, ଆଲୋକ-ଅମଳ ଜଟିଳ 1 (LH1) ଦ୍ୱାରା ଘେରି, RC-LH1 କୋର୍ ଜଟିଳ ଗଠନ କରେ। LH1 ବକ୍ର αβ ହେଟେରୋଡାଇମରର ଏକ ଆରେ ଦ୍ୱାରା ଗଠିତ, ଯାହା ମଧ୍ୟରୁ ପ୍ରତ୍ୟେକ ଦୁଇଟି ଜୀବାଣୁ କ୍ଲୋରୋଫିଲ୍ (BChl) ଅଣୁ ଏବଂ ଗୋଟିଏ କିମ୍ବା ଦୁଇଟି କ୍ୟାରୋଟିନୋଏଡ୍ (8-12) କୁ ବାନ୍ଧିଥାଏ। ସବୁଠାରୁ ସରଳ LH1 ଆଣ୍ଟେନାରେ 16 କିମ୍ବା 17 αβ ହେଟୋରୋଡାଇମର୍ ଥାଏ ଯାହା ଏକ ବନ୍ଦ ଲୁପ୍‌ରେ RC (9-13) ଘେରି ରହିଥାଏ, କିନ୍ତୁ ଅନ୍ୟ କୋର୍ କମ୍ପ୍ଲେକ୍ସରେ, ଟ୍ରାନ୍ସମେମ୍ବ୍ରେନ୍ ପେପ୍ଟାଇଡ୍ସ ପରିପାର୍ଶ୍ୱିକ LH1 ର ନିରନ୍ତରତାକୁ ବାଧା ଦେଇଥାଏ, ଯାହା ଦ୍ଵାରା RC ଏବଂ ସାଇଟୋକ୍ରୋମ୍ bc1 କମ୍ପ୍ଲେକ୍ସ (11, 13-15) ମଧ୍ୟରେ କ୍ୱିନୋଲ୍/କ୍ୱିନୋନ୍ ପ୍ରସାରଣକୁ ପ୍ରୋତ୍ସାହିତ କରିଥାଏ। ବାଇଗଣୀ ଫଟୋଟ୍ରୋଫିକ୍ ଉଦ୍ଭିଦ ରୋଡୋପ୍ସୁଡୋମୋନାସ୍ (Rps.) ଏକ ମଡେଲ୍ ଜୀବ ଯାହା ଆଲୋକ ସଂଶ୍ଳେଷଣକୁ ସମର୍ଥନ କରୁଥିବା ଶକ୍ତି ଏବଂ ଇଲେକ୍ଟ୍ରୋନ୍ ସ୍ଥାନାନ୍ତରକୁ ବୁଝିପାରେ। Rps ର ପ୍ରଥମ ସ୍ଫଟିକ ଗଠନ। ପାଲୁଷ୍ଟ୍ରିସ୍ RC-LH1 କମ୍ପ୍ଲେକ୍ସର ମଡେଲ୍ ହେଉଛି RC, 15 ହେଟୋରୋଡାଇମେରିକ୍ LH1 ଲୁପ୍ ଦ୍ୱାରା ଘେରି ରହିଛି, ଯାହା "ପ୍ରୋଟିନ୍ W" (14) ନାମକ ଏକ ଅଜଣା ପ୍ରୋଟିନ୍ ଦ୍ୱାରା ବାଧାପ୍ରାପ୍ତ ହୁଏ। ପରବର୍ତ୍ତୀ ସମୟରେ ପ୍ରୋଟିନ୍-W କୁ RPA4402 ଭାବରେ ଚିହ୍ନଟ କରାଯାଇଥିଲା, ଯାହା ତିନୋଟି ପୂର୍ବାନୁମାନିତ ଟ୍ରାନ୍ସମେମ୍ବ୍ରେନ୍ ହେଲିସେସ୍ (TMH) (16) ସହିତ ଏକ ଅଚରିତ୍ରିତ 10.5kDa ପ୍ରୋଟିନ୍। ଆମେ RC-L, M (pufL, pufM) ଏବଂ LH1α, β (pufA, pufB) ସବୟୁନିଟଗୁଡ଼ିକୁ ଏନକୋଡିଂ କରୁଥିବା ଜିନ୍ ପାଇଁ ବ୍ୟବହୃତ ନାମକରଣ ସହିତ ସୁସଙ୍ଗତ ହେବା ପାଇଁ rpa4402 ଜିନ୍ ଏନକୋଡିଂ ପ୍ରୋଟିନ୍ W କୁ pufW ରେ ପୁନଃ ନାମକରଣ କରିବାକୁ ପ୍ରସ୍ତାବ ଦେଉଛୁ। ଆଶ୍ଚର୍ଯ୍ୟଜନକ ଭାବରେ, ପ୍ରୋଟିନ୍-W କେବଳ RC-LH1 ର ପ୍ରାୟ 10% ରେ ଉପସ୍ଥିତ, ଯାହା Rps ପ୍ରକାଶ କରେ। palustris ଦୁଇଟି ଭିନ୍ନ RC-LH1 କମ୍ପ୍ଲେକ୍ସ ଉତ୍ପାଦନ କରେ। ଏଠାରେ, ଆମେ ଦୁଇଟି କୋର କମ୍ପ୍ଲେକ୍ସର ଉଚ୍ଚ-ରିଜୋଲ୍ୟୁସନ୍ କ୍ରାଇଓ-EM (cryo-EM) ଗଠନ ରିପୋର୍ଟ କରୁ, ଗୋଟିଏ ପ୍ରୋଟିନ୍ W ଏବଂ 14 αβ ହେଟେରୋଡାଇମର୍ ସହିତ, ଅନ୍ୟଟି ପ୍ରୋଟିନ୍ W ବିନା ଏବଂ ଏକ ବନ୍ଦ 16 ହେଟେରୋଡାଇମର୍ LH1 ଲୁପ୍। ଆମର ଗଠନ Rps. palustris ର RC-LH1 କମ୍ପ୍ଲେକ୍ସର ବୁଝାମଣାରେ ଏକ ପଦକ୍ଷେପ ପରିବର୍ତ୍ତନକୁ ପ୍ରତିନିଧିତ୍ୱ କରେ, କାରଣ ଆମେ ପ୍ରତ୍ୟେକ ପ୍ରକାରର ସମଜାତୀୟ ଜନସଂଖ୍ୟା ବିଶ୍ଳେଷଣ କରିଛୁ ଏବଂ ପ୍ରତ୍ୟେକ ପେପ୍ଟାଇଡ୍ ଏବଂ ବନ୍ଧିତ ପିଗମେଣ୍ଟ ଏବଂ ସମ୍ବନ୍ଧିତ ଲିପିଡ୍ ଏବଂ କ୍ୱିନୋନ୍ ସ୍ପଷ୍ଟ ଭାବରେ ନ୍ୟସ୍ତ କରିବା ପାଇଁ ପର୍ଯ୍ୟାପ୍ତ ରିଜୋଲ୍ୟୁସନ୍ ଅଛି। ଏହି ଗଠନଗୁଡ଼ିକର ତୁଳନା ଦର୍ଶାଉଛି ଯେ ତିନୋଟି TMH ପ୍ରୋଟିନ୍-W ଯାହା ଏପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ ଅନ୍ୟ କୌଣସି RC-LH1 କମ୍ପ୍ଲେକ୍ସରେ ମିଳିନାହିଁ, ତାହା କ୍ୱିନୋନ୍/କ୍ୱିନୋଲୋନ୍ ବିନିମୟକୁ ତ୍ୱରାନ୍ୱିତ କରିବା ପାଇଁ ଏକ କ୍ୱିନୋନ୍ ଚ୍ୟାନେଲ୍ ସୃଷ୍ଟି କରେ। ସଂରକ୍ଷିତ ଲିପିଡ୍ ଏବଂ କ୍ୱିନୋନ୍ ବନ୍ଧନ ସ୍ଥାନଗୁଡ଼ିକର ସଂଖ୍ୟା ଚିହ୍ନଟ ହୋଇଛି, ଏବଂ ଆମେ କ୍ୱିନୋନ୍ ଏବଂ RC ମିଶ୍ରଣ ପରେ ଏକ ନୂତନ ରୂପାନ୍ତରାତ୍ମକ ପରିବର୍ତ୍ତନ ପ୍ରକାଶ କରିଛୁ, ଯାହା ଅମ୍ଳଜାନଯୁକ୍ତ ଫଟୋଟ୍ରୋଫିକ୍ ଜୀବମାନଙ୍କର ଫଟୋସିଷ୍ଟମ୍ II (PSII) RC ପାଇଁ ଉପଯୁକ୍ତ ହୋଇପାରେ। ଆମର ଫଳାଫଳଗୁଡ଼ିକ ବାଇଗଣି ଫଟୋଟ୍ରୋଫିକ୍ ଜୀବାଣୁର RC-LH1 କୋର୍ କମ୍ପ୍ଲେକ୍ସରେ କ୍ୱିନୋନ୍/କ୍ୱିନୋଲୋନ୍ ବନ୍ଧନ ଏବଂ ବିନିମୟର ଗତିବିଧି ବିଷୟରେ ନୂତନ ଅନ୍ତର୍ଦୃଷ୍ଟି ପ୍ରଦାନ କରେ।
Rps. palustris ରେ ମିଳୁଥିବା ଦୁଇଟି ଜଟିଳର ବିସ୍ତୃତ ଅଧ୍ୟୟନକୁ ସହଜ କରିବା ପାଇଁ, ଆମେ ପ୍ରତ୍ୟେକ RC-LH1 କୁ ଜୈବ ରାସାୟନିକ ପଦ୍ଧତି ଦ୍ୱାରା ପୃଥକ କରୁଛୁ। ପ୍ରୋଟିନ୍ W-ଅଭାବୀ ଜଟିଳ (ଏଠାରେ ΔpufW ଭାବରେ ଉଲ୍ଲେଖ କରାଯାଇଛି) pufW ଜିନ୍ (16) ଅଭାବୀ ଷ୍ଟ୍ରେନରୁ ପରିଷ୍କାର କରାଯାଇଥିଲା, ଏବଂ କେବଳ ଗୋଟିଏ RC-LH1 ଜଟିଳ ଉତ୍ପାଦନ କରାଯାଇପାରିବ। ପ୍ରୋଟିନ୍ W-ଧାରଣକାରୀ ଜଟିଳ ଏକ ଷ୍ଟ୍ରେନ ଦ୍ୱାରା ଉତ୍ପାଦିତ ହୁଏ। ଏହି ଷ୍ଟ୍ରେନର ପ୍ରୋଟିନ୍ W କୁ ଏହାର C-ଟର୍ମିନସରେ 10x His ଟ୍ୟାଗ୍ ସହିତ ପରିବର୍ତ୍ତନ କରାଯାଏ, ଯାହା ଫଳରେ ପ୍ରୋଟିନ୍ W-ଧାରଣକାରୀ ଜଟିଳକୁ ଧାତୁକୁ ସ୍ଥିର କରି ଅଧିକାଂଶ ଅଭାବୀ ପ୍ରୋଟିନ୍ W ସହିତ ପ୍ରଭାବଶାଳୀ ଭାବରେ ଯୋଡାଯାଇପାରିବ। ଜଟିଳକୁ ପ୍ରଭାବଶାଳୀ ଭାବରେ ପୃଥକ କରାଯାଇଛି (16) ଆଫିନିଟି କ୍ରୋମାଟୋଗ୍ରାଫି (IMAC)।
ଚିତ୍ର 1 ରେ ଦେଖାଯାଇଥିବା ପରି, ଉଭୟ କମ୍ପ୍ଲେକ୍ସରେ ଏକ LH1 ଆଣ୍ଟେନା ଦ୍ୱାରା ଘେରି ରହିଥିବା ଏକ ତିନୋଟି ଉପ-ୟୁନିଟ୍ RC (RC-L, RC-M ଏବଂ RC-H) ରହିଛି। ପ୍ରୋଟିନ୍-W ଅଭାବୀ ଜଟିଳର 2.80-A ଗଠନ 16 αβ ହେଟେରୋଡାଇମର୍ ଦେଖାଏ, ଯାହା RC କୁ ସମ୍ପୂର୍ଣ୍ଣ ଭାବରେ ଘେରି ରହିଥିବା ଏକ ବନ୍ଦ LH1 ଲୁପ୍ ଗଠନ କରେ, ଏହାକୁ ପରେ RC-LH116 ଜଟିଳ ଭାବରେ ଉଲ୍ଲେଖ କରାଯାଇଛି। ପ୍ରୋଟିନ୍-W ଧାରଣ କରୁଥିବା ଜଟିଳର 2.65Å ଗଠନରେ ପ୍ରୋଟିନ୍-W ଦ୍ୱାରା ବାଧାପ୍ରାପ୍ତ ଏକ 14-ହେଟେରୋଡାଇମର୍ LH1 ଅଛି, ଯାହାକୁ ପରେ RC-LH114-W ଭାବରେ ଉଲ୍ଲେଖ କରାଯାଇଛି।
(A ଏବଂ B) ଯୌଗିକର ପୃଷ୍ଠ ପ୍ରତିନିଧିତ୍ୱ। (C ଏବଂ D) ରଡ୍‌ରେ ପ୍ରକାଶିତ ବନ୍ଧିତ ରଙ୍ଗକ। (E ଏବଂ F) ସାଇଟୋପ୍ଲାଜମିକ୍ ପୃଷ୍ଠରୁ ପର୍ଯ୍ୟବେକ୍ଷିତ ଜଟିଳଗୁଡ଼ିକରେ କାର୍ଟୁନରେ ପ୍ରତିନିଧିତ୍ୱ କରାଯାଇଥିବା ପେପ୍ଟାଇଡ୍ସ ଏବଂ LH1 ସବୟୁନିଟ୍ ଅଛି, ଏବଂ ପ୍ରୋଟିନ୍-W ଫାଙ୍କରୁ ଘଣ୍ଟାକଣ୍ଟା ଦିଗରେ ସଂଖ୍ୟା ଦିଆଯାଇଛି [Rba ସଂଖ୍ୟା ସହିତ ସୁସଙ୍ଗତ। ସ୍ଫାଏରୋଇଡ୍ସ ଜଟିଳ (13)]। LH1-α ପାଇଁ, ପ୍ରୋଟିନ୍ ସବୟୁନିଟ୍‌ର ରଙ୍ଗ ହଳଦିଆ; LH1-β ପାଇଁ, ପ୍ରୋଟିନ୍ ସବୟୁନିଟ୍‌ର ରଙ୍ଗ ନୀଳ; ପ୍ରୋଟିନ୍-W ପାଇଁ, ପ୍ରୋଟିନ୍ ଲାଲ; RC-H ପାଇଁ, ଏହା ସୟାନ୍; RC-L ପାଇଁ, ଏହା କମଳା; RC-M ପାଇଁ, ମାଜେଣ୍ଟା। ସହକାରକଗୁଡ଼ିକୁ ରଡ୍ ଦ୍ୱାରା ପ୍ରତିନିଧିତ୍ୱ କରାଯାଏ, ସବୁଜ BChl ଏବଂ BPh a ଅଣୁକୁ ପ୍ରତିନିଧିତ୍ୱ କରେ, ବାଇଗଣୀ କ୍ୟାରୋଟିନୋଇଡ୍ସକୁ ପ୍ରତିନିଧିତ୍ୱ କରେ, ଏବଂ ହଳଦିଆ UQ10 ଅଣୁକୁ ପ୍ରତିନିଧିତ୍ୱ କରେ। (G ଏବଂ H) RC-LH114-W ଜଟିଳ (G) ଏବଂ RC-LH116 ଜଟିଳ (H) ର ସମତୁଲ୍ୟ ଅଞ୍ଚଳରେ ପ୍ରୋଟିନ୍-W ଫାଙ୍କକୁ ବର୍ଦ୍ଧିତ ଦୃଶ୍ୟ। ସହକାରକଗୁଡ଼ିକ ସ୍ଥାନ ପୂରଣ ଆକାରରେ ପ୍ରଦର୍ଶିତ ହୁଏ, ଚିଲେଟେଡ୍ କ୍ୱିନୋନ୍ ନୀଳ ରଙ୍ଗରେ ପ୍ରଦର୍ଶିତ ହୁଏ। ପ୍ରୋଟିନ୍-W ବ୍ୟବଧାନକୁ (G) ରେ ଏକ ନୀଳ ଡ୍ୟାସ୍ ରେଖା ଦ୍ୱାରା ହାଇଲାଇଟ୍ କରାଯାଏ, ଏବଂ LH116 ରିଙ୍ଗରେ କ୍ୱିନୋନ୍/କ୍ୱିନୋଲୋଲ୍ ବିସ୍ତାର କରୁଥିବା ଛୋଟ ଗାତଗୁଡ଼ିକୁ (H) ରେ ଏକ କଳା ଡ୍ୟାସ୍ ରେଖା ଦ୍ୱାରା ହାଇଲାଇଟ୍ କରାଯାଏ।
ଚିତ୍ର 1 (A ଏବଂ B) RC କୁ LH1αβ ହେଟୋରୋଡାଇମରର ଖୋଲା କିମ୍ବା ବନ୍ଦ ଆରେ ଦ୍ୱାରା ଘେରି ରହିଥିବା ଦର୍ଶାଉଛି, ଯାହା ମଧ୍ୟରୁ ପ୍ରତ୍ୟେକ ଦୁଇଟି BChl ଏବଂ ଗୋଟିଏ କ୍ୟାରୋଟିନଏଡ୍ (ଚିତ୍ର 1, C ଏବଂ D)କୁ ବାନ୍ଧିଥାଏ। ପୂର୍ବ ଅଧ୍ୟୟନଗୁଡିକ ଦେଖାଇଛି ଯେ Rps ହେଉଛି LH1 ଜଟିଳ। ସ୍ପାଇରୁଲିନା ଜାନ୍ଥିନର ଜୈବସଂଶ୍ଳେଷଣ ପଥ, ଏହି ପ୍ରଜାତିଗୁଡ଼ିକରେ କ୍ୟାରୋଟିନଏଡ୍ସର ମିଶ୍ରିତ ଜନସଂଖ୍ୟା ଥାଏ (17)। ତଥାପି, ସ୍ପାଇରୋପିରୋକ୍ସାଥିନ୍ ହେଉଛି ପ୍ରଭାବଶାଳୀ କ୍ୟାରୋଟିନଏଡ୍ ଏବଂ ଏହାର ଘନତା ସନ୍ତୋଷଜନକ। ତେଣୁ, ଆମେ ସମସ୍ତ LH1 ବନ୍ଧନ ସ୍ଥାନରେ ସ୍ପାଇରୋକ୍ସାଥିନ୍ ମଡେଲ୍ କରିବାକୁ ବାଛିଲୁ। ଆଲଫା ଏବଂ ବିଟା ପଲିପେପ୍ଟାଇଡ୍ ହେଉଛି ଏକକ TMH ଯାହାର ଛୋଟ ଝିଲ୍ଲୀ ବାହ୍ୟ କ୍ଷେତ୍ର (ଚିତ୍ର 1, A, B, E, ଏବଂ F) ଅଟେ। ଯଦିଓ C-ଟର୍ମିନସରେ 17 ଅବଶିଷ୍ଟାଂଶର ଘନତା ପରିଲକ୍ଷିତ ହୋଇନଥିଲା, ଉଭୟ ଜଟିଳରେ ଆଲଫା ପଲିପେପ୍ଟାଇଡ୍ Met1 ରୁ Ala46 କୁ ବିଭାଜିତ ହୋଇଥିଲା। RC-LH116 ରେ Gly4 ରୁ Tyr52 କୁ ଏବଂ RC-LH114-W ରେ Ser5 ରୁ Tyr52 କୁ β ପଲିପେପ୍ଟାଇଡ୍ ହ୍ରାସ କରାଯାଇଥିଲା। 3 କିମ୍ବା 4 N-ଟର୍ମିନାଲ୍ କିମ୍ବା 13 C-ଟର୍ମିନାଲ୍ ଅବଶିଷ୍ଟ୍ୟର କୌଣସି ଘନତା ପରିଲକ୍ଷିତ ହୋଇନଥିଲା (ଚିତ୍ର S1)। ବନ୍ୟ-ପ୍ରକାର ଷ୍ଟ୍ରେନରୁ ପ୍ରସ୍ତୁତ ମିଶ୍ରିତ RC-LH1 କମ୍ପ୍ଲେକ୍ସର ମାସ୍ ସ୍ପେକ୍ଟ୍ରୋମେଟ୍ରି ବିଶ୍ଳେଷଣ ଦର୍ଶାଇଥିଲା ଯେ ଅନୁପସ୍ଥିତ ଅଞ୍ଚଳ ଏହି ପେପ୍ଟାଇଡ୍‌ଗୁଡ଼ିକର ହେଟେରୋଲୋଗସ୍ କ୍ଲିଭେଜ୍ (ଚିତ୍ର S1 ଏବଂ S2) ର ଫଳାଫଳ ଥିଲା। α-Met1 ର N-ଟର୍ମିନାଲ୍ ଫର୍ମିଲେସନ୍ ମଧ୍ୟ ପରିଲକ୍ଷିତ ହୋଇଥିଲା (f)। ବିଶ୍ଳେଷଣ ଦେଖାଇଥିଲା ଯେ α-ପେପ୍ଟାଇଡ୍ ରେ fMet1 ରୁ Asp42/Ala46/Ala47/Ala50 ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ ଅବଶିଷ୍ଟ୍ୟ ରହିଥାଏ, ଏବଂ β-ପେପ୍ଟାଇଡ୍ ରେ Ser2 ରୁ Ala53 ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ ଅବଶିଷ୍ଟ୍ୟ ରହିଥାଏ, ଯାହା ନିମ୍ନ-ତାପମାନ EM ଘନତା ମାନଚିତ୍ର ସହିତ ଉତ୍ତମ ସହମତ।
α-His29 ଏବଂ β-His36 ର ସମନ୍ୱୟ BChls କୁ ମୁହାଁମୁହିଁ କରିଥାଏ; ପ୍ରତ୍ୟେକ αβ ହେଟେରୋଡାଇମର ଏହାର ପଡ଼ୋଶୀମାନଙ୍କ ସହିତ ଏକତ୍ରିତ ହୋଇ RC ଚାରିପାଖରେ ଏକ ଖୋଲା ଲୁପ୍ (RC-LH114-W) କିମ୍ବା ଏକ ବନ୍ଦ ଲୁପ୍ (RC-LH116) ଗଠନ କରେ। ଏକ୍ସାଇଟନ୍ ଯୁଗ୍ମ ପିଗମେଣ୍ଟ ଆରେ (ଚିତ୍ର 1, C ଏବଂ D)। RC-LH114-W ର 877 nm ବ୍ୟାଣ୍ଡ ସହିତ ତୁଳନା କଲେ, RC-LH116 ର 880 nm ଅବଶୋଷଣ ଲାଲ ଶିଫ୍ଟ 3 nm (ଚିତ୍ର 2A)। ତଥାପି, ବୃତ୍ତାକାର ଡାଇକ୍ରୋଇଜମ୍ ସ୍ପେକ୍ଟ୍ରମ୍ ପ୍ରାୟ ସମାନ (ଚିତ୍ର 2B), ଏହା ସୂଚିତ କରେ ଯେ ଖୋଲା ଏବଂ ବନ୍ଦ ଲୁପ୍ ମଧ୍ୟରେ ସ୍ପଷ୍ଟ ପାର୍ଥକ୍ୟ ଥିଲେ ମଧ୍ୟ, BChls ର ସ୍ଥାନୀୟ ପରିବେଶ ବହୁତ ସମାନ। ଅବଶୋଷଣ ଲାଲଶିଫ୍ଟ ହ୍ରାସିତ ତାପଜ ଗତି ଏବଂ ବନ୍ଦ ଲୁପ୍ (18, 19) ରେ ବର୍ଦ୍ଧିତ ସ୍ଥିରତା, ବନ୍ଦ ଲୁପ୍ (20, 21) ଦ୍ୱାରା ହୋଇଥିବା ପିଗମେଣ୍ଟ ଯୋଡରେ ପରିବର୍ତ୍ତନ, କିମ୍ବା ଏହି ଦୁଇଟି ପ୍ରଭାବର ମିଶ୍ରଣ (11) ର ଫଳାଫଳ ହୋଇପାରେ।
(A) ଅଲ୍ଟ୍ରାଭାୟୋଲେଟ/ଦୃଶ୍ୟମାନ/ନିକଟ-ଇନଫ୍ରାରେଡ୍ ଅବଶୋଷଣ ସ୍ପେକ୍ଟ୍ରମ୍, ଯାହାର ଶିଖରଗୁଡ଼ିକୁ ସେମାନଙ୍କର ଅନୁରୂପ ରଞ୍ଜକ ସହିତ ଚିହ୍ନିତ କରାଯାଏ ଏବଂ 775 nm ରେ BPh ଶିଖରକୁ ସାଧାରଣ କରାଯାଏ। (B) ବୃତ୍ତାକାର ଦ୍ୱି-ଅଶ୍ଳୀଳ ସ୍ପେକ୍ଟ୍ରମ୍ 805 nm ରେ BChl ଅବଶୋଷଣକୁ ସାଧାରଣ କରାଯାଏ। (C ଏବଂ D) RC-LH114-W ଜଟିଳ (C) ଏବଂ RC-LH116 ଜଟିଳ (D) ର ସମୟ-ସମାଧାନିତ ଅବଶୋଷଣ ସ୍ପେକ୍ଟ୍ରରୁ ଚୟନିତ ΔA ସ୍ପେକ୍ଟ୍ର। ଉତ୍ତମ ତୁଳନାତ୍ମକତା ପାଇଁ, ସମସ୍ତ ସ୍ପେକ୍ଟ୍ରାକୁ 0.2 ps ରେ ∆A ର ∆A କୁ ସାଧାରଣ କରାଯାଏ। (E) UQ2 ର ବିଭିନ୍ନ ସାନ୍ଦ୍ରତାର ଉପସ୍ଥିତିରେ ବିକିରଣ ପରେ ସାଇଟୋକ୍ରୋମ୍ c2 ଅକ୍ସିଡେସନର ହାର (କଞ୍ଚା ତଥ୍ୟ ପାଇଁ ଚିତ୍ର S8 ଦେଖନ୍ତୁ)। (F) ନିମ୍ନ, ମଧ୍ୟମ କିମ୍ବା ଉଚ୍ଚ ତୀବ୍ରତା ଆଲୋକ (10, 30 କିମ୍ବା 300μMm-2 s-1, ଯଥାକ୍ରମେ) ତଳେ ବଢ଼ୁଥିବା କୋଷଗୁଡ଼ିକରେ, ପ୍ରୋଟିନ୍ W ଏବଂ RC-L ଶୁଦ୍ଧ ଜଟିଳ ଏବଂ ପୃଥକ ଝିଲ୍ଲୀ ଅନୁପାତରେ ଉପୟୁକ୍ତ। SDS-ପଲିଆକ୍ରିଲାମାଇଡ୍ ଜେଲ୍ ଇଲେକ୍ଟ୍ରୋଫୋରେସିସ୍ ଏବଂ ଇମ୍ୟୁନୋଏସେ ଦ୍ୱାରା ପ୍ରୋଟିନ୍ ସ୍ତର ନିର୍ଣ୍ଣୟ କରନ୍ତୁ (କଞ୍ଚା ତଥ୍ୟ ପାଇଁ ଚିତ୍ର S9 ଦେଖନ୍ତୁ)। ପରିଷ୍କୃତ RC-LH114-W କମ୍ପ୍ଲେକ୍ସ ସହିତ ଅନୁପାତ ନିର୍ଣ୍ଣୟ କରନ୍ତୁ। କମ୍ପ୍ଲେକ୍ସର ପ୍ରୋଟିନ୍-W ସହିତ RC-L ର ଷ୍ଟୋଇଚିଓମେଟ୍ରିକ୍ ଅନୁପାତ 1:1।
RC-LH114-W (ଚିତ୍ର 1, A, C, ଏବଂ E) ର ବିକୃତ αβ14 ଲୁପ୍ ରେ ସ୍ଥାନ 1 ରେ ଥିବା BChls RC-LH116 (ଚିତ୍ର 1, B, D, ଏବଂ F, ଏବଂ ଚିତ୍ର S3) ର ସମକକ୍ଷ BChls ତୁଳନାରେ RC ପ୍ରାଥମିକ ଦାତା (P) ର 6.8Å ନିକଟତର; ତଥାପି, ଦୁଇଟି ଜଟିଳର କ୍ଷଣସ୍ଥାୟୀ ଅବଶୋଷଣ ଗତିବିଧି ଦର୍ଶାଏ ଯେ RC-LH114-W ଏବଂ RC-LH116 ପାଇଁ, LH1 ରୁ RC କୁ ଉତ୍ତେଜନା ଶକ୍ତି ସ୍ଥାନାନ୍ତର ସମୟ ସ୍ଥିରାଙ୍କ 40 ±4 ଏବଂ 44±3 ps (ଚିତ୍ର 2)। , C ଏବଂ D, ଚିତ୍ର S4 ଏବଂ ସାରଣୀ S2)। RC ମଧ୍ୟରେ ଇଲେକ୍ଟ୍ରୋନିକ୍ ସ୍ଥାନାନ୍ତରରେ ମଧ୍ୟ କୌଣସି ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ପାର୍ଥକ୍ୟ ନାହିଁ (ଚିତ୍ର S5 ଏବଂ ସମ୍ବନ୍ଧିତ ପରିପୂରକ ପାଠ୍ୟ)। ଆମେ ସନ୍ଦେହ କରୁଛୁ ଯେ LH1 ଏବଂ RC-P ମଧ୍ୟରେ ଶକ୍ତି ସ୍ଥାନାନ୍ତର ସମୟର ନିକଟତର ପତ୍ର ଦୁଇଟି LH1 ଲୁପ୍ ରେ ଅଧିକାଂଶ BChl ର ସମାନ ଦୂରତା, କୋଣ ଏବଂ ସମ୍ଭାବ୍ୟ ଶକ୍ତି ଯୋଗୁଁ। ଏହା ଦେଖାଯାଉଛି ଯେ ସର୍ବନିମ୍ନ ଦୂରତାରେ ପହଞ୍ଚିବା ପାଇଁ LH1 ଶକ୍ତି ଢାଞ୍ଚାକୁ ଅନୁସନ୍ଧାନ କରିବା ସବଅପ୍ଟିମାଲ୍ ସାଇଟ୍‌ଗୁଡ଼ିକରୁ RCକୁ ସିଧାସଳଖ ଶକ୍ତି ସ୍ଥାନାନ୍ତର ଅପେକ୍ଷା ଦ୍ରୁତ ନୁହେଁ। RC-LH114-W ରେ ଖୋଲା-ଲୁପ୍ LH1 ଲୁପ୍ ମଧ୍ୟ ଗଠନାତ୍ମକ ବିଶ୍ଳେଷଣ ପାଇଁ ନିମ୍ନ ତାପମାତ୍ରା ପରିସ୍ଥିତିରେ ନଗଣ୍ୟ ତାପଜ ଗତି ଦେଇପାରେ, ଏବଂ RC 1 ସ୍ଥିତିରେ βBChls ର ପିଗ୍ନେସନ୍ ଦୂରତାରୁ କୋଠରୀ ତାପମାତ୍ରାରେ ଏକ ଲମ୍ବା αβ14 ରିଙ୍ଗ କନଫର୍ମେସନ୍ ଅଛି।
RC-LH116 କମ୍ପ୍ଲେକ୍ସରେ 32 BChls ଏବଂ 16 କାରୋଟିନୋଏଡ୍ ଅଛି, ଏବଂ ଏହାର ସାମଗ୍ରିକ ବ୍ୟବସ୍ଥା ଥର୍ମୋକ୍ରୋମାଟିୟମ୍ (Tch.) ପିଡପିଡମ୍ [ପ୍ରୋଟିନ୍ ଡାଟା ବ୍ୟାଙ୍କ (PDB) ID 5Y5S] (9), ଥିଓରହୋଡୋଭିବ୍ରିଓ (Trv.) 970 ଷ୍ଟ୍ରେନ୍ (PDB ID 7C9R) (12) ଏବଂ ସବୁଜ ଶୈବାଳ (Blc.viridis) (PDB ID 6ET5) (10) ରୁ ପ୍ରାପ୍ତ ସମାନ। ସଂରଚନା ପରେ, αβ ହେଟେରୋଡାଇମରର ସ୍ଥିତିରେ କେବଳ ଛୋଟ ବିଚ୍ୟୁତି ପରିଲକ୍ଷିତ ହୋଇଥିଲା, ବିଶେଷକରି 1-5, 15, ଏବଂ 16 (ଚିତ୍ର S6)। ପ୍ରୋଟିନ୍-W ର ଉପସ୍ଥିତି LH1 ର ଗଠନ ଉପରେ ଏକ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ପ୍ରଭାବ ପକାଇଥାଏ। ଏହାର ତିନୋଟି TMH ଛୋଟ ଲୁପ୍ ଦ୍ୱାରା ସଂଯୁକ୍ତ, କମ୍ପ୍ଲେକ୍ସର ଲୁମେନ୍ ପାର୍ଶ୍ୱରେ N-ଟର୍ମିନାଲ ଏବଂ ସାଇଟୋପ୍ଲାଜମିକ୍ ପାର୍ଶ୍ୱରେ C-ଟର୍ମିନାଲ (ଚିତ୍ର 1A ଏବଂ 3, A ରୁ D)। ପ୍ରୋଟିନ୍-W ମୁଖ୍ୟତଃ ଜଳବିହୀନ (ଚିତ୍ର 3B), ଏବଂ TMH2 ଏବଂ TMH3 ଏକ ଟ୍ରାନ୍ସମେମ୍ବ୍ରେନ୍ ପୃଷ୍ଠ ଗଠନ କରିବା ପାଇଁ LH1αβ-14 ସହିତ ପାରସ୍ପରିକ କ୍ରିୟା କରନ୍ତି (ଚିତ୍ର 3, B ଏବଂ E ରୁ G)। ଇଣ୍ଟରଫେସ୍ ମୁଖ୍ୟତଃ ଟ୍ରାନ୍ସମେମ୍ବ୍ରେନ୍ ଅଞ୍ଚଳରେ Phe, Leu ଏବଂ Val ଅବଶିଷ୍ଟାଂଶ ଦ୍ୱାରା ଗଠିତ। ଏହି ଅବଶିଷ୍ଟାଂଶ ଜଳବିହୀନ ଆମିନୋ ଏସିଡ୍ ଏବଂ αβ-14 ରଞ୍ଜକ ସହିତ ସ୍ଥାପିତ। କିଛି ଧ୍ରୁବୀୟ ଅବଶିଷ୍ଟାଂଶ ମଧ୍ୟ ପାରସ୍ପରିକ କ୍ରିୟାରେ ଯୋଗଦାନ କରନ୍ତି, ଯେଉଁଥିରେ ଜଟିଳ ଗହ୍ବର ପୃଷ୍ଠରେ W-Thr68 ଏବଂ β-Trp42 ମଧ୍ୟରେ ହାଇଡ୍ରୋଜେନ୍ ବନ୍ଧନ ଅନ୍ତର୍ଭୁକ୍ତ (ଚିତ୍ର 3, F ଏବଂ G)। ସାଇଟୋପ୍ଲାଜମ୍ ପୃଷ୍ଠରେ, Gln34 αβ-14 କାରୋଟିନୋଇଡ୍ସର କେଟୋ ଗୋଷ୍ଠୀ ସହିତ ସଂଲଗ୍ନ। ଏହା ସହିତ, n-ଡୋଡେସିଲ୍ β-d-ମାଲ୍ଟୋସାଇଡ୍ (β-DDM) ଅଣୁ ସମାଧାନ ହୋଇଥିଲା, ଏବଂ ଏହାର ଜଳବିହୀନ ଲାଞ୍ଜ ପ୍ରୋଟିନ୍-W ଏବଂ αβ-14 ମଧ୍ୟରେ ଇଣ୍ଟରଫେସ୍ ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ ବିସ୍ତାରିତ ହୋଇଥିଲା, ଏବଂ ଲିପିଡ୍ ଲାଞ୍ଜ ଶରୀରରେ ଅବସ୍ଥିତ ହୋଇପାରେ। ଆମେ ଏହା ମଧ୍ୟ ଲକ୍ଷ୍ୟ କରିଛୁ ଯେ ପ୍ରୋଟିନ୍ W ଏବଂ RCH ର C-ଟର୍ମିନାଲ ରିଜୋଲ୍ୟୁସନ୍ ଅଞ୍ଚଳଗୁଡ଼ିକ ବହୁତ ନିକଟତର, କିନ୍ତୁ ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ପାରସ୍ପରିକ କ୍ରିୟା ଗଠନର ପରିସର ମଧ୍ୟରେ ନୁହେଁ (ଚିତ୍ର 1, A ଏବଂ E)। ତଥାପି, ଏହି ଦୁଇଟି ପ୍ରୋଟିନ୍ ର ଅସମାହିତ C-ଟର୍ମିନାଲ ଆମିନୋ ଏସିଡ୍ ରେ ପାରସ୍ପରିକ କ୍ରିୟା ହୋଇପାରେ, ଯାହା RC-LH114-W ଜଟିଳର ସମାବେଶ ସମୟରେ ପ୍ରୋଟିନ୍-W ର ନିଯୁକ୍ତି ପାଇଁ ଏକ ଯନ୍ତ୍ରପାତି ପ୍ରଦାନ କରିପାରେ।
(A) ପ୍ରୋଟିନ-W, ଯାହା କାର୍ଟୁନ ଆକାରରେ LH1αβ14 ସହିତ ଇଣ୍ଟରଫେସକୁ ସାମ୍ନା କରେ, ଏହାର ଏକ ରଡ୍-ଆକୃତିର ପାର୍ଶ୍ୱ ଶୃଙ୍ଖଳ (ଲାଲ) ଅଛି, ଯାହା ଇଲେକ୍ଟ୍ରୋଷ୍ଟାଟିକ୍ ପୋଟେନସିଆଲ୍ ଚିତ୍ରର ଏକ ଅଂଶରେ ପ୍ରଦର୍ଶିତ ହୁଏ (0.13 ର କଣ୍ଟୋର ସ୍ତର ସହିତ ସ୍ୱଚ୍ଛ ଧୂସର ପୃଷ୍ଠ)। (B) ପ୍ରୋଟିନ-W ଏକ ଜଳଫୋବିକ୍ ରଙ୍ଗୀନ ପୃଷ୍ଠ ଦ୍ୱାରା ପ୍ରତିନିଧିତ୍ୱ କରାଯାଏ। ଧ୍ରୁବୀୟ ଏବଂ ଚାର୍ଜିତ କ୍ଷେତ୍ରଗୁଡ଼ିକ ସୟାନ୍ ରଙ୍ଗରେ ପ୍ରଦର୍ଶିତ ହୁଏ, ଜଳଫୋବିକ୍ କ୍ଷେତ୍ରଗୁଡ଼ିକ ଧଳା ରଙ୍ଗରେ ପ୍ରଦର୍ଶିତ ହୁଏ, ଏବଂ ଦୃଢ଼ ଜଳଫୋବିକ୍ କ୍ଷେତ୍ରଗୁଡ଼ିକ କମଳା ରଙ୍ଗରେ ପ୍ରଦର୍ଶିତ ହୁଏ। (C ଏବଂ D) କାର୍ଟୁନରେ ପ୍ରୋଟିନ-W ପ୍ରତିନିଧିତ୍ୱ କରାଯାଏ, ଏହାର ଦିଗନିର୍ଦ୍ଦେଶ (A) (C) ପରି ସମାନ, ଏବଂ 180° (D) ଦ୍ୱାରା ଘୂର୍ଣ୍ଣିତ ହୁଏ। କ୍ରମରେ ସ୍ଥିତି ଅନୁସାରେ, ପୃଥକ ଅବଶିଷ୍ଟାଂଶଗୁଡ଼ିକ ଏକ ଇନ୍ଦ୍ରଧନୁ ରଙ୍ଗ ଯୋଜନା ଗ୍ରହଣ କରନ୍ତି, ଯେଉଁଠାରେ N-ଟର୍ମିନାଲ ନୀଳ ଏବଂ C-ଟର୍ମିନାଲ ଲାଲ। (E) ପ୍ରୋଟିନ-W (A) ପରି ସମାନ ଦୃଶ୍ୟରେ, ଏବଂ ପ୍ରୋଟିନ-W:LH1 ର ଇଣ୍ଟରଫେସରେ ଅବଶିଷ୍ଟାଂଶଗୁଡ଼ିକୁ ସଂଲଗ୍ନ ଚିହ୍ନ ସହିତ ରଡ୍ ଦ୍ୱାରା ପ୍ରତିନିଧିତ୍ୱ କରାଯାଏ। (F) କାର୍ଟୁନ ପ୍ରତିନିଧିତ୍ୱରେ ପ୍ରୋଟିନ-W କୁ (E) ଏବଂ LH1αβ14 ତୁଳନାରେ 90° ଘୂରାଯାଇଛି, ଏବଂ ବାର ପ୍ରତିନିଧିତ୍ୱରେ ଇଣ୍ଟରଫେସ୍ ଅବଶିଷ୍ଟାଂଶ ତୁଳନାରେ। ବିଟା ପଲିପେପ୍ଟାଇଡ୍ ରୁ ଅଧିକ ଝୁଲୁଥିବା ଅବଶିଷ୍ଟାଂଶକୁ ଲେବଲ୍ କରାଯାଇଛି। ଚିତ୍ର 1 ର ରଙ୍ଗ ସହିତ ମେଳ ଖାଉଥିବା ଏକ ବାର ଭାବରେ ସହକାରକକୁ ଦର୍ଶାଯାଇଛି, ବିଘଟିତ β-DDM ଧୂସର ରଙ୍ଗରେ ଦେଖାଯାଇଛି, ଏବଂ ଅମ୍ଳଜାନ ଲାଲ ରଙ୍ଗରେ ଦେଖାଯାଇଛି। (G) (F) ରେ ଦୃଶ୍ୟକୁ 180° ଘୂରାଯାଇଛି, ଲେବଲ୍ ହୋଇଥିବା ଆଲଫା ପଲିପେପ୍ଟାଇଡ୍ ର ପ୍ରମୁଖ ଅବଶିଷ୍ଟାଂଶ ସହିତ।
ପ୍ରୋଟିନ୍-W ଏକ αβ ହେଟେରୋଡାଇମର (ଚିତ୍ର 1F ରେ 15ତମ) କୁ ବଦଳାଇଥାଏ, ଯାହା ଦ୍ଵାରା ଲୁପ୍ ବନ୍ଦ ହେବା ଏବଂ ପ୍ରଥମ ତିନୋଟି αβ ହେଟେରୋଡାଇମରକୁ ନୁଆଁଇବା ରୋକିଥାଏ। ଏହା ଦେଖାଯାଇଥିଲା ଯେ ଫିଲ୍ମ ସାଧାରଣ ତୁଳନାରେ ପ୍ରଥମ αβ-1 ହେଟେରୋଡାଇମରର ସର୍ବାଧିକ ଢଳା କୋଣ 25° ରୁ 29° (ଚିତ୍ର 1, A ଏବଂ E) ଥିଲା, ଯାହା RC A ତୀକ୍ଷ୍ଣ ବିପରୀତ-LH116 (ଚିତ୍ର 1, B ଏବଂ F) ରେ αβ-1 ର 2° ରୁ 8° ଢଳା ଦ୍ୱାରା ଗଠିତ ହୋଇଥିଲା। ଦ୍ୱିତୀୟ ଏବଂ ତୃତୀୟ ହେଟେରୋଡାଇମରଗୁଡ଼ିକ ଯଥାକ୍ରମେ 12° ରୁ 22° ଏବଂ 5° ରୁ 10° ରେ ଢଳା ହୋଇଥାନ୍ତି। RC ର ଷ୍ଟେରିକ୍ ବାଧା ଯୋଗୁଁ, αβ-1 ର ଢଳା αβ ର ଦ୍ୱିତୀୟ ଯୋଡ଼ି (ଯାହା ଚିତ୍ର 1F ରେ 16ତମ αβ ସହିତ ମେଳ ଖାଏ) ଅନ୍ତର୍ଭୁକ୍ତ କରେ ନାହିଁ, ତେଣୁ LH1 ରିଙ୍ଗରେ ଏକ ସ୍ପଷ୍ଟ ଫାଙ୍କ ସୃଷ୍ଟି କରେ (ଚିତ୍ର 1, A ଏବଂ E)। ଦୁଇଟି αβ ହେଟେରୋଡାଇମରର ଅଭାବ ଯୋଗୁଁ, ଚାରୋଟି BChl ଏବଂ ଦୁଇଟି କ୍ୟାରୋଟିନୋଏଡ୍ ନଷ୍ଟ ହେବା ସହିତ, କୌଣସି କ୍ୟାରୋଟିନୋଏଡ୍ ବିନ୍ଦୁ αβ-1 ସବୟୁନିଟ୍ ସହିତ ବାନ୍ଧି ହୁଏ ନାହିଁ, ଯାହା ଫଳରେ ଏକ LH114-W ରିଙ୍ଗ୍ ସୃଷ୍ଟି ହୁଏ ଯେଉଁଥିରେ 13ଟି କ୍ୟାରୋଟିନୋଏଡ୍ ନିରାମିଷ ଏବଂ 28ଟି BChl ରହିଛି। αβ1 ରୁ 7 ଅଞ୍ଚଳରେ ଦୁଇଟି କମ୍ପ୍ଲେକ୍ସର ସ୍ଥାନୀୟ ରିଜୋଲ୍ୟୁସନ୍ ଆକଳନ LH1 ଲୁପ୍ ର ବାକି ଅଂଶ ଅପେକ୍ଷା କମ୍, ଯାହା RC QB ସାଇଟ୍ (ଚିତ୍ର 4) ସହିତ ସଂଲଗ୍ନ LH1 ସବୟୁନିଟ୍‌ର ଅନ୍ତର୍ନିହିତ ପ୍ଲାଷ୍ଟିସିଟିକୁ ପ୍ରତିଫଳିତ କରିପାରେ।
ଚିତ୍ର 1. (B ଏବଂ D) ର ସମାନ ଉପର ଦୃଶ୍ୟ/ପାର୍ଶ୍ୱ ଦୃଶ୍ୟ (A ଏବଂ B) (A ଏବଂ C) ଏବଂ ଗହ୍ବର ପୃଷ୍ଠରୁ RC-LH114-W (A ଏବଂ B) ଏବଂ RC-LH116 (C ଏବଂ D) ର ଚିତ୍ରଗୁଡ଼ିକ ଦେଖାଯାଇଛି। ରଙ୍ଗୀନ ଚାବିଗୁଡ଼ିକ ଡାହାଣ ପାର୍ଶ୍ୱରେ ଦେଖାଯାଇଛି।
1:14 ର ଷ୍ଟୋଇକିଓମେଟ୍ରିକ୍ ଅନୁପାତ ସହିତ ଏକମାତ୍ର ଅନ୍ୟ ବୈଶିଷ୍ଟ୍ୟପୂର୍ଣ୍ଣ କୋର୍ ଜଟିଳ ହେଉଛି ରୋଡୋକୋକସ୍ ସ୍ଫାଏରୋଏଡ୍ସ (Rba.) RC-LH1-PufX ଡାଇମର (13)। ତଥାପି, ପ୍ରୋଟିନ୍ W ଏବଂ PufX ର କୌଣସି ସ୍ପଷ୍ଟ ହୋମୋଲୋଜି ନାହିଁ, ଏବଂ ସେମାନଙ୍କର ସମ୍ପୃକ୍ତ LH1 ଗଠନ ଉପରେ ଏକ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ପ୍ରଭାବ ପକାଏ। PufX ହେଉଛି ଏକ N-ଟର୍ମିନାଲ ସାଇଟୋପ୍ଲାଜମିକ୍ ଡୋମେନ୍ ସହିତ ଏକ ସିଙ୍ଗଲ୍ TMH ଯାହା Rps. palustris LH116αβ-16 ସହିତ ସମାନ ସ୍ଥିତିରେ RC-H ସବୟୁନିଟ୍ (13) ର ସାଇଟୋପ୍ଲାଜମିକ୍ ପାର୍ଶ୍ୱ ସହିତ ପାରସ୍ପରିକ କ୍ରିୟା କରେ। PufX RC-LH1 ଏବଂ ସାଇଟୋକ୍ରୋମ୍ bcl ଜଟିଳ ମଧ୍ୟରେ କ୍ୱିନୋନ୍/କ୍ୱିନୋଲୋନ୍ ବିନିମୟ ପାଇଁ ଏକ ଚ୍ୟାନେଲ୍ ସୃଷ୍ଟି କରେ ଏବଂ ସମସ୍ତ Rba. sphaeroides କୋର୍ ଜଟିଳ (13) ରେ ଉପସ୍ଥିତ। ଯଦିଓ ମୋନୋମର-ମୋନୋମର ଇଣ୍ଟରଫେସ୍ Rba ରେ ଅଛି। ସ୍ଫାଏରୋଏଡ୍ସ RC-LH1-PufX ଡାଇମର RC-LH114-W ରେ ପ୍ରୋଟିନ୍ W ର ବନ୍ଧନ ସ୍ଥିତିରେ ଅବସ୍ଥିତ, ଏବଂ PufX ଏବଂ ପ୍ରୋଟିନ୍-W ଦ୍ୱାରା ପ୍ରେରିତ ବ୍ୟବଧାନ ଏକ ସମତୁଲ୍ୟ ସ୍ଥିତିରେ ଅଛି (ଚିତ୍ର S7A)। RC-LH114-W ରେ ବ୍ୟବଧାନ ସୁଡୋମୋନାସ୍ ରୋଜା LH1 ର କାଳ୍ପନିକ କ୍ୱିନୋନ୍ ଚ୍ୟାନେଲ୍ (8) ସହିତ ମଧ୍ୟ ସମନ୍ୱିତ, ଯାହା ପ୍ରୋଟିନ୍ W କିମ୍ବା PufX (ଚିତ୍ର S7B) ସହିତ ଜଡିତ ନୁହେଁ ପେପ୍ଟାଇଡ୍ ଦ୍ୱାରା ଗଠିତ। ଏହା ସହିତ, Blc ରେ କ୍ୱିନୋନ୍ ଚ୍ୟାନେଲ୍। ଗୋଟିଏ γ ସବୟୁନିଟ୍ (7) କୁ ବାଦ ଦେଇ ଗଠିତ ଏମରାଲ୍ଡ ସବୁଜ LH1 ସମାନ ସ୍ଥିତିରେ ଅବସ୍ଥିତ (ଚିତ୍ର S7C)। ଯଦିଓ ବିଭିନ୍ନ ପ୍ରୋଟିନ୍ ଦ୍ୱାରା ମଧ୍ୟସ୍ଥତା କରାଯାଇଛି, RC-LH1 ଜଟିଳରେ ଏକ ସାଧାରଣ ସ୍ଥିତିରେ ଏହି କ୍ୱିନୋନ୍/କ୍ୱିନୋଲୋଲ୍ ଚ୍ୟାନେଲଗୁଡ଼ିକର ଦୃଶ୍ୟମାନତା ଅଭିସରଣକାରୀ ବିବର୍ତ୍ତନର ଏକ ଉଦାହରଣ ପରି ମନେହୁଏ, ଯାହା ସୂଚିତ କରେ ଯେ ପ୍ରୋଟିନ୍ W ଦ୍ୱାରା ସୃଷ୍ଟି ହୋଇଥିବା ବ୍ୟବଧାନ ଏକ କ୍ୱିନୋନ୍ ଚ୍ୟାନେଲ୍ ଭାବରେ କାର୍ଯ୍ୟ କରିପାରେ।
LH114-W ଲୁପ୍‌ରେ ଥିବା ବ୍ୟବଧାନ, ପ୍ରୋଟିନ୍‌ ପରି ଏକ ପ୍ରୋଟିନ୍ ଛିଦ୍ର ମାଧ୍ୟମରେ ଦୁଇଟି ଡୋମେନ୍‌କୁ ସଂଯୋଗ କରିବା ପରିବର୍ତ୍ତେ, RC-LH114-W କମ୍ପ୍ଲେକ୍ସ ଏବଂ ବଲ୍କ ମେମ୍ବ୍ରେନ୍ (ଚିତ୍ର 1G) ର ଆଭ୍ୟନ୍ତରୀଣ ସ୍ଥାନ ମଧ୍ୟରେ ଏକ ନିରନ୍ତର ମେମ୍ବ୍ରେନ୍ ଅଞ୍ଚଳ ଗଠନ କରିବାକୁ ଅନୁମତି ଦିଏ। RC-LH116 କମ୍ପ୍ଲେକ୍ସ ଏକ ବନ୍ଦ Tch. ଛୁଞ୍ଚି ପରି ଜଟିଳ (22) (ଚିତ୍ର 1H) ସହିତ ସମାନ। ଯେହେତୁ ମେମ୍ବ୍ରେନ୍ ମାଧ୍ୟମରେ କ୍ୱିନୋନ୍‌ର ପ୍ରସାରଣ ସଂକୀର୍ଣ୍ଣ ପ୍ରୋଟିନ୍ ଚ୍ୟାନେଲ୍‌ ମାଧ୍ୟମରେ ପ୍ରସାରଣ ଅପେକ୍ଷା ଦ୍ରୁତ, ଖୋଲା LH114-W ଲୁପ୍ ବନ୍ଦ LH116 ଲୁପ୍‌ ଅପେକ୍ଷା ଦ୍ରୁତ RC ପରିବର୍ତ୍ତନକୁ ଅନୁମତି ଦେଇପାରେ, ଏବଂ RC ରେ କ୍ୱିନୋନ୍‌ର ପ୍ରସାରଣ ଅଧିକ ପ୍ରତିବନ୍ଧିତ ହୋଇପାରେ। ପ୍ରୋଟିନ୍ W RC ମାଧ୍ୟମରେ କ୍ୱିନୋନ୍‌ର ପରିବର୍ତ୍ତନକୁ ପ୍ରଭାବିତ କରେ କି ନାହିଁ ତାହା ପରୀକ୍ଷା କରିବା ପାଇଁ, ଆମେ ubiquinone 2 (UQ2) (ପ୍ରାକୃତିକ UQ10 ର ଏକ ଆନାଲଗ୍ ଏକ ଛୋଟ ଆଇସୋପ୍ରେନ୍ ଟେଲ୍ ସହିତ) (ଚିତ୍ର 2E) ର ଏକ ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ସାନ୍ଦ୍ରତା ଉପରେ ଏକ ସାଇଟୋକ୍ରୋମ୍ ଅକ୍ସିଡେସନ୍ ପରୀକ୍ଷା କରିଥିଲୁ। ଯଦିଓ ଚେଲେଟେଡ୍ କ୍ୱିନୋନର ଉପସ୍ଥିତି ସ୍ପଷ୍ଟ ମାଇକେଲିସ୍ ସ୍ଥିରାଙ୍କର ସଠିକ୍ ନିର୍ଣ୍ଣୟକୁ ବାଧା ଦିଏ (RC-LH114-W ଏବଂ RC-LH116 ଯଥାକ୍ରମେ 0.2±0.1μM ଏବଂ 0.5±0.2μM ପାଇଁ ଉପଯୁକ୍ତ), RC-LH114-W (4.6±0.2 e-RC-1 s-1) ର ସର୍ବାଧିକ ହାର RC-LH116 (3.6±0.1 e-RC-1 s-1) ଅପେକ୍ଷା 28±5% ଅଧିକ।
ଆମେ ପ୍ରାରମ୍ଭରେ ଆକଳନ କରିଥିଲୁ ଯେ ପ୍ରୋଟିନ-W ପ୍ରାୟ 10% କୋର ଜଟିଳରେ ଉପସ୍ଥିତ ଅଛି (16); ଏଠାରେ, କମ୍ ଆଲୋକ, ମଧ୍ୟମ ଆଲୋକ ଏବଂ ଉଚ୍ଚ ଆଲୋକ ବୃଦ୍ଧି କୋଷଗୁଡ଼ିକର ଅଧିଗ୍ରହଣ ହାର ଯଥାକ୍ରମେ 15±0.6%, 11±1% ଏବଂ 0.9±0.5, % (ଚିତ୍ର 2F)। ମାସ୍ ସ୍ପେକ୍ଟ୍ରୋମେଟ୍ରିର ପରିମାଣାତ୍ମକ ତୁଳନା ଦେଖାଇଛି ଯେ ହିଷ୍ଟିଡାଇନ୍ ଟ୍ୟାଗ୍ ଯୋଡିବା ଦ୍ୱାରା ବନ୍ୟ-ପ୍ରକାର ପ୍ରବାହ ତୁଳନାରେ ପ୍ରୋଟିନ-W ର ଆପେକ୍ଷିକ ପ୍ରଚୁରତା ହ୍ରାସ ହୋଇନାହିଁ (P = 0.59), ତେଣୁ ଏହି ସ୍ତରଗୁଡ଼ିକ ପରିବର୍ତ୍ତିତ ପ୍ରୋଟିନ-W ର ଏକ କଳାକୃତି ନୁହେଁ (ଚିତ୍ର S10)। ତଥାପି, RC-LH1 ଜଟିଳରେ ପ୍ରୋଟିନ-W ର ଏହି କମ୍ ଅଧିଗ୍ରହଣ କିଛି RC ଗୁଡ଼ିକୁ ତ୍ୱରିତ ହାରରେ ଫ୍ଲିପ୍ କରିବାକୁ ଅନୁମତି ଦେଇପାରେ, ଯାହା ଦ୍ଵାରା RC-LH116 ଜଟିଳରେ ଧୀର କୁଇନୋନ୍/କୁଇନୋଲୋନ୍ ବିନିମୟକୁ ହ୍ରାସ କରିପାରେ। ଆମେ ଲକ୍ଷ୍ୟ କରିଛୁ ଯେ ଉଚ୍ଚ ଆଲୋକ ଅଧିଗ୍ରହଣ ହାର ସାମ୍ପ୍ରତିକ ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପ୍ଟୋମିକ୍ସ ତଥ୍ୟ ସହିତ ଅସଙ୍ଗତ, ଯାହା ସୂଚିତ କରେ ଯେ ପ୍ରବଳ ଆଲୋକରେ pufW ଜିନ୍ ପ୍ରକାଶନ ବୃଦ୍ଧି ପାଏ (ଚିତ୍ର S11) (23)। RC-LH1 ଜଟିଳରେ pufW ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପ୍ସନ ଏବଂ ପ୍ରୋଟିନ୍-W ଅନ୍ତର୍ଭୁକ୍ତି ମଧ୍ୟରେ ପାର୍ଥକ୍ୟ ଦ୍ୱନ୍ଦ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ଏବଂ ପ୍ରୋଟିନ୍ ର ଜଟିଳ ନିୟନ୍ତ୍ରଣକୁ ପ୍ରତିଫଳିତ କରିପାରେ।
RC-LH114-W ରେ, 6 କାର୍ଡିଓଲିପିନ୍ (CDL), 7 ଫସଫାଟିଡିଲକୋଲାଇନ୍ (POPC), 1 ଫସଫାଟିଡିଲଗ୍ଲିସେରୋଲ୍ (POPG) ଏବଂ 29 β-DDM ଅଣୁ ଆବଣ୍ଟିତ ଏବଂ ଏଥିରେ 6 CDLs, 24 POPCs, 2 POPGs ଏବଂ 12 βDDMs ମଡେଲିଂ କରାଯାଇଛି। RC-LH116 (ଚିତ୍ର 5, A ଏବଂ B)। ଏହି ଦୁଇଟି ଗଠନରେ, CDL ପ୍ରାୟ ଜଟିଳର ସାଇଟୋପ୍ଲାଜମିକ୍ ପାର୍ଶ୍ୱରେ ଅବସ୍ଥିତ, ଯେତେବେଳେ POPC, POPG ଏବଂ β-DDM ଅଧିକାଂଶ ଲ୍ୟୁମିନାଲ୍ ପାର୍ଶ୍ୱରେ ଅବସ୍ଥିତ। RC-LH114-W ଜଟିଳର αβ-1 ରୁ αβ-6 ଅଞ୍ଚଳରେ ଦୁଇଟି ଲିପିଡ୍ ଏବଂ ଡିଟରଜେଣ୍ଟ ଅଣୁ ପୃଥକ କରାଯାଇଥିଲା (ଚିତ୍ର 5A), ଏବଂ ପାଞ୍ଚଟି RC-LH116 (ଚିତ୍ର 5B) ର ସମତୁଲ୍ୟ ଅଞ୍ଚଳରେ ପୃଥକ କରାଯାଇଥିଲା। ଜଟିଳର ଅନ୍ୟ ପାର୍ଶ୍ୱରେ ଅଧିକ ଲିପିଡ୍ ମିଳିଲା, ମୁଖ୍ୟତଃ CDL, RC ଏବଂ αβ-7 ରୁ αβ-13 ମଧ୍ୟରେ ସଂଗୃହିତ (ଚିତ୍ର 5, A ଏବଂ B)। ଅନ୍ୟାନ୍ୟ ଗଠନମୂଳକ ଭାବରେ ସମାଧାନ ହୋଇଥିବା ଲିପିଡ୍ ଏବଂ ଡିଟରଜେଣ୍ଟଗୁଡ଼ିକ LH1 ରିଙ୍ଗ ବାହାରେ ଅବସ୍ଥିତ, ଏବଂ ଭଲ ଭାବରେ ସମାଧାନ ହୋଇଥିବା ଆସିଲ୍ ଚେନ୍ LH1 ସବୟୁନିଟ୍ ମଧ୍ୟରେ ବିସ୍ତାରିତ, RC-LH114-W ରେ β-DDM ଭାବରେ ଅସ୍ଥାୟୀ ଭାବରେ ନାମିତ, ଏବଂ RC ରେ β-DDM ଭାବରେ ପରିଭାଷିତ β-DDM ଏବଂ POPC-LH116 ର ଏକ ମିଶ୍ରଣ। ଆମର ଗଠନରେ ଚେଲେଟିଂ ଲିପିଡ୍ ଏବଂ ଡିଟରଜେଣ୍ଟର ସମାନ ସ୍ଥିତି ସୂଚିତ କରେ ଯେ ସେମାନେ ଶାରୀରିକ ଭାବରେ ପ୍ରାସଙ୍ଗିକ ବନ୍ଧନ ସ୍ଥାନ (ଚିତ୍ର S12A)। Tch ରେ ସମତୁଲ୍ୟ ଅଣୁଗୁଡ଼ିକର ସ୍ଥିତିରେ ମଧ୍ୟ ଭଲ ସ୍ଥିରତା ରହିଛି। କୋମଳ ଏବଂ Trv। ଷ୍ଟ୍ରେନ୍ 970 RC-LH1s (ଚିତ୍ର S12, B ରୁ E) (9, 12) ଏବଂ ଲିପିଡ୍ ହେଡ୍ ଗ୍ରୁପର ହାଇଡ୍ରୋଜେନ୍-ବନ୍ଧନ ଅବଶିଷ୍ଟ୍ୟଗୁଡ଼ିକ କ୍ରମ ସଂରଚନା (ଚିତ୍ର S13) ରେ ବହୁତ ଭଲ ସଂରକ୍ଷଣ ଦେଖାଇଛି, ଯାହା ସୂଚିତ କରେ ଯେ ସଂରକ୍ଷିତ CDL ଯାହା RC (24) ସହିତ ବାନ୍ଧେ, ଏହି ସ୍ଥାନଗୁଡ଼ିକୁ RC-LH1 ଜଟିଳରେ ସଂରକ୍ଷଣ କରାଯାଇପାରେ।
(A ଏବଂ B) RC-LH114-W (A) ଏବଂ RC-LH116 (B) ପେପ୍ଟାଇଡ୍‌ଗୁଡ଼ିକୁ କାର୍ଟୁନ୍‌ ଦ୍ୱାରା ଦର୍ଶାଯାଇଛି, ଏବଂ ରଙ୍ଗବସ୍ତୁଗୁଡ଼ିକୁ ରଡ୍‌ ଦ୍ୱାରା ଦର୍ଶାଯାଇଛି, ଚିତ୍ର 1 ରେ ଥିବା ରଙ୍ଗ ଯୋଜନା ବ୍ୟବହାର କରି। ଲିପିଡ୍‌ଗୁଡ଼ିକୁ ଲାଲ ରଙ୍ଗରେ ଦେଖାଯାଇଛି, ଏବଂ ଡିଟରଜେଣ୍ଟଗୁଡ଼ିକୁ ଧୂସର ରଙ୍ଗରେ ଦେଖାଯାଇଛି। RC QA ଏବଂ QB ସାଇଟ୍‌ଗୁଡ଼ିକ ସହିତ ବନ୍ଧିତ UQ ହଳଦିଆ, ଯେତେବେଳେ ପୃଥକ UQ ନୀଳ। (C ଏବଂ D) ଲିପିଡ୍‌ଗୁଡ଼ିକୁ ବାଦ ଦେଇ (A) ଏବଂ (B) ପରି ସମାନ ଦୃଶ୍ୟ। (E ରୁ G) RC-LH116 ରୁ Q1(E), Q2(F) ଏବଂ Q3(G) ର ବିସ୍ତାରିତ ଦୃଶ୍ୟ, ପରସ୍ପରକୁ ପ୍ରଭାବିତ କରୁଥିବା ପାର୍ଶ୍ୱ ଶୃଙ୍ଖଳ ସହିତ। ହାଇଡ୍ରୋଜେନ୍ ବନ୍ଧଗୁଡ଼ିକୁ କଳା ଡ୍ୟାସ୍ ହୋଇଥିବା ରେଖା ଭାବରେ ଦର୍ଶାଯାଇଛି।
RC-LH116 ରେ, ଚାର୍ଜ ପୃଥକୀକରଣ ପ୍ରକ୍ରିୟାରେ ଇଲେକ୍ଟ୍ରୋନ ସ୍ଥାନାନ୍ତରରେ ଅଂଶଗ୍ରହଣ କରୁଥିବା RC QA ଏବଂ QB UQ ଉଭୟ ସେମାନଙ୍କର ବନ୍ଧନ ସ୍ଥାନରେ ବିଘଟିତ ହୋଇଥାନ୍ତି। ତଥାପି, RC-LH114-W ରେ, QB କ୍ୱିନୋନ ସମାଧାନ ହୋଇନାହିଁ ଏବଂ ନିମ୍ନରେ ବିସ୍ତାରିତ ଭାବରେ ଆଲୋଚନା କରାଯିବ। QA ଏବଂ QB କ୍ୱିନୋନ ବ୍ୟତୀତ, ଦୁଇଟି ଚେଲେଟେଡ୍ UQ ଅଣୁ (RC ଏବଂ LH1 ରିଙ୍ଗ୍ ମଧ୍ୟରେ ଅବସ୍ଥିତ) ସେମାନଙ୍କର ସୁ-ସଂଶୋଧିତ ହେଡ୍ ଗ୍ରୁପ୍ (ଯଥାକ୍ରମେ Q1 ଏବଂ Q2 ରେ ଅବସ୍ଥିତ) ଅନୁସାରେ RC-LH114-W ଗଠନରେ ଆବଣ୍ଟିତ ହୋଇଛି। ଚିତ୍ର 5C)। Q1 କୁ ଦୁଇଟି ଆଇସୋପ୍ରେନ୍ ୟୁନିଟ୍ ନ୍ୟସ୍ତ କରାଯାଇଛି, ଏବଂ ଘନତା ମାନଚିତ୍ର Q2 ର ସମ୍ପୂର୍ଣ୍ଣ 10 ଆଇସୋପ୍ରେନ୍ ଟେଲ୍ ସମାଧାନ କରେ। RC-LH116 ର ଗଠନରେ, ତିନୋଟି ଚେଲେଟେଡ୍ UQ10 ଅଣୁ (Q1 ରୁ Q3, ଚିତ୍ର 5D) ସମାଧାନ ହୋଇଥିଲା, ଏବଂ ସମସ୍ତ ଅଣୁଗୁଡ଼ିକର ସମଗ୍ର ଲାଞ୍ଜରେ ଏକ ସ୍ପଷ୍ଟ ଘନତା ଅଛି (ଚିତ୍ର 5, D ରୁ G)। ଦୁଇଟି ଗଠନରେ, Q1 ଏବଂ Q2 ର କ୍ୱିନୋନ୍ ହେଡ୍ ଗ୍ରୁପ୍ ର ସ୍ଥିତି ଉତ୍କୃଷ୍ଟ ସ୍ଥିରତା (ଚିତ୍ର S12F) ର ଅଛି, ଏବଂ ସେମାନେ କେବଳ RC ସହିତ ପାରସ୍ପରିକ କ୍ରିୟା କରନ୍ତି। Q1 RC-LH114-W (ଚିତ୍ର 1G ଏବଂ 5, C, D ଏବଂ E) ର W ଫାଙ୍କ ପ୍ରବେଶ ଦ୍ୱାରରେ ଅବସ୍ଥିତ, ଏବଂ Q2 QB ବନ୍ଧନ ସ୍ଥାନ (ଚିତ୍ର 5, C, D) ଏବଂ F ନିକଟରେ ଅବସ୍ଥିତ। ସଂରକ୍ଷିତ L-Trp143 ଏବଂ L-Trp269 ଅବଶିଷ୍ଟାଂଶ Q1 ଏବଂ Q2 ର ବହୁତ ନିକଟତର ଏବଂ ସମ୍ଭାବ୍ୟ π-ଷ୍ଟାକିଂ ପାରସ୍ପରିକ କ୍ରିୟା ପ୍ରଦାନ କରେ (ଚିତ୍ର 5, E ଏବଂ F, ଏବଂ ଚିତ୍ର S12)। Q1 ର ଦୂରବର୍ତ୍ତୀ ଅମ୍ଳଜାନରୁ L-Gln88, 3.0 Å, ଏକ ଦୃଢ଼ ହାଇଡ୍ରୋଜେନ୍ ବନ୍ଧନ (ଚିତ୍ର 5E) ପ୍ରଦାନ କରେ; ଏହି ଅବଶିଷ୍ଟାଂଶ ସବୁଠାରୁ ଦୂରବର୍ତ୍ତୀ ସମ୍ପର୍କ (ଚିତ୍ର S13) ବ୍ୟତୀତ ସମସ୍ତ RC ରେ ପାରସ୍ପରିକ କ୍ରିୟାରେ ସଂରକ୍ଷିତ। ଅଧିକାଂଶ ଅନ୍ୟ RCs (ଚିତ୍ର S13) ରେ Thr ପାଇଁ L-Ser91 ରକ୍ଷଣଶୀଳ ଭାବରେ ପ୍ରତିସ୍ଥାପିତ ହୋଇଛି, Q1 ର ମିଥାଇଲ୍ ଅମ୍ଳଜାନରୁ 3.8 ଆଙ୍ଗଷ୍ଟ୍ରୋମ୍ସ ଅଟେ, ଏବଂ ଦୁର୍ବଳ ହାଇଡ୍ରୋଜେନ୍ ବନ୍ଧନ ପ୍ରଦାନ କରିପାରେ (ଚିତ୍ର 5E)। Q3 ର କୌଣସି ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ପାରସ୍ପରିକ କ୍ରିୟା ଦେଖାଯାଉନାହିଁ, କିନ୍ତୁ ଏହା RC-M ସବୟୁନିଟ୍ ଏବଂ LH1-α ସବୟୁନିଟ୍ 5 ରୁ 6 (ଚିତ୍ର 5, D ଏବଂ G) ମଧ୍ୟରେ ଜଳଫୋବିକ୍ ଅଞ୍ଚଳରେ ଅବସ୍ଥିତ। Q1, Q2 ଏବଂ Q3 କିମ୍ବା ନିକଟବର୍ତ୍ତୀ ଚେଲେଟେଡ୍ କ୍ୱିନୋନ୍ ମଧ୍ୟ Tch. Gentle, Trv. Strain 970 ଏବଂ Blc ରେ ସମାଧାନ କରାଯାଇଛି। ଆଇରିସ୍ ଗଠନ (9, 10, 12) RC-LH1 ଜଟିଳ (ଚିତ୍ର S12G) ରେ ଏକ ସଂରକ୍ଷିତ ସହାୟକ କ୍ୱିନୋନ୍ ବନ୍ଧନ ସ୍ଥାନକୁ ସୂଚିତ କରେ। RC-LH116 ରେ ପାଞ୍ଚଟି ବିଘଟିତ UQ ଉଚ୍ଚ କାର୍ଯ୍ୟଦକ୍ଷତା ତରଳ କ୍ରୋମାଟୋଗ୍ରାଫି (HPLC) ଦ୍ୱାରା ନିର୍ଣ୍ଣିତ ପ୍ରତ୍ୟେକ ଜଟିଳର 5.8±0.7 ସହିତ ଉତ୍ତମ ସମାନ, ଯେତେବେଳେ RC-LH114-W ରେ ତିନୋଟି ବିଘଟିତ UQ 6.2±0.3 (ଚିତ୍ର S14) ର ମାପିତ ମୂଲ୍ୟ ଠାରୁ କମ୍ ସୂଚାଇଥାଏ ଯେ ଗଠନରେ ଅସମାପ୍ତ UQ ଅଣୁ ଅଛି।
ସୁଡୋ-ସିମେଟ୍ରିକ L ଏବଂ M ପଲିପେପ୍ଟାଇଡ ପ୍ରତ୍ୟେକରେ ପାଞ୍ଚଟି TMH ଥାଏ ଏବଂ ଏକ ହେଟେରୋଡାଇମର ଗଠନ କରେ ଯାହା ଗୋଟିଏ BChl ଡାଇମର, ଦୁଇଟି BChl ମୋନୋମର୍, ଦୁଇଟି ବ୍ୟାକ୍ଟିରୋଫେଜ୍ (BPh) ମୋନୋମର୍, ଏବଂ ଗୋଟିଏ ଅଣ-ହେମ୍ ଲୁହା ଏବଂ ଗୋଟିଏ କିମ୍ବା ଦୁଇଟି UQ10 ଅଣୁକୁ ମିଶ୍ରଣ କରେ। ଟର୍ମିନାଲ କିଟୋନ୍ ଗ୍ରୁପରେ ହାଇଡ୍ରୋଜେନ୍ ବନ୍ଧନର ଉପସ୍ଥିତି ଏବଂ Rps ରେ ଏହାର ଜଣାଶୁଣା ସଂଗ୍ରହ ମାଧ୍ୟମରେ, କ୍ୟାରୋଟିନୋଇଡ୍ସ M-ସବୟୁନିଟରେ ଅନ୍ତର୍ଭୁକ୍ତ ହୋଇଥାଏ, ଯାହାକୁ cis-3,4-dehydroorhodopin କୁହାଯାଏ। ପ୍ରଜାତି (25)। RC-H ର ବାହ୍ୟ ପରଦା ଡୋମେନ୍ ଗୋଟିଏ TMH ଦ୍ୱାରା ପରଦା ସହିତ ବନ୍ଧା ହୋଇଥାଏ। ସାମଗ୍ରିକ RC ଗଠନ ସମ୍ପର୍କିତ ପ୍ରଜାତି (ଯେପରିକି Rba) ର ତିନୋଟି ଉପୟୁନିଟ୍ RC ସହିତ ସମାନ। ସ୍ଫାଏରୋଇଡ୍ସ (PDB ID: 3I4D)। ଏହି ଗଠନଗୁଡ଼ିକର ରିଜୋଲ୍ୟୁସନ୍ ପରିସର ମଧ୍ୟରେ BChl ଏବଂ BPh ର ମାକ୍ରୋସାଇକେଲ୍, କାରୋଟିନଏଡ୍ ବ୍ୟାକବୋନ୍ ଏବଂ ନନ୍-ହେମ୍ ଆଇରନ୍ ଓଭରଲାପ୍ ହୁଏ, ଯେପରି QA ସାଇଟରେ UQ10 ହେଡ୍ ଗ୍ରୁପ୍ ଏବଂ RC-LH116 ରେ QB କ୍ୱିନୋନ୍ (ଚିତ୍ର S15)।
ଭିନ୍ନ QB ସାଇଟ୍ ଅକୁପାନ୍ସି ହାର ସହିତ ଦୁଇଟି RC ଗଠନର ଉପଲବ୍ଧତା QB କୁଇନୋନ୍ ବାଇଣ୍ଡିଂ ସହିତ ହେଉଥିବା ସ୍ଥିର ସଂରଚନାଗତ ପରିବର୍ତ୍ତନଗୁଡ଼ିକୁ ପରୀକ୍ଷା କରିବା ପାଇଁ ଏକ ନୂତନ ସୁଯୋଗ ପ୍ରଦାନ କରେ। RC-LH116 କମ୍ପ୍ଲେକ୍ସରେ, QB କୁଇନୋନ୍ ସମ୍ପୂର୍ଣ୍ଣ ଭାବରେ ବନ୍ଧା "ପ୍ରକ୍ସିମାଲ" ସ୍ଥିତିରେ ଅବସ୍ଥିତ (26), କିନ୍ତୁ RC-LH114-W ର ପୃଥକୀକରଣରେ QB କୁଇନୋନ୍ ନାହିଁ। RC-LH114-W ରେ କୌଣସି QB କୁଇନୋନ୍ ନାହିଁ, ଯାହା ଆଶ୍ଚର୍ଯ୍ୟଜନକ କାରଣ ଏହି ଜଟିଳ ସକ୍ରିୟ, ଗଠନମୂଳକ ଭାବରେ ସମାଧାନ ହୋଇଥିବା QB କୁଇନୋନ୍ ସହିତ RC-LH116 କମ୍ପ୍ଲେକ୍ସ ଅପେକ୍ଷା ଅଧିକ। ଯଦିଓ ଦୁଇଟି LH1 ରିଙ୍ଗ୍ ପ୍ରାୟ ଛଅଟି କୁଇନୋନ୍ ଚେଲେଟ୍ କରନ୍ତି, ପାଞ୍ଚଟି ବନ୍ଦ RC-LH116 ରିଙ୍ଗ୍ ରେ ଗଠନମୂଳକ ଭାବରେ ସମାଧାନ ହୋଇଛି, ଯେତେବେଳେ ଖୋଲା RC-LH114-W ରିଙ୍ଗ୍ ରେ କେବଳ ତିନୋଟି ଗଠନମୂଳକ ଭାବରେ ସୀମିତ। ଏହି ବର୍ଦ୍ଧିତ ସଂରଚନାତ୍ମକ ଅବ୍ୟବସ୍ଥା RC-LH114-W QB ସାଇଟ୍‌ଗୁଡ଼ିକର ଦ୍ରୁତ ପ୍ରତିସ୍ଥାପନ, ​​ଜଟିଳରେ ଦ୍ରୁତ କ୍ୱିନୋନ୍ ଗତିବିଧି ଏବଂ LH1 ଲୁପ୍‌ ପାର ହେବାର ସମ୍ଭାବନାକୁ ପ୍ରତିଫଳିତ କରିପାରେ। ଆମେ ପରାମର୍ଶ ଦେଉଛୁ ଯେ RC-LH114-W ର RC QB ସାଇଟ୍‌ରେ UQ ର ଅଭାବ ଏକ ଅଧିକ ଜଟିଳ ଏବଂ ଅଧିକ ସକ୍ରିୟ ଜଟିଳର ଫଳାଫଳ ହୋଇପାରେ, ଏବଂ UQ ଟର୍ଣ୍ଣଓଭରରେ RC-LH114-W ର QB ସାଇଟ୍ ତୁରନ୍ତ ଫ୍ରିଜ୍ ହୋଇଯାଇଛି। ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ପର୍ଯ୍ୟାୟ (QB ସାଇଟ୍‌ର ପ୍ରବେଶ ପଥ ବନ୍ଦ କରାଯାଇଛି) ଏହି କାର୍ଯ୍ୟକଳାପର ରୂପାନ୍ତରକୁ ପ୍ରତିଫଳିତ କରେ।
QB ବିନା, L-Phe217 ର ଏକ ଅନୁକୂଳ ଘୂର୍ଣ୍ଣନ ଏକ ସ୍ଥିତିକୁ ଯାହା UQ10 ବନ୍ଧନ ସହିତ ଅସଙ୍ଗତ, କାରଣ ଏହା ଲାଞ୍ଜର ପ୍ରଥମ ଆଇସୋପ୍ରେନ୍ ୟୁନିଟ୍ ସହିତ ଏକ ସ୍ଥାନିକ ଧକ୍କା ସୃଷ୍ଟି କରିବ (ଚିତ୍ର 6A)। ଏହା ସହିତ, ସ୍ପଷ୍ଟ ମୁଖ୍ୟ ସଂରଚନାଗତ ପରିବର୍ତ୍ତନଗୁଡ଼ିକ ସ୍ପଷ୍ଟ, ବିଶେଷକରି ହେଲିକ୍ସ ଡି (TMH D ଏବଂ E ମଧ୍ୟରେ ଲୁପ୍‌ରେ ଛୋଟ ହେଲିକ୍ସ) ଯେଉଁଠାରେ L-Phe217 କୁ QB ବନ୍ଧନ ପକେଟକୁ ସ୍ଥାନାନ୍ତରିତ କରାଯାଏ ଏବଂ L-Tyr223 ର ଘୂର୍ଣ୍ଣନ (ଚିତ୍ର 6A) M-Asp45 ଫ୍ରେମୱାର୍କ ସହିତ ହାଇଡ୍ରୋଜେନ୍ ବନ୍ଧନକୁ ଭାଙ୍ଗିବା ଏବଂ QB ବନ୍ଧନ ସ୍ଥାନର ପ୍ରବେଶ ପଥ ବନ୍ଦ କରିବା ପାଇଁ (ଚିତ୍ର 6B)। ହେଲିକ୍ସ ଡି ଏହାର ଆଧାରରେ ପିଭୋଟ୍ କରେ, L-Ser209 ର Cα 0.33Å ଦ୍ଵାରା ସ୍ଥାନାନ୍ତରିତ ହୁଏ, ଯେତେବେଳେ L-Val221Cα 3.52Å ଦ୍ଵାରା ସ୍ଥାନାନ୍ତରିତ ହୁଏ। TMH D ଏବଂ E ରେ କୌଣସି ପରିଲକ୍ଷିତ ପରିବର୍ତ୍ତନ ନାହିଁ, ଯାହା ଉଭୟ ଗଠନରେ ସୁପରଇମ୍ପୋଜେବଲ୍ (ଚିତ୍ର 6A)। ଆମେ ଜାଣୁ ଯେପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ, ଏହା ପ୍ରାକୃତିକ RC ର ପ୍ରଥମ ଗଠନ ଯାହା QB ସ୍ଥାନକୁ ବନ୍ଦ କରେ। ସମ୍ପୂର୍ଣ୍ଣ (QB-ବନ୍ଧିତ) ଗଠନ ସହିତ ତୁଳନା ଦର୍ଶାଏ ଯେ କୁଇନୋନ ହ୍ରାସ ହେବା ପୂର୍ବରୁ, ଏହାକୁ କୁଇନୋନରେ ପ୍ରବେଶ କରିବା ପାଇଁ ଏକ ସଂରଚନାଗତ ପରିବର୍ତ୍ତନ ଆବଶ୍ୟକ। L-Phe217 କୁଇନୋନ ହେଡ୍ ଗ୍ରୁପ୍ ସହିତ π-ଷ୍ଟାକିଂ ପାରସ୍ପରିକ କ୍ରିୟା ଗଠନ କରିବାକୁ ଘୂର୍ଣ୍ଣନ କରେ, ଏବଂ ହେଲିକ୍ସ ବାହାରକୁ ସ୍ଥାନାନ୍ତରିତ ହୁଏ, ଯାହା L-Gly222 ର କଙ୍କାଳ ଏବଂ L-Tyr223 ର ପାର୍ଶ୍ୱ ଶୃଙ୍ଖଳକୁ ଏକ ସ୍ଥିର ହାଇଡ୍ରୋଜେନ ବଣ୍ଡ ଗଠନ ସହିତ ଏକ ହାଇଡ୍ରୋଜେନ ବଣ୍ଡ ନେଟୱାର୍କ ଗଠନ କରିବାକୁ ଅନୁମତି ଦିଏ (ଚିତ୍ର 6, A ଏବଂ C)।
(A) ହୋଲୋଗ୍ରାମ (L ଚେନ୍, କମଳା/M ଚେନ୍, ମାଜେଣ୍ଟା) ଏବଂ apo (ଧୂସର) ଗଠନର ଓଭରଲାପ୍ କାର୍ଟୁନ୍, ଯେଉଁଥିରେ ପ୍ରମୁଖ ଅବଶିଷ୍ଟାଂଶ ଏକ ରଡ୍ ପରି ପ୍ରତିନିଧିତ୍ୱ ଆକାରରେ ପ୍ରଦର୍ଶିତ ହୁଏ। UQ10 ଏକ ହଳଦିଆ ବାର୍ ଦ୍ୱାରା ପ୍ରତିନିଧିତ୍ୱ କରାଯାଏ। ବିନ୍ଦୁଯୁକ୍ତ ରେଖା ସମଗ୍ର ଗଠନରେ ଗଠିତ ହାଇଡ୍ରୋଜେନ୍ ବନ୍ଧକୁ ସୂଚିତ କରେ। (B ଏବଂ C) ଆପୋଲିପୋପ୍ରୋଟିନ୍ ଏବଂ ସମଗ୍ର ରିଙ୍ଗ୍ ଗଠନର ପୃଷ୍ଠ ପ୍ରତିନିଧିତ୍ୱ, ଯଥାକ୍ରମେ ନୀଳ ରଙ୍ଗରେ L-Phe217 ଏବଂ ଲାଲ ରଙ୍ଗରେ L-Tyr223 ର ପାର୍ଶ୍ୱ ଚେନ୍ ଅମ୍ଳଜାନକୁ ହାଇଲାଇଟ୍ କରେ। L ସବୟୁନିଟ୍ କମଳା ରଙ୍ଗର; M ଏବଂ H ସବୟୁନିଟ୍ ରଙ୍ଗୀନ ନୁହେଁ। (D ଏବଂ E) ଆପୋଲିପୋପ୍ରୋଟିନ୍ (D) ଏବଂ ସମଗ୍ର (E) RC QB ସାଇଟ୍ [ଯଥାକ୍ରମେ (A) ଦ୍ୱାରା ରଙ୍ଗୀନ] ଏବଂ Thermophilus thermophilus PSII (ସବୁଜ, ନୀଳ ପ୍ଲାଷ୍ଟିକ୍ କ୍ୱିନୋନ୍ ସହିତ; PDB ID: 3WU2) ସଂରେଖିତ (58)।
ଅପ୍ରତ୍ୟାଶିତ ଭାବରେ, ଯଦିଓ LH1 ବିନା QB-ଅଭାବୀ RC ର ଅନେକ ଗଠନ ଉପଲବ୍ଧ, ଏହି ଅଧ୍ୟୟନରେ ପରିଲକ୍ଷିତ ସଂରଚନାଗତ ପରିବର୍ତ୍ତନ ପୂର୍ବରୁ ରିପୋର୍ଟ କରାଯାଇ ନାହିଁ। ଏଥିରେ Blc. viridis (PDB ID: 3PRC) (27), Tch. tepidum (PDB ID: 1EYS) (28) ଏବଂ Rba. sphaeroides (PDB ID: 1OGV) (29) ରୁ QB ହ୍ରାସ ଗଠନ ଅନ୍ତର୍ଭୁକ୍ତ, ଯାହା ସମସ୍ତ ସେମାନଙ୍କର ସାମଗ୍ରିକ QB ଗଠନ ସହିତ ପ୍ରାୟ ସମାନ। 3PRC ର ନିକଟ ନିରୀକ୍ଷଣରୁ ଜଣାପଡ଼ିଛି ଯେ LDAO (Lauryl Dimethyl Amine Oxide) ଡିଟରଜେଣ୍ଟ ଅଣୁ QB ସ୍ଥିତିର ପ୍ରବେଶ ଦ୍ୱାରରେ ବାନ୍ଧିଥାଏ, ଯାହା ଏକ ବନ୍ଦ ସଂରଚନାରେ ପୁନଃବ୍ୟବସ୍ଥିତିକୁ ରୋକିପାରେ। ଯଦିଓ LDAO 1EYS କିମ୍ବା 1OGV ରେ ସମାନ ସ୍ଥାନରେ ବିଘଟିତ ହୁଏ ନାହିଁ, ଏହି RC ଗୁଡିକ ସମାନ ଡିଟରଜେଣ୍ଟ ବ୍ୟବହାର କରି ପ୍ରସ୍ତୁତ କରାଯାଏ ଏବଂ ତେଣୁ ସମାନ ପ୍ରଭାବ ସୃଷ୍ଟି କରିପାରେ। Rba ର ସ୍ଫଟିକ ଗଠନ। ସାଇଟୋକ୍ରୋମ c2 (PDB ID: 1L9B) ସହିତ ସହ-ସ୍ଫଟିକୀକରଣ ହୋଇଥିବା Sphaeroides RC ର ମଧ୍ୟ ଏକ ବନ୍ଦ QB ସ୍ଥାନ ଥିବା ପରି ମନେହୁଏ। ତଥାପି, ଏହି କ୍ଷେତ୍ରରେ, RC-M ପଲିପେପ୍ଟାଇଡର N-ଟର୍ମିନାଲ ଅଞ୍ଚଳ (Q ହେଲିକ୍ସରେ Tyr ଅବଶିଷ୍ଟ୍ୟର H ବନ୍ଧନ ମାଧ୍ୟମରେ QB ବନ୍ଧନ ସ୍ଥାନ ସହିତ ପାରସ୍ପରିକ କ୍ରିୟା) ଏକ ଅପ୍ରାକୃତିକ ରୂପାନ୍ତର ଗ୍ରହଣ କରେ, ଏବଂ QB ରୂପାନ୍ତର ପରିବର୍ତ୍ତନକୁ ଆହୁରି ଅନୁସନ୍ଧାନ କରାଯାଏ ନାହିଁ (30)। ଆଶ୍ୱାସନାର ବିଷୟ ହେଉଛି ଯେ ଆମେ RC-LH114-W ଗଠନରେ M ପଲିପେପ୍ଟାଇଡର ଏହି ପ୍ରକାରର ବିକୃତି ଦେଖିନାହୁଁ, ଯାହା RC-LH116 RC ର N-ଟର୍ମିନାଲ କ୍ଷେତ୍ର ସହିତ ପ୍ରାୟ ସମାନ। ଏହା ମଧ୍ୟ ଉଲ୍ଲେଖ କରାଯିବା ଉଚିତ ଯେ ଡିଟରଜେଣ୍ଟ-ଆଧାରିତ LH1 ଆଣ୍ଟେନାର ଉଚ୍ଛେଦ ପରେ, PDB ରେ ଥିବା ଆପୋଲିପୋପ୍ରୋଟିନ RC ଗୁଡିକ ସମାଧାନ ହୋଇଥିଲା, ଯାହା RC ଏବଂ ଆଖପାଖ LH1 ରିଙ୍ଗର ଭିତର ପୃଷ୍ଠ ମଧ୍ୟରେ ବ୍ୟବଧାନରେ ଥିବା ଆଭ୍ୟନ୍ତରୀଣ କ୍ୱିନୋନ ପୁଲ ଏବଂ ଲିପିଡକୁ ଦୂର କରିଥିଲା ​​(31, 32)। RC କାର୍ଯ୍ୟକ୍ଷମ ରହିଥାଏ କାରଣ ଏହା ସମସ୍ତ ସହକାରକକୁ ବଜାୟ ରଖେ, ବିଘଟନଶୀଳ QB କୁଇନୋନ ବ୍ୟତୀତ, ଯାହା କମ୍ ସ୍ଥିର ଏବଂ ପ୍ରସ୍ତୁତି ପ୍ରକ୍ରିୟା ସମୟରେ ପ୍ରାୟତଃ ହଜିଯାଏ (33)। ଏହା ସହିତ, ଏହା ଜଣାଯାଏ ଯେ RC ରୁ LH1 ଏବଂ ପ୍ରାକୃତିକ ଚକ୍ରୀୟ ଲିପିଡଗୁଡ଼ିକୁ ଅପସାରଣ କରିବା କାର୍ଯ୍ୟ ଉପରେ ପ୍ରଭାବ ପକାଇପାରେ, ଯେପରିକି ଚାର୍ଜ-ପୃଥକ P+QB-ସ୍ଥିତିର ସଂକ୍ଷିପ୍ତ ଜୀବନକାଳ (31, 34, 35)। ତେଣୁ, ଆମେ ଅନୁମାନ କରୁଛୁ ଯେ RC ଚାରିପାଖରେ ଥିବା ସ୍ଥାନୀୟ LH1 ବଳୟର ଅସ୍ତିତ୍ୱ "ବନ୍ଦ" QB ସ୍ଥାନକୁ ବଜାୟ ରଖିପାରେ, ଯାହା ଦ୍ଵାରା QB ନିକଟରେ ସ୍ଥାନୀୟ ପରିବେଶକୁ ସଂରକ୍ଷଣ କରାଯାଇପାରିବ।
ଯଦିଓ ଆପୋଲିପୋପ୍ରୋଟିନ (QB କ୍ୱିନୋନ ବିନା) ଏବଂ ସମ୍ପୂର୍ଣ୍ଣ ଗଠନ ଘଟଣାଗୁଡ଼ିକର ଏକ କ୍ରମ ପରିବର୍ତ୍ତେ QB ସାଇଟର ପରିବର୍ତ୍ତନର କେବଳ ଦୁଇଟି ସ୍ନାପସଟ୍ ପ୍ରତିନିଧିତ୍ୱ କରେ, ଏପରି ସୂଚନା ଅଛି ଯେ ସବଷ୍ଟ୍ରେଟ୍ ପ୍ରତିରୋଧକୁ ବାଧିତ କରିବା ପାଇଁ ହାଇଡ୍ରୋକ୍ୱିନୋନ ଦ୍ୱାରା ପୁନଃବାନ୍ଧନକୁ ରୋକିବା ପାଇଁ ବନ୍ଧନକୁ ଗେଟ୍ କରାଯାଇପାରିବ। ଆପୋଲିପୋପ୍ରୋଟିନର QB ସାଇଟ ନିକଟରେ କ୍ୱିନୋଲ ଏବଂ କ୍ୱିନୋନର ପାରସ୍ପରିକ କ୍ରିୟା ଭିନ୍ନ ହୋଇପାରେ, ଯାହା RC ଦ୍ୱାରା ଏହାର ପ୍ରତ୍ୟାଖ୍ୟାନକୁ ନେଇଥାଏ। ଏହା ବହୁ ଦିନ ଧରି ପ୍ରସ୍ତାବିତ ହୋଇଛି ଯେ ସଂରଚନାଗତ ପରିବର୍ତ୍ତନଗୁଡ଼ିକ କ୍ୱିନୋନଗୁଡ଼ିକର ବନ୍ଧନ ଏବଂ ହ୍ରାସରେ ଏକ ଭୂମିକା ଗ୍ରହଣ କରେ। ଅନ୍ଧାର ଅନୁକୂଳନ ପରେ କ୍ୱିନୋନଗୁଡ଼ିକୁ ହ୍ରାସ କରିବା ପାଇଁ ଫ୍ରିଜଡ୍ RCଗୁଡ଼ିକର କ୍ଷମତା ଦୁର୍ବଳ ହୋଇଯାଏ (36); ଏକ୍ସ-ରେ କ୍ରିଷ୍ଟାଲୋଗ୍ରାଫି ଦର୍ଶାଏ ଯେ ଏହି କ୍ଷତି QB କ୍ୱିନୋନଗୁଡ଼ିକ ସକ୍ରିୟ ପ୍ରକ୍ସିମାଲ ସ୍ଥିତି (26) ରୁ ପ୍ରାୟ 4.5 Å "ଦୂରବର୍ତ୍ତୀ" ସଂରଚନାରେ ଫସି ରହିବା ଯୋଗୁଁ ହୋଇଛି, 37)। ଆମେ ପରାମର୍ଶ ଦେଉଛୁ ଯେ ଏହି ଦୂରବର୍ତ୍ତୀ ବନ୍ଧନ ରୂପାନ୍ତରଣ ହେଉଛି ଆପୋଲିପୋପ୍ରୋଟିନ ଏବଂ ପୂର୍ଣ୍ଣ ବଳୟ ଗଠନ ମଧ୍ୟରେ ମଧ୍ୟବର୍ତ୍ତୀ ଅବସ୍ଥାର ଏକ ସ୍ନାପସଟ୍, ଯାହା କ୍ୱିନୋନ ସହିତ ପ୍ରାରମ୍ଭିକ ପାରସ୍ପରିକ କ୍ରିୟା ଏବଂ QB ସାଇଟ୍ ଖୋଲିବା ପରେ ହୋଇଥାଏ।
କିଛି ଫଟୋଟ୍ରୋଫିକ୍ ଜୀବାଣୁ ଏବଂ ସାଇନୋବ୍ୟାକ୍ଟେରିଆ, ଶୈବାଳ ଏବଂ ଉଦ୍ଭିଦର PSII ଜଟିଳରେ ମିଳୁଥିବା ପ୍ରକାର II RC ର ଗଠନାତ୍ମକ ଏବଂ କାର୍ଯ୍ୟକ୍ଷମ ସଂରକ୍ଷଣ ଅଛି (38)। ଚିତ୍ର 6 (D ଏବଂ E) ରେ ଦେଖାଯାଇଥିବା ଗଠନାତ୍ମକ ସଂରଚନା PSII RC ଏବଂ ଜୀବାଣୁ RC ଜଟିଳର QB ସାଇଟ୍ ମଧ୍ୟରେ ସମାନତା ଉପରେ ଗୁରୁତ୍ୱାରୋପ କରେ। ଏହି ତୁଳନା ଦୀର୍ଘ ସମୟ ଧରି କ୍ୱିନୋନ୍ ବନ୍ଧନ ଏବଂ ହ୍ରାସର ନିକଟ ସମ୍ପର୍କିତ ପ୍ରଣାଳୀ ଅଧ୍ୟୟନ ପାଇଁ ଏକ ମଡେଲ୍ ହୋଇଛି। ପୂର୍ବ ପ୍ରକାଶନଗୁଡ଼ିକ ପରାମର୍ଶ ଦେଇଥିଲେ ଯେ ସଂରଚନାମୂଳକ ପରିବର୍ତ୍ତନଗୁଡ଼ିକ କ୍ୱିନୋନ୍ ର PSII ହ୍ରାସ ସହିତ ହୋଇଥାଏ (39, 40)। ତେଣୁ, RC ର ବିବର୍ତ୍ତନମୂଳକ ସଂରକ୍ଷଣକୁ ବିଚାର କରି, ଏହି ପୂର୍ବରୁ ଅବଲୋକିତ ବନ୍ଧନ ପ୍ରକ୍ରିୟା ଅମ୍ଳଜାନଯୁକ୍ତ ଫଟୋଟ୍ରୋଫିକ୍ ଉଦ୍ଭିଦରେ PSII RC ର QB ସାଇଟ୍ ପାଇଁ ମଧ୍ୟ ପ୍ରଯୁଜ୍ୟ ହୋଇପାରେ।
Rps ΔpufW (ଲେବଲ୍ ବିହୀନ pufW ବିଲୋପ) ଏବଂ PufW-His (C-ଟର୍ମିନାଲ 10x His-tagged ପ୍ରୋଟିନ୍-W ପ୍ରାକୃତିକ pufW ଲୋକସ୍ ରୁ ପ୍ରକାଶିତ) ଷ୍ଟ୍ରେନ୍। palustris CGA009 ଆମର ପୂର୍ବ କାର୍ଯ୍ୟ (16) ରେ ବର୍ଣ୍ଣନା କରାଯାଇଥିଲା। ଏହି ଷ୍ଟ୍ରେନ୍ ଏବଂ ଆଇସୋଜେନିକ୍ ୱାଇଲ୍ଡ-ଟାଇପ୍ ପ୍ୟାରେଣ୍ଟକୁ PYE (ପ୍ରତ୍ୟେକ 5 g ଲିଟର -1) (-80 °C ରେ LB ରେ ସଂରକ୍ଷିତ, 50% ( w/v) ଗ୍ଲିସେରଲ୍) ପ୍ରୋଟିନ୍, ଇଷ୍ଟ୍ ଏକ୍ସଟ୍ରାକ୍ଟ ଏବଂ ସକ୍ସିନେଟ୍) ଆଗାର [1.5% ( w/v)] ପ୍ଲେଟ୍ ଉପରେ ଅଳ୍ପ ସଂଖ୍ୟକ କୋଷ ଷ୍ଟ୍ରିକ୍ କରି ଫ୍ରିଜରରୁ ଉଦ୍ଧାର କରାଯାଇଥିଲା। ପ୍ଲେଟ୍‌କୁ ଆନାରୋବିକ୍ ପରିସ୍ଥିତିରେ କୋଠରୀ ତାପମାତ୍ରାରେ ଅନ୍ଧାରରେ ରାତାରାତି ଇନକ୍ୟୁବେଟେଡ୍ କରାଯାଇଥିଲା, ଏବଂ ତା’ପରେ OSRAM 116-W ହାଲୋଜେନ୍ ବଲ୍ବ (RS କମ୍ପୋନେଣ୍ଟସ୍, UK) ଦ୍ୱାରା ପ୍ରଦାନ କରାଯାଇଥିବା ଧଳା ଆଲୋକ (~50 μmolm-2 s-1) ସହିତ 3 ରୁ 5 ଦିନ ପାଇଁ ଆଲୋକିତ କରାଯାଇଥିଲା ଯେପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ ଏକ କଲୋନି ଦେଖାଯାଇ ନ ଥିଲା। ଏକ କଲୋନୀ ବ୍ୟବହାର କରି 10 ମିଲି M22+ ମଧ୍ୟମ (41) କୁ 0.1% (w/v) କାସାମିନୋ ଏସିଡ୍ (ଏଠାରେ M22 ଭାବରେ ଉଲ୍ଲେଖ କରାଯାଇଛି) ସହିତ ପରିପୂରକ କରାଯାଇଥିଲା। କଲଚରକୁ କମ୍ ଅମ୍ଳଜାନ ଅବସ୍ଥାରେ ଅନ୍ଧାରରେ 34°C ତାପମାତ୍ରାରେ 180 rpm ରେ 48 ଘଣ୍ଟା ପାଇଁ ହଲାଇ ଚାଷ କରାଯାଇଥିଲା, ଏବଂ ତାପରେ 70 ମିଲି କଲଚରକୁ ସମାନ ପରିସ୍ଥିତିରେ 24 ଘଣ୍ଟା ପାଇଁ ଟୀକା ଦିଆଯାଇଥିଲା। 1 ମିଲି ଆୟତନ ବିଶିଷ୍ଟ ଏକ ଅର୍ଦ୍ଧ-ବାୟୁଗତ କଲଚରକୁ 30 ମିଲି ସାର୍ବଜନୀନ ସ୍କ୍ରୁ-ଟପ୍ ସ୍ୱଚ୍ଛ କାଚ ବୋତଲରେ 30 ମିଲି M22 ମାଧ୍ୟମକୁ ଟୀକା ଦେବା ପାଇଁ ବ୍ୟବହାର କରାଯାଏ ଏବଂ ଜୀବାଣୁମୁକ୍ତ ଚୁମ୍ବକୀୟ ଶକ୍ତି ଷ୍ଟିରିଂ ରଡ୍ ଦ୍ୱାରା 48 ଘଣ୍ଟା ପାଇଁ ଆନ୍ଦୋଳନ (~50μmolm-2 s-1) ସହିତ ବିକିରଣ କରାଯାଏ। ତାପରେ ସମାନ ପରିସ୍ଥିତିରେ 30 ମିଲି କଲଚରକୁ ପ୍ରାୟ 1 ଲିଟର କଲଚର ସହିତ ଟୀକା ଦିଆଯାଇଥିଲା, ଯାହା ପରେ ~200 μmolm-2 s-1 ରେ ଆଲୋକିତ ପ୍ରାୟ 9 ଲିଟର କଲଚରକୁ 72 ଘଣ୍ଟା ପାଇଁ ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇଥିଲା। କୋଷଗୁଡ଼ିକୁ 7132 RCF ରେ 30 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ ସେଣ୍ଟ୍ରିଫ୍ୟୁଗେସନ୍ ଦ୍ୱାରା ଅମଳ କରାଯାଇଥିଲା, 20 mM tris-HCl (pH 8.0) ର ~10 ml ରେ ପୁନଃସ୍ଥାପିତ କରାଯାଇଥିଲା, ଏବଂ ଆବଶ୍ୟକ ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ -20°C ରେ ସଂରକ୍ଷଣ କରାଯାଇଥିଲା।
ତରଳାଇବା ପରେ, ପୁନଃସ୍ଥାପିତ କୋଷଗୁଡ଼ିକରେ କିଛି ଡିଅକ୍ସିରାଇବୋନ୍ୟୁକ୍ଲିଜ୍ I (ମର୍କ, ୟୁକେ), ଲାଇସୋଜାଇମ୍ (ମର୍କ, ୟୁକେ) ଏବଂ ଦୁଇଟି ରୋଚ୍ ହୋଲୋଏନଜାଇମ୍ ପ୍ରୋଟିଜ୍ ଇନହିବିଟର୍ ଟାବଲେଟ୍ (ମର୍କ, ୟୁକେ) ମିଶାନ୍ତୁ। ଏକ 20,000 psi ଫରାସୀ ଚାପ କୋଷ (ଆମିଙ୍କୋ, ୟୁଏସଏ) ରେ, କୋଷଗୁଡ଼ିକ 8 ରୁ 12 ଥର ବିଭ୍ରାନ୍ତ ହୋଇଥିଲା। 4°C ରେ 15 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ 18,500 RCF ରେ ସେଣ୍ଟ୍ରିଫ୍ୟୁଗେସନ୍ ଦ୍ୱାରା ଅଖଣ୍ଡ କୋଷ ଏବଂ ଅଦ୍ରବଣୀୟ ଅବଶେଷକୁ ଅପସାରଣ କରିବା ପରେ, 43,000°C ରେ 2 ଘଣ୍ଟା ପାଇଁ 113,000 RCF ରେ ସେଣ୍ଟ୍ରିଫ୍ୟୁଗେସନ୍ ଦ୍ୱାରା ପିଗମେଣ୍ଟେଡ୍ ଲାଇସେଟ୍ ରୁ ପରଦାକୁ ଅବକ୍ଷେପ କରାଯାଇଥିଲା। ଦ୍ରବଣୀୟ ଭଗ୍ନାଂଶକୁ ତ୍ୟାଗ କରନ୍ତୁ ଏବଂ ରଙ୍ଗୀନ ପରଦାକୁ 100 ରୁ 200 ମିଲି 20 mM tris-HCl (pH 8.0) ରେ ପୁନଃସ୍ଥାପିତ କରନ୍ତୁ ଏବଂ କୌଣସି ଦୃଶ୍ୟମାନ ସମଷ୍ଟି ନହେବା ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ ଏକତ୍ର କରନ୍ତୁ। ଝୁଲନ୍ତା ପରଦାକୁ 20 mM tris-HCl (pH 8.0) (Anatrace, USA) ରେ 2% (w/v) β-DDM ଧାରଣ କରି ଅନ୍ଧାରରେ 4°C ରେ 1 ଘଣ୍ଟା ପାଇଁ ଧୀରେ ଧୀରେ ଘୁଞ୍ଚାଇ ଦିଆଯାଇଥିଲା। ତା'ପରେ ଅବଶିଷ୍ଟ ଅଦ୍ରବଣୀୟ ପଦାର୍ଥଗୁଡ଼ିକୁ ବାହାର କରିବା ପାଇଁ 70°C ରେ ସେଣ୍ଟ୍ରିଫ୍ୟୁଜ୍ କରି 4°C ରେ 150,000 RCF କୁ ଦ୍ରବୀଭୂତ କରାଯାଇଥିଲା।
ΔpufW ଷ୍ଟ୍ରେନରୁ ଦ୍ରବଣୀୟ ପରଦାକୁ 50 ମିଲି DEAE ସେଫାରୋଜ୍ ଆୟନ୍ ଏକ୍ସଚେଞ୍ଜ ସ୍ତମ୍ଭରେ ପ୍ରୟୋଗ କରାଯାଇଥିଲା ଯାହାର ତିନୋଟି ସ୍ତମ୍ଭ ଭଲ୍ୟୁମ୍ (CV) ବାଇଣ୍ଡିଂ ବଫର [20 mM tris-HCl (pH 8.0) ଯାହାର 0.03% (w / v) β-DDM] ଥିଲା। ଦୁଇଟି CV ବାଇଣ୍ଡିଂ ବଫର ସହିତ ସ୍ତମ୍ଭକୁ ଧୋଇ ଦିଅନ୍ତୁ, ଏବଂ ତାପରେ 50 mM NaCl ଧାରଣ କରିଥିବା ଦୁଇଟି ବାଇଣ୍ଡିଂ ବଫର ସହିତ ସ୍ତମ୍ଭକୁ ଧୋଇ ଦିଅନ୍ତୁ। RC-LH116 କମ୍ପ୍ଲେକ୍ସକୁ 1.75 CV ରେ 150 ରୁ 300 mM NaCl (ବାଇଣ୍ଡିଂ ବଫରରେ) ର ଏକ ରେଖୀୟ ଗ୍ରେଡିଏଣ୍ଟ ସହିତ ଏଲୁଟ୍ କରାଯାଇଥିଲା, ଏବଂ ଅବଶିଷ୍ଟ ବାଇଣ୍ଡିଂ କମ୍ପ୍ଲେକ୍ସକୁ 0.5 CV ରେ 300 mM NaCl ଧାରଣ କରିଥିବା ଏକ ବାଇଣ୍ଡିଂ ବଫର ସହିତ ଏଲୁଟ୍ କରାଯାଇଥିଲା। 250 ଏବଂ 1000 nm ମଧ୍ୟରେ ଅବଶୋଷଣ ସ୍ପେକ୍ଟ୍ରମ୍ ସଂଗ୍ରହ କରନ୍ତୁ, 1 ରୁ ଅଧିକ ଅବଶୋଷଣ ଅନୁପାତ (A880/A280) ସହିତ ଭଗ୍ନାଂଶକୁ 880 ରୁ 280 nm ରେ ରଖନ୍ତୁ, ଏହାକୁ ବାଇଣ୍ଡିଂ ବଫରରେ ଦୁଇଥର ପତଳା କରନ୍ତୁ, ଏବଂ DEAE ସ୍ତମ୍ଭରେ ପୁନର୍ବାର ସମାନ ପ୍ରକ୍ରିୟା ବ୍ୟବହାର କରନ୍ତୁ ପର୍ଯ୍ୟାପ୍ତକରଣ ଉପରେ। 1.7 ରୁ ଅଧିକ A880/A280 ଅନୁପାତ ଏବଂ 3.0 ରୁ ଅଧିକ A880/A805 ଅନୁପାତ ସହିତ ଭଗ୍ନାଂଶଗୁଡ଼ିକୁ ପତଳା କରନ୍ତୁ, ଆୟନ ବିନିମୟର ତୃତୀୟ ପର୍ଯ୍ୟାୟ କରନ୍ତୁ, ଏବଂ 2.2 ରୁ ଅଧିକ A880/A280 ଅନୁପାତ ଏବଂ 5.0 ରୁ ଅଧିକ A880/A805 ଅନୁପାତ ସହିତ ଭଗ୍ନାଂଶଗୁଡ଼ିକୁ ରଖନ୍ତୁ। ଆଂଶିକ ଭାବରେ ପରିଷ୍କୃତ ଜଟିଳକୁ ଏକ Amicon 100,000 ଆଣବିକ ଓଜନ କଟ୍-ଅଫ୍ (MWCO) ସେଣ୍ଟ୍ରିଫ୍ୟୁଗାଲ୍ ଫିଲ୍ଟର (Merck, UK) ରେ ~2 ml ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ ଘନିଷ୍ଠ କରାଯାଇଥିଲା, ଏବଂ 200 mM NaCl ବଫର ଧାରଣ କରିଥିବା ଏକ Superdex 200 16/600 ଆକାର ବର୍ଜନ ସ୍ତମ୍ଭ (GE Healthcare, US) ରେ ଲୋଡ୍ କରାଯାଇଥିଲା, ଏବଂ ତାପରେ 1.5 CV ରେ ସମାନ ବଫରରେ ଏଲିଟ କରାଯାଇଥିଲା। ଆକାର ବର୍ଜନ ଭଗ୍ନାଂଶର ଅବଶୋଷଣ ସ୍ପେକ୍ଟ୍ରା ସଂଗ୍ରହ କରନ୍ତୁ, ଏବଂ ଅବଶୋଷଣ ସ୍ପେକ୍ଟ୍ରାକୁ 2.4 ରୁ ଅଧିକ A880/A280 ଅନୁପାତ ଏବଂ 5.8 ରୁ 100 A880 ରୁ ଅଧିକ A880/A805 ଅନୁପାତ ସହିତ ଘନିଷ୍ଠ କରନ୍ତୁ, ଏବଂ ତୁରନ୍ତ କ୍ରାଇଓ-TEM ଗ୍ରୀଡ୍ ପ୍ରସ୍ତୁତି କିମ୍ବା ସଂରକ୍ଷଣ ପାଇଁ ବ୍ୟବହାର କରନ୍ତୁ। ଆବଶ୍ୟକ ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ -80°C ରେ ରଖନ୍ତୁ।
PufW-His ଷ୍ଟ୍ରେନରୁ ଦ୍ରବଣୀୟ ପରଦାକୁ IMAC ବଫର (GE Healthcare) ରେ 20 ml HisPrep FF Ni-NTA Sepharose ସ୍ତମ୍ଭ (20 mM tris-HCl (pH 8.0) 200 mM NaCl ଏବଂ 0.03% (w/w)) ସହିତ ପ୍ରୟୋଗ କରାଯାଇଥିଲା। ସ୍ତମ୍ଭକୁ ପାଞ୍ଚଟି CV IMAC ବଫର ସହିତ ଧୋଇ ଦିଆଯାଇଥିଲା, ଏବଂ ତା’ପରେ 10 mM ହିଷ୍ଟିଡିନ୍ ଧାରଣ କରିଥିବା ପାଞ୍ଚଟି CV IMAC ବଫର ସହିତ ଧୋଇ ଦିଆଯାଇଥିଲା। କୋର କମ୍ପ୍ଲେକ୍ସକୁ 100 mM ହିଷ୍ଟିଡିନ୍ ଧାରଣ କରିଥିବା ପାଞ୍ଚଟି IMAC ବଫର ସହିତ ସ୍ତମ୍ଭରୁ ବାହାର କରାଯାଇଥିଲା। RC-LH114-W କମ୍ପ୍ଲେକ୍ସ ଧାରଣ କରିଥିବା ଭଗ୍ନାଂଶକୁ Amicon 100,000 MWCO ଫିଲ୍ଟର (Merck, UK) ସହିତ ସଜ୍ଜିତ ଏକ ଷ୍ଟର୍ଡ୍ ଟ୍ୟାଙ୍କରେ ~10 ml ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ ଘନିଷ୍ଠ କରାଯାଇଛି, ବାଇଣ୍ଡିଂ ବଫର ସହିତ 20 ଥର ତରଳ କରାଯାଇଛି, ଏବଂ ତା’ପରେ 25 ml ରେ ଯୋଡାଯାଇଛି। DEAE Sepharose ସ୍ତମ୍ଭରେ, ବଫର ସହିତ ବନ୍ଧିତ ଚାରୋଟି CV ପୂର୍ବରୁ ବ୍ୟବହାର କରାଯାଏ। ଚାରୋଟି CV ବାଇଣ୍ଡିଂ ବଫର ସହିତ ସ୍ତମ୍ଭକୁ ଧୋଇ ଦିଅନ୍ତୁ, ତାପରେ 0 ରୁ 100 mM NaCl (ବାଇଣ୍ଡିଂ ବଫରରେ) ର ଏକ ରେଖୀୟ ଗ୍ରାଡିଏଣ୍ଟରେ ଆଠଟି CV ଉପରେ କମ୍ପ୍ଲେକ୍ସକୁ ଏଲୁଟ୍ କରନ୍ତୁ, ଏବଂ 100 mM ବାଇଣ୍ଡିଂ ବଫର ଥିବା ଅବଶିଷ୍ଟ ଚାରୋଟି CV 2.4 ରୁ ଅଧିକ A880/A280 ଅନୁପାତ ଏବଂ 4.6 ରୁ ଅଧିକ A880/A805 ଅନୁପାତ ସହିତ ମିଶ୍ରିତ ସୋଡିୟମ୍ କ୍ଲୋରାଇଡ୍ ଉପରେ ଏଲୁଟ୍ ହୋଇଥିବା ଅବଶିଷ୍ଟ କମ୍ପ୍ଲେକ୍ସକୁ ଏକ Amicon 100,000 MWCO କେନ୍ଦ୍ରୀଭୂତ ଫିଲ୍ଟରରେ ~2 ମିଲି ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ କେନ୍ଦ୍ରୀଭୂତ କରାଯାଇଥିଲା, ଏବଂ ପୂର୍ବରୁ 1.5 CV IMAC ସହିତ ପୂର୍ଣ୍ଣ କରାଯାଇଥିଲା ବଫରକୁ ସୁସଙ୍ଗତ ସୁପରଡେକ୍ସ 200 16/600 ଆକାର ବର୍ଜନ ସ୍ତମ୍ଭ ସହିତ, ଏବଂ ତାପରେ 1.5 CV ଉପରେ ସମାନ ବଫରରେ ଏଲୁଟ୍ କରାଯାଇଥିଲା। ଆକାର-ବର୍ଜନ ଭଗ୍ନାଂଶର ଅବଶୋଷଣ ସ୍ପେକ୍ଟ୍ରା ସଂଗ୍ରହ କରନ୍ତୁ ଏବଂ 2.1 ରୁ ଅଧିକ A880/A280 ଅନୁପାତ ଏବଂ 4.6 ରୁ 100 A880 ରୁ ଅଧିକ A880/A805 ଅନୁପାତ ସହିତ ଅବଶୋଷଣ ସ୍ପେକ୍ଟ୍ରାକୁ କେନ୍ଦ୍ରିତ କରନ୍ତୁ, ଯାହା ତୁରନ୍ତ ଫ୍ରିଜନ୍ TEM ଗ୍ରୀଡ୍ ପ୍ରସ୍ତୁତି ପାଇଁ ବ୍ୟବହୃତ ହୁଏ କିମ୍ବା ଆବଶ୍ୟକତା ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ -80°C ରେ ସଂରକ୍ଷଣ କରାଯାଏ।
ନିମ୍ନ ତାପମାତ୍ରା TEM ଗ୍ରୀଡ୍ ପ୍ରସ୍ତୁତ କରିବା ପାଇଁ ଏକ Leica EM GP ଇମର୍ସନ ଫ୍ରିଜର ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇଥିଲା। ଏହି କମ୍ପ୍ଲେକ୍ସକୁ IMAC ବଫରରେ 50 ର A880 ରେ ତରଳ କରାଯାଇଥିଲା, ଏବଂ ତା’ପରେ 5μl କୁ ଏକ ନୂତନ ଗ୍ଲୋ-ଡିସଚାର୍ଜଡ୍ QUANTIFOIL 1.2/1.3 କାର୍ବନ-କୋଟେଡ୍ ତମ୍ବା ଜାଲରେ ଲୋଡ୍ କରାଯାଇଥିଲା (Agar Scientific, UK)। ଗ୍ରୀଡ୍‌କୁ 20°C ଏବଂ 60% ଆପେକ୍ଷିକ ଆର୍ଦ୍ରତାରେ 30 ସେକେଣ୍ଡ ପାଇଁ ଇନକ୍ୟୁବେଟ୍ କରନ୍ତୁ, ତା’ପରେ ଏହାକୁ 3 ସେକେଣ୍ଡ ପାଇଁ ଶୁଖାନ୍ତୁ, ଏବଂ ତା’ପରେ -176°C ରେ ତରଳ ଇଥେନରେ ଏହାକୁ ନିବାରଣ କରନ୍ତୁ।
RC-LH114-W କମ୍ପ୍ଲେକ୍ସର ତଥ୍ୟ eBIC (ଇଲେକ୍ଟ୍ରୋନିକ୍ ବାୟୋଇମେଜିଂ ସେଣ୍ଟର) (ବ୍ରିଟିଶ୍ ଡାଇମଣ୍ଡ ଲାଇଟ୍ ସୋର୍ସ) ରେ ଏକ ଟାଇଟାନ୍ କ୍ରିଓସ୍ ମାଇକ୍ରୋସ୍କୋପ୍ ସହିତ ରେକର୍ଡ କରାଯାଇଥିଲା, ଯାହା 300kV ର ତ୍ୱରାନ୍ୱିତ ଭୋଲଟେଜରେ କାର୍ଯ୍ୟ କରେ, ଯାହାର ନାମମାତ୍ର ବୃଦ୍ଧି 130,000× ଏବଂ ଏକ ଶକ୍ତି - 20 eV ର ଏକ ବ୍ୟବଧାନ ବାଛନ୍ତୁ। ତଥ୍ୟ ସଂଗ୍ରହ ପାଇଁ ଗଣନା ମୋଡ୍ ରେ ପ୍ରତିଛବି ରେକର୍ଡ କରିବା ପାଇଁ K2 ଶିଖର ଡିଟେକ୍ଟର ସହିତ ଏକ Gatan 968 GIF କ୍ୱାଣ୍ଟମ୍ ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇଥିଲା। କ୍ୟାଲିବ୍ରେଟେଡ୍ ପିକ୍ସେଲ ଆକାର 1.048Å, ଏବଂ ଡୋଜ୍ ହାର 3.83 e-Å-2s-1। 11 ସେକେଣ୍ଡରେ ଚଳଚ୍ଚିତ୍ର ସଂଗ୍ରହ କରି ଏହାକୁ 40 ଭାଗରେ ବିଭକ୍ତ କରିଥିଲେ। ମାଇକ୍ରୋସ୍କୋପ୍ ପୁନଃଫୋକସ୍ କରିବା ପାଇଁ କାର୍ବନ-ଆବୃତ କ୍ଷେତ୍ର ବ୍ୟବହାର କରନ୍ତୁ, ଏବଂ ତା’ପରେ ପ୍ରତି ଗାତରେ ତିନୋଟି ଚଳଚ୍ଚିତ୍ର ସଂଗ୍ରହ କରନ୍ତୁ। ମୋଟ 3130 ଚଳଚ୍ଚିତ୍ର ସଂଗ୍ରହ କରାଯାଇଥିଲା, ଯାହାର ଡିଫୋକସ୍ ମୂଲ୍ୟ -1 ଏବଂ -3μm ମଧ୍ୟରେ ଥିଲା।
ଆଷ୍ଟରବରୀ ବାୟୋଷ୍ଟ୍ରକ୍ଚର ଲାବୋରେଟୋରୀ (ଲିଡ୍ସ ବିଶ୍ୱବିଦ୍ୟାଳୟ, ୟୁକେ) ରେ ସମାନ ମାଇକ୍ରୋସ୍କୋପ୍ ବ୍ୟବହାର କରି RC-LH116 କମ୍ପ୍ଲେକ୍ସ ପାଇଁ ତଥ୍ୟ ସଂଗ୍ରହ କରାଯାଇଥିଲା। 130 k ର ବୃଦ୍ଧି ସହିତ ଗଣନା ମୋଡ୍ ରେ ତଥ୍ୟ ସଂଗ୍ରହ କରାଯାଇଥିଲା, ଏବଂ 4.6 e-Å-2s-1 ର ଡୋଜ୍ ସହିତ ପିକ୍ସେଲ ଆକାରକୁ 1.065 Å ରେ କ୍ୟାଲିବ୍ରେଟ୍ କରାଯାଇଥିଲା। ଚଳଚ୍ଚିତ୍ରଟି 12 ସେକେଣ୍ଡରେ ରେକର୍ଡ କରାଯାଇଥିଲା ଏବଂ 48 ଭାଗରେ ବିଭକ୍ତ କରାଯାଇଥିଲା। ମୋଟ 3359 ଫିଲ୍ମ ସଂଗ୍ରହ କରାଯାଇଥିଲା, ଯାହାର ଡିଫୋକସ୍ ମୂଲ୍ୟ -1 ଏବଂ -3μm ମଧ୍ୟରେ ଥିଲା।
ସମସ୍ତ ତଥ୍ୟ ପ୍ରକ୍ରିୟାକରଣ Relion 3.0 ପାଇପଲାଇନ୍ (42) ରେ କରାଯାଏ। ଡୋଜ୍ ଓଜନ ଦ୍ୱାରା ବିମ୍ ଗତିକୁ ସଂଶୋଧନ କରିବା ପାଇଁ Motioncorr 2 (43) ବ୍ୟବହାର କରନ୍ତୁ, ଏବଂ ତାପରେ CTF (କଣ୍ଟ୍ରାଷ୍ଟ ଟ୍ରାନ୍ସଫର ଫଙ୍କସନ୍) ପାରାମିଟର ନିର୍ଣ୍ଣୟ କରିବା ପାଇଁ CTFFIND 4.1 (44) ବ୍ୟବହାର କରନ୍ତୁ। ଏହି ପ୍ରାରମ୍ଭିକ ପ୍ରକ୍ରିୟାକରଣ ପର୍ଯ୍ୟାୟ ପରେ ସାଧାରଣ ଫଟୋମାଇକ୍ରୋଗ୍ରାଫ୍ ଚିତ୍ର 2. S16 ରେ ଦେଖାଯାଇଛି। ସ୍ୱୟଂଚାଳିତ ଚୟନ ଟେମ୍ପଲେଟ୍ ଏକ 250-ପିକ୍ସେଲ୍ ଫ୍ରେମ୍ ରେ ପ୍ରାୟ 250 ପିକ୍ସେଲ୍ 1000 କଣିକାକୁ ମାନୁଆଲି ଚୟନ କରି ଏବଂ କୌଣସି ସନ୍ଦର୍ଭ ଦୁଇ-ପରିମାଣ (2D) ବର୍ଗୀକରଣ ନକରି ସୃଷ୍ଟି କରାଯାଏ, ଯାହା ଦ୍ଵାରା ନମୁନା ପ୍ରଦୂଷଣ ପୂରଣ କରୁଥିବା କିମ୍ବା କୌଣସି ସ୍ପଷ୍ଟ ବୈଶିଷ୍ଟ୍ୟ ନଥିବା ସେହି ବର୍ଗୀକରଣକୁ ପ୍ରତ୍ୟାଖ୍ୟାନ କରାଯାଏ। ତାପରେ, ସମସ୍ତ ମାଇକ୍ରୋଫୋଟୋଗ୍ରାଫ୍ ରେ ସ୍ୱୟଂଚାଳିତ ଚୟନ କରାଯାଇଥିଲା, ଏବଂ RC-LH114-W 849,359 କଣିକା ଥିଲା, ଏବଂ RC-LH116 ଜଟିଳ 476,547 କଣିକା ଥିଲା। ସମସ୍ତ ଚୟନିତ କଣିକାଗୁଡିକ ଦୁଇଟି ପର୍ଯ୍ୟାୟ ଅଣ-ସନ୍ଦର୍ଭ 2D ବର୍ଗୀକରଣ ଦେଇ ଯାଇଛନ୍ତି, ଏବଂ ପ୍ରତ୍ୟେକ ରନ୍ ପରେ, କାର୍ବନ କ୍ଷେତ୍ର, ନମୁନା ପ୍ରଦୂଷଣ, କୌଣସି ସ୍ପଷ୍ଟ ବୈଶିଷ୍ଟ୍ୟ କିମ୍ବା ଦୃଢ଼ ଭାବରେ ଓଭରଲାପ୍ ହେଉଥିବା କଣିକାଗୁଡିକୁ ପ୍ରତ୍ୟାଖ୍ୟାନ କରାଯାଇଛି, ଯାହା ଫଳରେ ଯଥାକ୍ରମେ 772,033 (90.9%) ଏବଂ 359,678 (75.5%) କଣିକାଗୁଡିକ RC-LH114-W ଏବଂ RC-LH116 ର 3D ବର୍ଗୀକରଣ ପାଇଁ ବ୍ୟବହୃତ ହୋଇଛି। ପ୍ରାରମ୍ଭିକ 3D ସନ୍ଦର୍ଭ ମଡେଲ ଷ୍ଟୋକାଷ୍ଟିକ୍ ଗ୍ରେଡିଏଣ୍ଟ ଡିସେଣ୍ଟ ପଦ୍ଧତି ବ୍ୟବହାର କରି ସୃଷ୍ଟି କରାଯାଇଥିଲା। ପ୍ରାରମ୍ଭିକ ମଡେଲକୁ ଏକ ସନ୍ଦର୍ଭ ଭାବରେ ବ୍ୟବହାର କରି, ଚୟନିତ କଣିକାଗୁଡିକୁ 3D ରେ ଚାରୋଟି ବର୍ଗରେ ବର୍ଗୀକୃତ କରାଯାଇଛି। ଏହି ବର୍ଗରେ ମଡେଲକୁ ଏକ ସନ୍ଦର୍ଭ ଭାବରେ ବ୍ୟବହାର କରି, ସର୍ବବୃହତ ବର୍ଗରେ କଣିକାଗୁଡିକ ଉପରେ 3D ରିଫାଇନିଂ କରନ୍ତୁ, ତା'ପରେ ଦ୍ରାବକ କ୍ଷେତ୍ରକୁ ଆବୃତ କରିବା ପାଇଁ ପ୍ରାରମ୍ଭିକ 15Å ଲୋ-ପାସ୍ ଫିଲ୍ଟର ବ୍ୟବହାର କରନ୍ତୁ, 6 ପିକ୍ସେଲର ନରମ ଧାର ଯୋଡନ୍ତୁ, ଏବଂ ଶୀର୍ଷ ଡିଟେକ୍ଟରର Gatan K2 ଶିଖର ମଡ୍ୟୁଲେସନ୍ ସ୍ଥାନାନ୍ତର କାର୍ଯ୍ୟକୁ ସଂଶୋଧନ କରିବା ପାଇଁ ପିକ୍ସେଲଗୁଡ଼ିକୁ ପରବର୍ତ୍ତୀ ପ୍ରକ୍ରିୟାକରଣ କରନ୍ତୁ। RC-LH114-W ଡାଟାସେଟ୍ ପାଇଁ, ଏହି ପ୍ରାରମ୍ଭିକ ମଡେଲ୍ କୁ ମାସ୍କର ଧାରରେ ଥିବା ଶକ୍ତିଶାଳୀ ଘନତାକୁ ଅପସାରଣ କରି ପରିବର୍ତ୍ତନ କରାଯାଇଥିଲା (UCSF Chimera ରେ କୋର୍ ଜଟିଳ ଘନତାରୁ ବିଚ୍ଛିନ୍ନ)। ପରିଣାମସ୍ୱରୂପ ମଡେଲ୍ (RC-LH114-W ଏବଂ RC-LH116 ର ରିଜୋଲ୍ୟୁସନ୍ ଯଥାକ୍ରମେ 3.91 ଏବଂ 4.16 Å) 3D ବର୍ଗୀକରଣର ଦ୍ୱିତୀୟ ପର୍ଯ୍ୟାୟ ପାଇଁ ଏକ ସନ୍ଦର୍ଭ ଭାବରେ ବ୍ୟବହାର କରାଯାଏ। ବ୍ୟବହୃତ କଣିକାଗୁଡ଼ିକୁ ପ୍ରାରମ୍ଭିକ 3D ଶ୍ରେଣୀରେ ଗୋଷ୍ଠୀଭୁକ୍ତ କରାଯାଇଛି ଏବଂ ପଡ଼ୋଶୀ ସହିତ ଦୃଢ଼ ସମ୍ପର୍କ ନାହିଁ। ଓଭରଲାପ୍ କିମ୍ବା ସ୍ପଷ୍ଟ ଗଠନାତ୍ମକ ବୈଶିଷ୍ଟ୍ୟଗୁଡ଼ିକର ଅଭାବ। 3D ବର୍ଗୀକରଣର ଦ୍ୱିତୀୟ ପର୍ଯ୍ୟାୟ ପରେ, ସର୍ବାଧିକ ରିଜୋଲ୍ୟୁସନ୍ ସହିତ ବର୍ଗ ଚୟନ କରାଯାଇଥିଲା [RC-LH114-W ପାଇଁ, ଗୋଟିଏ ବର୍ଗ ହେଉଛି 377,703 କଣିକା (44.5%), RC-LH116 ପାଇଁ, ଦୁଇଟି ବର୍ଗ ଅଛି, ମୋଟ 260,752 କଣିକା (54.7%) , ଯେଉଁଠାରେ ସେମାନେ କେବଳ ଏକ ଛୋଟ ପାର୍ଥକ୍ୟ ସହିତ ପ୍ରାରମ୍ଭିକ ଘୂର୍ଣ୍ଣନ ପରେ ସଜାଡ଼ିଲେ ସମାନ ଥାନ୍ତି]। ଚୟନିତ କଣିକାଗୁଡ଼ିକୁ ଏକ 400-ପିକ୍ସେଲ ବାକ୍ସରେ ପୁନଃନିର୍ମାଣ କରାଯାଏ ଏବଂ 3D ରିଫାଇନିଂ ଦ୍ୱାରା ପରିଷ୍କାର କରାଯାଏ। ପ୍ରାରମ୍ଭିକ 15Å କମ୍-ପାସ୍ ଫିଲ୍ଟର, 3 ପିକ୍ସେଲ ମ୍ୟାପ୍ ବିସ୍ତାର ଏବଂ 3 ପିକ୍ସେଲ ସଫ୍ଟ ମାସ୍କ ବ୍ୟବହାର କରି ଦ୍ରାବକ ମାସ୍କ ସୃଷ୍ଟି କରାଯାଏ। ପ୍ରତି-କଣା CTF ପରିଷ୍କାର, ପ୍ରତି-କଣା ଗତି ସଂଶୋଧନ ଏବଂ ପ୍ରତି-କଣା CTF ପରିଷ୍କାରର ଦ୍ୱିତୀୟ ପର୍ଯ୍ୟାୟ ବ୍ୟବହାର କରି, 3D ପରିଷ୍କାର, ଦ୍ରାବକ ମାସ୍କିଂ ଏବଂ ପରବର୍ତ୍ତୀ ପ୍ରକ୍ରିୟାକରଣ ପ୍ରତ୍ୟେକ ପଦକ୍ଷେପ ପରେ ପରିଣାମସ୍ୱରୂପ ଗଠନକୁ ଆହୁରି ପରିଷ୍କାର କରାଯାଏ। FSC (ଫୁରିଅର ସେଲ୍ ସହସଂଯୋଗ ଗୁଣାଙ୍କ) କଟ-ଅଫ୍ ମୂଲ୍ୟ 0.143 ବ୍ୟବହାର କରି, RC-LH114-W ଏବଂ RC-LH116 ର ଅନ୍ତିମ ମଡେଲଗୁଡ଼ିକର ରିଜୋଲ୍ୟୁସନ୍ ଯଥାକ୍ରମେ 2.65 ଏବଂ 2.80Å ଅଟେ। ଅନ୍ତିମ ମଡେଲର FSC ବକ୍ର ଚିତ୍ର 2 ରେ ଦର୍ଶାଯାଇଛି। S17।
ସମସ୍ତ ପ୍ରୋଟିନ୍ କ୍ରମଗୁଡ଼ିକ UniProtKB ରୁ ଡାଉନଲୋଡ୍ କରାଯାଇଛି: LH1-β (PufB; UniProt ID: Q6N9L5); LH1-α (PufA; UniProtID: Q6N9L4); RC-L (PufL; UniProt ID: O83005); RC-M (PufM; UniProt ID: A0A4Z7); RC-H (PuhA; UniProt ID: A0A4Z9); ପ୍ରୋଟିନ୍-W (PufW; UniProt ID: Q6N1K3)। SWISS-MODEL (45) RC ର ଏକ ହୋମୋଲୋଜି ମଡେଲ୍ ନିର୍ମାଣ କରିବା ପାଇଁ ବ୍ୟବହୃତ ହୋଇଥିଲା, ଯେଉଁଥିରେ RC-L, RC-M ଏବଂ RC-H ର ପ୍ରୋଟିନ୍ କ୍ରମ ଏବଂ Rba ର ସ୍ଫଟିକ ଗଠନ ଥାଏ। sphaeroides RC କୁ ଏକ ଟେମ୍ପଲେଟ୍ (PDB ID: 5LSE) (46) ଭାବରେ ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇଥିଲା। ଜେନେରେଟେଡ୍ ମଡେଲକୁ ମ୍ୟାପ୍ (47) ସହିତ ଫିଟ୍ କରିବା ପାଇଁ UCSF Chimera ରେ "ଫିଟ୍ ମ୍ୟାପ୍" ଉପକରଣ ବ୍ୟବହାର କରନ୍ତୁ, ପ୍ରୋଟିନ୍ ଗଠନକୁ ଉନ୍ନତ କରନ୍ତୁ, ଏବଂ ସହକାରକ [4×BChl a (ମନୋମର୍ ଲାଇବ୍ରେରୀ ଅବଶିଷ୍ଟ୍ୟ ନାମ = BCL), 2×BPh a (BPH), ଗୋଟିଏ କିମ୍ବା ଦୁଇଟି ପ୍ରକାରର UQ10 (U10), ଗୋଟିଏ ଅଣ-ହେମ୍ ଲୁହା (Fe) ଏବଂ ଗୋଟିଏ 3,4-ଡାଇହାଇଡ୍ରୋହେକ୍ସାକାର୍ବୋନିଲକୋଲାଇନ୍ (QAK)] ଯୋଡିବା ପାଇଁ Coot (48) ବ୍ୟବହାର କରନ୍ତୁ। ଯେହେତୁ QAK ମୋନୋମର୍ ଲାଇବ୍ରେରୀରେ ଉପଲବ୍ଧ ନାହିଁ, ଏହାକୁ PHENIX (49) ରେ eLBOW ଉପକରଣ ବ୍ୟବହାର କରି ପାରାମିଟରାଇଜ୍ କରାଯାଇଥିଲା।
ପରବର୍ତ୍ତୀ ସମୟରେ, LH1 ସବୟୁନିଟ୍ ନିର୍ମାଣ କରାଯାଇଥିଲା। ପ୍ରାରମ୍ଭରେ, PHENIX (49) ରେ ଥିବା ସ୍ୱୟଂଚାଳିତ ନିର୍ମାଣ ଉପକରଣକୁ ମାନଚିତ୍ର ଏବଂ LH1-α ଏବଂ LH1-β ପ୍ରୋଟିନ୍ କ୍ରମଗୁଡ଼ିକୁ ଇନପୁଟ୍ ଭାବରେ ବ୍ୟବହାର କରି LH1 କ୍ରମର ଅଂଶ ସ୍ୱୟଂଚାଳିତ ଭାବରେ ନିର୍ମାଣ କରିବାକୁ ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇଥିଲା। ସବୁଠାରୁ ସମ୍ପୂର୍ଣ୍ଣ LH1 ସବୟୁନିଟ୍ ଚୟନ କରନ୍ତୁ, ଏହାକୁ ବାହାର କରନ୍ତୁ ଏବଂ Coot ରେ ଲୋଡ୍ କରନ୍ତୁ, ଏଥିରେ ଅନୁପସ୍ଥିତ କ୍ରମକୁ ମାନୁଆଲି ଯୋଡନ୍ତୁ, ଏବଂ ଦୁଇଟି BCls a (BCL) ଏବଂ ଏକ ସ୍ପାଇରିଲୋକ୍ସାନ୍ଥିନ (CRT) ଯୋଡିବା ପୂର୍ବରୁ ସମ୍ପୂର୍ଣ୍ଣ ଗଠନକୁ ମାନୁଆଲି ପରିଷ୍କାର କରନ୍ତୁ [ପ୍ରାସଙ୍ଗିକ Rps ଅନୁସାରେ LH1 ଜଟିଳର ଘନତା ଏବଂ ଜଣାଶୁଣା କାରୋଟିନଏଡ୍ ବିଷୟବସ୍ତୁ। ପ୍ରଜାତି (17)]। ସମ୍ପୂର୍ଣ୍ଣ LH1 ସବୟୁନିଟ୍ କପି କରନ୍ତୁ, ଏବଂ LH1 ଘନତାର ନିକଟବର୍ତ୍ତୀ ଅଣ-ମଡେଲ୍ କ୍ଷେତ୍ରରେ ଡକ୍ କରିବା ପାଇଁ UCSF Chimera "ଡକିଂ ମ୍ୟାପ୍ ଟୁଲ୍" ବ୍ୟବହାର କରନ୍ତୁ, ଏବଂ ତାପରେ Coot ରେ ଏହାକୁ ପରିଷ୍କାର କରନ୍ତୁ; ସମସ୍ତ LH1 ସବୟୁନିଟ୍ ମଡେଲ୍ ହେବା ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ ପ୍ରକ୍ରିୟାକୁ ପୁନରାବୃତ୍ତି କରନ୍ତୁ। RC-LH114-W ଗଠନ ପାଇଁ, Coot ରେ ଅନିର୍ବାଚିତ ଘନତା ବାହାର କରି, ପ୍ରୋଟିନକୁ USCF Chimera ମାନଚିତ୍ରରେ ଅବଶିଷ୍ଟ ଅଣ-ପ୍ରୋଟିନ ଉପାଦାନଗୁଡ଼ିକରୁ ବିଭାଜିତ କରାଯାଏ ଏବଂ ପ୍ରାରମ୍ଭିକ ମଡେଲ ଏବଂ ଅବଶିଷ୍ଟ ସବୟୁନିଟ (ପ୍ରୋଟିନ-W) ମଡେଲିଂ ସ୍ଥାପନ କରିବା ପାଇଁ ଅଟୋବିଲ୍ଡ ଉପକରଣ ବ୍ୟବହାର କରାଯାଏ। PHENIX (49) ରେ। Coot (48) ରେ ପରିଣାମସ୍ୱରୂପ ମଡେଲରେ ଯେକୌଣସି ଅନୁପସ୍ଥିତ କ୍ରମ ଯୋଡନ୍ତୁ, ଏବଂ ତାପରେ ସମଗ୍ର ସବୟୁନିଟକୁ ମାନୁଆଲି ପରିଷ୍କାର କରନ୍ତୁ। ଅବଶିଷ୍ଟ ଅନିର୍ବାଚିତ ଘନତା ଲିପିଡ୍ (CDL = CDL, POPC = 6PL ଏବଂ POPG = PGT ର PDB ମୋନୋମର ଲାଇବ୍ରେରୀ ID), β-DDM ଡିଟରଜେଣ୍ଟ (LMT) ଏବଂ UQ10 ଅଣୁ (U10) ର ମିଶ୍ରଣ ସହିତ ଫିଟ୍ ହୁଏ। ସମ୍ପୂର୍ଣ୍ଣ ପ୍ରାରମ୍ଭିକ ମଡେଲକୁ ସିଦ୍ଧ କରିବା ପାଇଁ Coot (49) ଏବଂ ମାନୁଆଲ ଅପ୍ଟିମାଇଜେସନ ବ୍ୟବହାର କରନ୍ତୁ ଯେପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ ମଡେଲ ପରିସଂଖ୍ୟାନ ଏବଂ ଫିଟର ଦୃଶ୍ୟ ଗୁଣବତ୍ତା ଆହୁରି ଉନ୍ନତ ହୋଇପାରିବ ନାହିଁ। ଶେଷରେ, ସ୍ଥାନୀୟ ମାନଚିତ୍ରକୁ ତୀକ୍ଷ୍ଣ କରିବା ପାଇଁ LocScale (50) ବ୍ୟବହାର କରନ୍ତୁ, ଏବଂ ତାପରେ ଅନିର୍ବାଚିତ ଘନତା ଏବଂ ସ୍ୱୟଂଚାଳିତ ଏବଂ ମାନୁଆଲ ଅପ୍ଟିମାଇଜେସନ ମଡେଲିଂର ଅନେକ ଅନ୍ୟ ଚକ୍ର କରନ୍ତୁ।
ସେମାନଙ୍କ ଘନତା ମଧ୍ୟରେ ଡକ୍ ହୋଇଥିବା ସମ୍ପୃକ୍ତ ପେପ୍ଟାଇଡ୍ସ, ସହକାରକ ଏବଂ ଅନ୍ୟାନ୍ୟ ଲିପିଡ୍ ଏବଂ କ୍ୱିନୋନ୍ ଚିତ୍ର 1 ଏବଂ 2 ରେ ଦର୍ଶାଯାଇଛି। S18 ରୁ S23। ଚୂଡ଼ାନ୍ତ ମଡେଲର ପରିସଂଖ୍ୟାନ ସୂଚନା ସାରଣୀ S1 ରେ ଦର୍ଶାଯାଇଛି।
ଅନ୍ୟଥା ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ନ ହୋଇଥିଲେ, UV/Vis/NIR ଅବଶୋଷଣ ସ୍ପେକ୍ଟ୍ରାକୁ Cary60 ସ୍ପେକ୍ଟ୍ରୋଫୋଟୋମିଟର (Agilent, USA) ରେ 250 nm ରୁ 1000 nm ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ 1 nm ବ୍ୟବଧାନରେ ଏବଂ 0.1s ର ଏକୀକରଣ ସମୟରେ ସଂଗ୍ରହ କରାଯାଇଥିଲା।
ନମୁନାକୁ 1 ର A880 ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ 2 mm ପଥ ସହିତ ଏକ କ୍ୱାର୍ଟଜ୍ କ୍ୟୁଭେଟରେ ପତଳା କରନ୍ତୁ, ଏବଂ 400 ଏବଂ 1000 nm ମଧ୍ୟରେ ଅବଶୋଷଣ ସ୍ପେକ୍ଟ୍ରାଲ୍ ସଂଗ୍ରହ କରନ୍ତୁ। ବୃତ୍ତାକାର ଡାଇକ୍ରୋଇକ୍ ସ୍ପେକ୍ଟ୍ରାକୁ Jasco 810 ସ୍ପେକ୍ଟ୍ରୋପୋଲାରିମିଟର (Jasco, ଜାପାନ) ରେ 400 nm ଏବଂ 950 nm ମଧ୍ୟରେ 1 nm ବ୍ୟବଧାନରେ 20 nm min-1 ସ୍କାନ ହାରରେ ସଂଗ୍ରହ କରାଯାଇଥିଲା।
କୋର ଜଟିଳକୁ ପ୍ରାୟ 50 ର A880 ରେ ଡିଲୁଟ୍ କରି ମୋଲାର ବିଲୁପ୍ତି ଗୁଣାଙ୍କ ନିର୍ଣ୍ଣୟ କରାଯାଏ। 990μl ବାଇଣ୍ଡିଂ ବଫର କିମ୍ବା ମିଥାନଲରେ 10μl ଭଲ୍ୟୁମକୁ ବିଲୁପ୍ତି ବଫର କିମ୍ବା ମିଥାନଲରେ ବିଲୁପ୍ତି କରନ୍ତୁ, ଏବଂ BChl ଅବନତିକୁ କମ କରିବା ପାଇଁ ତୁରନ୍ତ ଅବଶୋଷଣ ସ୍ପେକ୍ଟ୍ରମ୍ ସଂଗ୍ରହ କରନ୍ତୁ। ପ୍ରତ୍ୟେକ ମିଥାନଲ ନମୁନାର BChl ବିଷୟବସ୍ତୁ 54.8 mM-1 cm-1 ର 771 nm ରେ ବିଲୁପ୍ତି ଗୁଣାଙ୍କ ଦ୍ୱାରା ଗଣନା କରାଯାଇଥିଲା, ଏବଂ ବିଲୁପ୍ତି ଗୁଣାଙ୍କ ନିର୍ଣ୍ଣୟ କରାଯାଇଥିଲା (51)। କୋର ଜଟିଳ ସାନ୍ଦ୍ରତା ନିର୍ଣ୍ଣୟ କରିବା ପାଇଁ ମାପ କରାଯାଇଥିବା BChl ସାନ୍ଦ୍ରତାକୁ 32 (RC-LH114-W) କିମ୍ବା 36 (RC-LH116) ଦ୍ୱାରା ବିଭାଜିତ କରନ୍ତୁ, ଯାହା ପରେ ବଫର ବିଲୁପ୍ତି ଗୁଣାଙ୍କରେ ସଂଗୃହିତ ସମାନ ନମୁନାର ଅବଶୋଷଣ ସ୍ପେକ୍ଟ୍ରମ୍ ନିର୍ଣ୍ଣୟ କରିବା ପାଇଁ ବ୍ୟବହୃତ ହୁଏ। ସମାନ୍ତରାଳ। ପ୍ରତ୍ୟେକ ନମୁନା ପାଇଁ ତିନୋଟି ପୁନରାବୃତ୍ତି ମାପ ନିଆଯାଇଥିଲା, ଏବଂ ଗଣନା ପାଇଁ BChl Qy ସର୍ବାଧିକର ହାରାହାରି ଅବଶୋଷଣ ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇଥିଲା। 878 nm ରେ ମାପ କରାଯାଇଥିବା RC-LH114-W ର ବିଲୁପ୍ତ ଗୁଣାଙ୍କ ହେଉଛି 3280±140 mM-1 cm-1, ଯେତେବେଳେ 880 nm ରେ ମାପ କରାଯାଇଥିବା RC-LH116 ର ବିଲୁପ୍ତ ଗୁଣାଙ୍କ ହେଉଛି 3800±30 mM-1 cm-1।
(52) ପଦ୍ଧତି ଅନୁସାରେ UQ10 ପରିମାଣ କରାଯାଇଥିଲା। ସଂକ୍ଷେପରେ, Agilent 1200 HPLC ସିଷ୍ଟମ ବ୍ୟବହାର କରି ବିପରୀତ ପର୍ଯ୍ୟାୟ HPLC (RP-HPLC) କରାଯାଇଥିଲା। 0.02% (w/v) ଫେରିକ୍ କ୍ଲୋରାଇଡ୍ ଧାରଣ କରିଥିବା 50μl 50:50 ମିଥାନଲ୍:କ୍ଲୋରୋଫର୍ମରେ RC-LH116 କିମ୍ବା RC-LH114-W ର ପ୍ରାୟ 0.02 nmol ଦ୍ରବୀଭୂତ କରନ୍ତୁ, ଏବଂ ଏକ ×25 ସେମି ସ୍ତମ୍ଭରେ HPLC ଦ୍ରାବକ (80:20 ମିଥାନଲ୍:2-ପ୍ରୋପାନୋଲ୍) ରେ 40°C ରେ 1 ml-1 min-1 ରେ ଦ୍ରବୀଭୂତ କରନ୍ତୁ। 275 nm (UQ10), 450 nm (କାରୋଟିନୋଇଡ୍ସ) ଏବଂ 780 nm (BChl) ରେ 1 ଘଣ୍ଟା ପାଇଁ ଅବଶୋଷଣ ନିରୀକ୍ଷଣ କରିବା ପାଇଁ HPLC ଦ୍ରାବକରେ ଆଇସୋକ୍ରାଟିକ୍ ଏଲୁସନ୍ କରନ୍ତୁ। 25.5 ମିନିଟରେ 275 nm କ୍ରୋମାଟୋଗ୍ରାମରେ ଶିଖରକୁ ସମନ୍ୱିତ କରାଯାଇଥିଲା, ଯେଉଁଥିରେ ଅନ୍ୟ କୌଣସି ଚିହ୍ନଟଯୋଗ୍ୟ ଯୌଗିକ ନଥିଲା। 0 ରୁ 5.8 nmol (ଚିତ୍ର S14) ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ ଶୁଦ୍ଧ ମାନକଗୁଡ଼ିକର ଇନଜେକ୍ସନରୁ ଗଣନା କରାଯାଇଥିବା କାଲିବ୍ରେସନ୍ କର୍ଭ ସହିତ ନିଷ୍କାସିତ UQ10 ର ମୋଲାର ପରିମାଣ ଗଣନା କରିବା ପାଇଁ ସମନ୍ୱିତ କ୍ଷେତ୍ର ବ୍ୟବହାର କରାଯାଏ। ପ୍ରତ୍ୟେକ ନମୁନାକୁ ତିନୋଟି ପ୍ରତିକୃତିରେ ବିଶ୍ଳେଷଣ କରାଯାଇଥିଲା, ଏବଂ ରିପୋର୍ଟ କରାଯାଇଥିବା ତ୍ରୁଟି ହାରାହାରି SD ସହିତ ସମାନ ଥିଲା।
0.1 ସର୍ବାଧିକ Qy ଅବଶୋଷଣ ସହିତ RC-LH1 କମ୍ପ୍ଲେକ୍ସ ଧାରଣ କରିଥିବା ଏକ ଦ୍ରବଣ ପ୍ରସ୍ତୁତ କରାଯାଇଥିଲା ଯାହା 30 μM ହ୍ରାସିତ ଘୋଡା ହୃଦୟ ସାଇଟୋକ୍ରୋମ c2 (Merck, UK) ଏବଂ 0 ରୁ 50 μMUQ2 (Merck, UK) ସହିତ ପ୍ରସ୍ତୁତ କରାଯାଇଥିଲା। ପ୍ରତ୍ୟେକ UQ2 ସାନ୍ଦ୍ରତାରେ ତିନୋଟି 1-ml ନମୁନା ପ୍ରସ୍ତୁତ କରାଯାଇଥିଲା ଏବଂ ମାପ ପୂର୍ବରୁ ଅନ୍ଧାରରେ ସମ୍ପୂର୍ଣ୍ଣ ଅନୁକୂଳନ ସୁନିଶ୍ଚିତ କରିବା ପାଇଁ ରାତାରାତି 4°C ରେ ଅନ୍ଧାରରେ ଇନକ୍ୟୁବେଟେଡ୍ କରାଯାଇଥିଲା। ଦ୍ରବଣକୁ ଏକ OLIS RSM1000 ମଡ୍ୟୁଲାର୍ ସ୍ପେକ୍ଟ୍ରୋଫୋଟୋମିଟରରେ ଲୋଡ୍ କରାଯାଇଥିଲା ଯାହା 300 nm ଜାଳେଣି/500 ଲାଇନ୍ ଗ୍ରେଟିଂ, 1.24 mm ଇନଲେଟ୍, 0.12 mm ମଧ୍ୟମ ଏବଂ 0.6 mm ଆଉଟଲେଟ୍ ସ୍ଲିଟ୍ ସହିତ ସଜ୍ଜିତ ଥିଲା। ଉତ୍ତେଜନା ଆଲୋକକୁ ବାଦ ଦେବା ପାଇଁ ନମୁନା ଫଟୋଟ୍ୟୁବ୍ ଏବଂ ରେଫରେନ୍ସ ଫଟୋମଲ୍ଟିପ୍ଲାୟାର୍ ଟ୍ୟୁବ୍ ପ୍ରବେଶ ପଥରେ 600 nm ଲମ୍ବା ପାସ୍ ଫିଲ୍ଟର ରଖାଯାଇଛି। 0.15 ସେକେଣ୍ଡର ଏକୀକରଣ ସମୟ ସହିତ 550 nm ରେ ଅବଶୋଷଣ ନିରୀକ୍ଷଣ କରାଯାଇଥିଲା। ଉତ୍ତେଜନା ଆଲୋକ 880 nm M880F2 LED (ଲାଇଟ୍ ଏମିଟିଂ ଡାୟୋଡ୍) (ଥୋର୍ଲାବ୍ସ ଲିମିଟେଡ୍, ୟୁକେ) ରୁ 90% ତୀବ୍ରତାରେ ଏକ ଫାଇବର ଅପ୍ଟିକ୍ କେବୁଲ୍ ମାଧ୍ୟମରେ ଏକ DC2200 ନିୟନ୍ତ୍ରକ (ଥୋର୍ଲାବ୍ସ ଲିମିଟେଡ୍, ୟୁକେ) ମାଧ୍ୟମରେ ନିର୍ଗତ ହୁଏ ଏବଂ 90° କୋଣରେ ଆଲୋକ ଉତ୍ସକୁ ନିର୍ଗତ ହୁଏ। ନମୁନା ଦ୍ୱାରା ପ୍ରାରମ୍ଭିକ ଭାବରେ ଶୋଷିତ ହୋଇନଥିବା ଯେକୌଣସି ଆଲୋକକୁ ଫେରାଇବା ପାଇଁ ମାପକ ବିମ୍ ଦର୍ପଣର ବିପରୀତ। 50 ସେକେଣ୍ଡର ଆଲୋକୀକରଣ ପୂର୍ବରୁ 10 ସେକେଣ୍ଡ ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ ଶୋଷଣକୁ ନିରୀକ୍ଷଣ କରନ୍ତୁ। ତା'ପରେ ଅନ୍ଧାରରେ 60 ସେକେଣ୍ଡ ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ ଶୋଷଣକୁ ଆହୁରି ନିରୀକ୍ଷଣ କରାଯାଇଥିଲା ଯାହା ଦ୍ୱାରା କ୍ୱିନୋଲୋଲ୍ ସ୍ୱତଃସ୍ଫୂର୍ତ୍ତ ଭାବରେ ସାଇଟୋକ୍ରୋମ୍ c23 + କୁ କେତେ ପରିମାଣରେ ହ୍ରାସ କରେ ତାହା ମୂଲ୍ୟାଙ୍କନ କରାଯାଇପାରିବ (କଞ୍ଚା ତଥ୍ୟ ପାଇଁ ଚିତ୍ର S8 ଦେଖନ୍ତୁ)।
0.5 ରୁ 10 ସେକେଣ୍ଡ ମଧ୍ୟରେ ଏକ ରେଖୀୟ ପ୍ରାରମ୍ଭିକ ହାର ଫିଟ୍ କରି (UQ2 ସାନ୍ଦ୍ରତା ଉପରେ ନିର୍ଭର କରି) ଏବଂ ପ୍ରତ୍ୟେକ UQ2 ସାନ୍ଦ୍ରତାରେ ତିନୋଟି ନମୁନାର ହାରାହାରି ହାର କରି ତଥ୍ୟ ପ୍ରକ୍ରିୟାକରଣ କରାଯାଇଥିଲା। ସମ୍ପୃକ୍ତ ବିଲୁପ୍ତି ଗୁଣାଙ୍କ ଦ୍ୱାରା ଗଣନା କରାଯାଇଥିବା RC-LH1 ସାନ୍ଦ୍ରତାକୁ ହାରକୁ ଉତ୍ପ୍ରକାଶକ ଦକ୍ଷତାରେ ରୂପାନ୍ତରିତ କରିବା ପାଇଁ ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇଥିଲା, ଯାହା Origin Pro 2019 (OriginLab, USA) ରେ ପ୍ଲଟ୍ କରାଯାଇଥିଲା, ଏବଂ ସ୍ପଷ୍ଟ Km ଏବଂ Kcat ମୂଲ୍ୟ ନିର୍ଣ୍ଣୟ କରିବା ପାଇଁ Michaelis-Menten ମଡେଲରେ ଫିଟ୍ କରାଯାଇଥିଲା।
କ୍ଷଣସ୍ଥାୟୀ ଅବଶୋଷଣ ମାପ ପାଇଁ, RC-LH1 ନମୁନାକୁ IMAC ବଫରରେ ~2μM ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ ପତଳା କରାଯାଇଥିଲା ଯେଉଁଥିରେ 50 mM ସୋଡିୟମ ଆସ୍କର୍ବେଟ୍ (Merck, USA) ଏବଂ 0.4 mM ଟର୍ବୁଟିନ୍ (Merck, USA) ଥିଲା। ମାପ ପ୍ରକ୍ରିୟାରେ ମୁଖ୍ୟ RC ଦାତା ହ୍ରାସ ପାଇବା (ଅର୍ଥାତ୍ ଫଟୋଅକ୍ସିଡାଇଜ୍ଡ ନୁହେଁ) ନିଶ୍ଚିତ କରିବା ପାଇଁ ଆସ୍କର୍ବିକ୍ ଏସିଡ୍ ଏକ ବଳିଦାନ ଇଲେକ୍ଟ୍ରନ୍ ଦାତା ଭାବରେ ବ୍ୟବହାର କରାଯାଏ, ଏବଂ tert-butaclofen କୁ QB ଇନହିବିଟର ଭାବରେ ବ୍ୟବହାର କରାଯାଏ। ଲେଜର ପଥ ମଧ୍ୟରେ ନମୁନାରେ ଉତ୍ତେଜନା ପଲ୍ସ ମଧ୍ୟରେ ଅନ୍ଧକାର ଅନୁକୂଳନ ପାଇଁ ଯଥେଷ୍ଟ ସମୟ ଅଛି କି ନାହିଁ ତାହା ନିଶ୍ଚିତ କରିବା ପାଇଁ 2 mm ଅପ୍ଟିକାଲ୍ ପଥ ଲମ୍ବ ସହିତ ଏକ କଷ୍ଟମ୍ ଘୂର୍ଣ୍ଣନ କୋଷ (ପ୍ରାୟ 0.1 ମିଟର ବ୍ୟାସ, 350 RPM) ରେ ପ୍ରାୟ 3 ମିଲି ନମୁନା ଯୋଡାଯାଏ। 1 kHz (NIR ପାଇଁ 20 nJ କିମ୍ବା Vis ପାଇଁ 100 nJ) ର ପୁନରାବୃତ୍ତି ହାରରେ 880 nm ରେ ନମୁନାକୁ ଉତ୍ତେଜିତ କରିବା ପାଇଁ Ti: ନୀଳମଣି ଲେଜର ସିଷ୍ଟମ (ସ୍ପେକ୍ଟ୍ରା ଫିଜିକ୍ସ, USA) କୁ ବୃଦ୍ଧି କରିବା ପାଇଁ ~100-fs ଲେଜର ପଲ୍ସ ବ୍ୟବହାର କରନ୍ତୁ। ତଥ୍ୟ ସଂଗ୍ରହ କରିବା ପୂର୍ବରୁ, ନମୁନାକୁ ପ୍ରାୟ 30 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ ଉତ୍ତେଜନା ଆଲୋକରେ ରଖନ୍ତୁ। ଏକ୍ସପୋଜର QA ନିଷ୍କ୍ରିୟତା ଆଣିବ (ସମ୍ଭବତଃ ଥରେ କିମ୍ବା ଦୁଇଥର QA ହ୍ରାସ କରିବ)। କିନ୍ତୁ ଦୟାକରି ଧ୍ୟାନ ଦିଅନ୍ତୁ ଯେ ଏହି ପ୍ରକ୍ରିୟାଟି ପରିବର୍ତ୍ତନୀୟ କାରଣ ଅନ୍ଧକାର ଅନୁକୂଳନର ଦୀର୍ଘ ସମୟ ପରେ, RC ଧୀରେ ଧୀରେ QA କାର୍ଯ୍ୟକଳାପକୁ ଫେରି ଆସିବ। -10 ରୁ 7000 ps ର ବିଳମ୍ବ ସମୟ ସହିତ କ୍ଷଣସ୍ଥାୟୀ ସ୍ପେକ୍ଟ୍ରା ମାପ କରିବା ପାଇଁ ଏକ Helios ସ୍ପେକ୍ଟ୍ରୋମିଟର (Ultrafast Systems, USA) ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇଥିଲା। ଡାଟା ସେଟଗୁଡ଼ିକୁ ଅଣଗୋଷ୍ଠୀବଦ୍ଧ କରିବା ପାଇଁ Surface Xplorer ସଫ୍ଟୱେର୍ (Ultrafast Systems, USA) ବ୍ୟବହାର କରନ୍ତୁ, ତାପରେ ମିଶ୍ରଣ କରନ୍ତୁ ଏବଂ ମାନକୀକରଣ କରନ୍ତୁ। କ୍ଷୟ ସହିତ ଜଡିତ ଡିଫରେନ୍ସିଆଲ୍ ସ୍ପେକ୍ଟ୍ରା ପାଇବା ପାଇଁ ମିଳିତ ଡାଟା ସେଟ୍ ବ୍ୟବହାର କରିବାକୁ CarpetView ସଫ୍ଟୱେର୍ ପ୍ୟାକେଜ୍ (Light Conversion Ltd., Lithuania) ବ୍ୟବହାର କରନ୍ତୁ, କିମ୍ବା ଏକ ଫଙ୍କସନ୍ ବ୍ୟବହାର କରନ୍ତୁ ଯାହା ମୂଳ (OriginLab, USA) ରେ ଏକକ-ତରଙ୍ଗଦୈର୍ଘ୍ୟ ସ୍ପେକ୍ଟ୍ରାଲ୍ ବିବର୍ତ୍ତନକୁ ଫିଟ୍ କରିବା ପାଇଁ ଉପକରଣ ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ସହିତ ଏକାଧିକ ଘାତକଙ୍କୁ ଘେରିଥାଏ।
ଉପରେ ଉଲ୍ଲେଖ କରାଯାଇଥିବା ପରି (53), RC ଏବଂ ପରିଧି LH2 ଆଣ୍ଟେନା ନଥିବା LH1 କମ୍ପ୍ଲେକ୍ସ ଧାରଣ କରିଥିବା ଏକ ଆଲୋକସଂଶ୍ଳେଷଣ ଫିଲ୍ମ ପ୍ରସ୍ତୁତ କରାଯାଇଥିଲା। ଝିଲ୍ଲୀକୁ 20 mM ଟ୍ରିସ୍ (pH 8.0) ରେ ପତଳା କରାଯାଇଥିଲା ଏବଂ ତାପରେ 2 mm ଅପ୍ଟିକାଲ୍ ପାଥ୍ ସହିତ ଏକ କ୍ୱାର୍ଟଜ୍ କ୍ୟୁଭେଟରେ ଲୋଡ୍ କରାଯାଇଥିଲା। -10 ରୁ 7000 ps ବିଳମ୍ବ ସମୟ ସହିତ 540 nm ରେ ନମୁନାକୁ ଉତ୍ତେଜିତ କରିବା ପାଇଁ ଏକ 30nJ ଲେଜର ପଲ୍ସ ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇଥିଲା। Rps. pal ନମୁନା ପାଇଁ ବର୍ଣ୍ଣିତ ତଥ୍ୟ ସେଟ୍ ପ୍ରକ୍ରିୟାକରଣ କରନ୍ତୁ।
4°C ତାପମାତ୍ରାରେ 2 ଘଣ୍ଟା ପାଇଁ 150,000 RCF ରେ ସେଣ୍ଟ୍ରିଫ୍ୟୁଗେସନ୍ ଦ୍ୱାରା ପରଦାକୁ ପେଲେଟ୍ କରାଯାଇଥିଲା, ଏବଂ ତା’ପରେ 880 nm ରେ ଏହାର ଅବଶୋଷଣ 20 mM tris-HCl (pH 8.0) ଏବଂ 200 mM NaCl ରେ ପୁନଃସ୍ଥାପିତ ହୋଇଥିଲା। ଅନ୍ଧାରରେ 4°C ତାପମାତ୍ରାରେ 1 ଘଣ୍ଟା ପାଇଁ 2% (w/v) β-DDM ରେ ଧୀରେ ଧୀରେ ଘୁଞ୍ଚାଇ ପରଦାକୁ ଦ୍ରବୀଭୂତ କରନ୍ତୁ। ନମୁନାକୁ 100 mM ଟ୍ରାଇଥାଇଲାମୋନିୟମ୍ କାର୍ବୋନେଟ୍ (pH 8.0) (TEAB; ମର୍କ, UK) ରେ 2.5 mg ml-1 (ବାୟୋ-ରାଡ୍ ବିଶ୍ଳେଷଣ) ପ୍ରୋଟିନ୍ ସାନ୍ଦ୍ରତାରେ ପତଳା କରାଯାଇଥିଲା। ପୂର୍ବ ପ୍ରକାଶିତ ପଦ୍ଧତି (54) ରୁ ଅଧିକ ପ୍ରକ୍ରିୟାକରଣ କରାଯାଇଥିଲା, 50 μg ପ୍ରୋଟିନ୍ କୁ 1% (w/v) ସୋଡିୟମ୍ ଲୌରେଟ୍ (ମର୍କ, UK) ଧାରଣ କରି ମୋଟ 50 μl TEAB ରେ ପତଳା କରିବା ସହିତ ଆରମ୍ଭ କରାଯାଇଥିଲା। 60 ସେକେଣ୍ଡ ପାଇଁ ସୋନିକେଶନ ପରେ, ଏହାକୁ 37°C ରେ 5 mM tris(2-carboxyethyl)phosphine (Merck, UK) ସହିତ 30 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ ହ୍ରାସ କରାଯାଇଥିଲା। S-alkylation ପାଇଁ, 10 mM ମିଥାଇଲ୍ S-ମିଥାଇଥିଓମେଥାନେସଲଫୋନେଟ୍ (Merck, UK) ସହିତ ନମୁନାକୁ ଇନ୍କ୍ୟୁବେଟ୍ କରନ୍ତୁ ଏବଂ ଏହାକୁ 200 mM ଆଇସୋପ୍ରୋପାନୋଲ୍ ଷ୍ଟକ୍ ଦ୍ରବଣରୁ କୋଠରୀ ତାପମାତ୍ରାରେ 10 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ ଯୋଡନ୍ତୁ। 2 μg ଟ୍ରିପ୍ସିନ୍/ଏଣ୍ଡୋପ୍ରୋଟିନେଜ୍ ଲାଇସ୍-C ମିଶ୍ରଣ (ପ୍ରୋମେଗା ୟୁକେ) ଯୋଡି ପ୍ରୋଟିଓଲାଇଟିକ୍ ପାଚନ କରାଯାଇଥିଲା ଏବଂ 37°C ରେ 3 ​​ଘଣ୍ଟା ପାଇଁ ଇନ୍କ୍ୟୁବେଟ୍ କରାଯାଇଥିଲା। 50 μl ଇଥାଇଲ୍ ଆସେଟେଟ୍ ଏବଂ 10 μl 10% (v/v) LC ଗ୍ରେଡ୍ ଟ୍ରାଇଫ୍ଲୁରୋଆସେଟିକ୍ ଏସିଡ୍ (TFA; ଥର୍ମୋ ଫିସର ସାଇଣ୍ଟିଫିକ୍, ୟୁକେ) ଯୋଡି ଏବଂ 60 ସେକେଣ୍ଡ ପାଇଁ ଭୋର୍ଟେକ୍ସିଂ କରି ଲୌରେଟ୍ ସଫାକ୍ଟଣ୍ଟ ବାହାର କରାଯାଇଥିଲା। 5 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ 15,700 RCF ରେ ସେଣ୍ଟ୍ରିଫ୍ୟୁଗେସନ୍ ଦ୍ୱାରା ପର୍ଯ୍ୟାୟ ପୃଥକୀକରଣକୁ ପ୍ରୋତ୍ସାହିତ କରାଯାଇଥିଲା। ନିର୍ମାତାଙ୍କ ପ୍ରୋଟୋକଲ ଅନୁଯାୟୀ, ପେପ୍ଟାଇଡ୍ ଥିବା ନିମ୍ନ ପର୍ଯ୍ୟାୟକୁ ସାବଧାନତାର ସହିତ ଆସ୍ପିରେଟ୍ ଏବଂ ଡିସଲ୍ଟ କରିବା ପାଇଁ ଏକ C18 ସ୍ପିନ୍ ସ୍ତମ୍ଭ (ଥର୍ମୋ ଫିସର ସାଇଣ୍ଟିଫିକ୍, ୟୁକେ) ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇଥିଲା। ଭାକ୍ୟୁମ୍ ସେଣ୍ଟ୍ରିଫ୍ୟୁଗେସନ୍ ଦ୍ୱାରା ଶୁଖିବା ପରେ, ନମୁନାକୁ 0.5% TFA ଏବଂ 3% ଆସେଟୋନିଟ୍ରାଇଲରେ ଦ୍ରବୀଭୂତ କରାଯାଇଥିଲା, ଏବଂ ପୂର୍ବରୁ ବିସ୍ତାରିତ ସିଷ୍ଟମ୍ ପାରାମିଟର ବ୍ୟବହାର କରି ନାନୋଫ୍ଲୋ RP କ୍ରୋମାଟୋଗ୍ରାଫି ସହିତ ମାସ ସ୍ପେକ୍ଟ୍ରୋମେଟ୍ରି ଦ୍ୱାରା 500 ng ବିଶ୍ଳେଷଣ କରାଯାଇଥିଲା।
Rps. palustris proteome ଡାଟାବେସ୍ (www.uniprot.org/proteomes/UP000001426) ଖୋଜିବା ପାଇଁ ପ୍ରୋଟିନ୍ ଚିହ୍ନଟ ଏବଂ ପରିମାଣୀକରଣ ପାଇଁ MaxQuant v.1.5.3.30 (56) ବ୍ୟବହାର କରନ୍ତୁ। ଡାଟାସେଟ୍ ଚିହ୍ନଟକାରୀ PXD020402 ଅଧୀନରେ PRIDE ପାର୍ଟନର ରିପୋଜିଟୋରୀ (http://proteomecentral.proteomexchange.org) ମାଧ୍ୟମରେ ମାସ ସ୍ପେକ୍ଟ୍ରୋମେଟ୍ରି ପ୍ରୋଟିଓମିକ୍ସ ଡାଟା ପ୍ରୋଟିଓମଏକ୍ସଚେଞ୍ଜ ଆଲାଏନ୍ସରେ ଜମା କରାଯାଇଛି।
RPLC ଦ୍ୱାରା ଇଲେକ୍ଟ୍ରୋସ୍ପ୍ରେ ଆୟନାଇଜେସନ ମାସ୍ ସ୍ପେକ୍ଟ୍ରୋମେଟ୍ରି ସହିତ ବିଶ୍ଳେଷଣ ପାଇଁ, RC-LH1 କମ୍ପ୍ଲେକ୍ସକୁ ବନ୍ୟ-ପ୍ରକାର Rps ରୁ ପ୍ରସ୍ତୁତ କରାଯାଇଥିଲା। ପୂର୍ବରୁ ପ୍ରକାଶିତ ପଦ୍ଧତି (16) ବ୍ୟବହାର କରି, ପାଲୁଷ୍ଟ୍ରିସ୍ କୋଷରେ ଉତ୍ପାଦିତ ପ୍ରୋଟିନ୍ ସାନ୍ଦ୍ରତା 20 mM Hepes (pH 7.8), 100 mM NaCl ଏବଂ 0.03% (w/v) β- (ବାୟୋ-ରାଡ୍ ବିଶ୍ଳେଷଣ) ) DDM ରେ 2 mg ml-1 ଥିଲା। ନିର୍ମାତାଙ୍କ ପ୍ରୋଟୋକଲ ଅନୁସାରେ, ଅବପାତ ପଦ୍ଧତି ଦ୍ୱାରା 10 μg ପ୍ରୋଟିନ୍ ବାହାର କରିବା ପାଇଁ 2D ପ୍ୟୁରିଫିକେସନ୍ କିଟ୍ (GE Healthcare, USA) ବ୍ୟବହାର କରନ୍ତୁ, ଏବଂ ଅବକ୍ଷେପଣକୁ 20 μl 60% (v / v) ଫର୍ମିକ ଏସିଡ୍ (FA), 20% (v / v) ଆସେଟୋନିଟ୍ରାଇଲ୍ ଏବଂ 20% (v/v) ପାଣିରେ ଦ୍ରବୀଭୂତ କରନ୍ତୁ। RPLC (Dionex RSLC) ଦ୍ୱାରା ମାସ ସ୍ପେକ୍ଟ୍ରୋମେଟ୍ରି (Maxis UHR-TOF, Bruker) ସହିତ ପାଞ୍ଚଟି ମାଇକ୍ରୋଲିଟର ବିଶ୍ଳେଷଣ କରାଯାଇଥିଲା। 90%(v/v) ଆସେଟୋନିଟ୍ରାଇଲ TFA ରେ 85%(v/v) ଦ୍ରାବକ A [0.1%(v/v) FA ଏବଂ 0.02%(V/v) TFA ଜଳୀୟ ଦ୍ରବଣ] ରୁ 85%(v/v) ଦ୍ରାବକ B [0.1%(v/v) FA ଏବଂ 0.02%(v/v) ର ଗ୍ରାଡିଏଣ୍ଟ ସହିତ 60 ମିନିଟରୁ ଅଧିକ ସମୟ ପାଇଁ ମାନକ ଇଲେକ୍ଟ୍ରୋସ୍ପ୍ରେ ଆୟନାଇଜେସନ ଉତ୍ସ ଏବଂ ଡିଫଲ୍ଟ ପାରାମିଟର ବ୍ୟବହାର କରି, ମାସ୍ ସ୍ପେକ୍ଟ୍ରୋମିଟର 100 ରୁ 2750 m/z (ମାସ୍-ଟୁ-ଚାର୍ଜ ଅନୁପାତ) ପ୍ରାପ୍ତ କରେ। ExPASy ବାୟୋଇନଫର୍ମେଟିକ୍ସ ରିସୋର୍ସ ପୋର୍ଟାଲ FindPept ଟୁଲ୍ (https://web.expasy.org/findpept/) ସାହାଯ୍ୟରେ, ମାସ୍ ସ୍ପେକ୍ଟ୍ରାମକୁ କମ୍ପ୍ଲେକ୍ସର ସବୟୁନିଟ୍ ସହିତ ମ୍ୟାପ୍ କରନ୍ତୁ।
କୋଷଗୁଡ଼ିକୁ 100 ମିଲି NF-ନିମ୍ନ (10μMm-2 s-1), ମଧ୍ୟମ (30μMm-2 s-1) କିମ୍ବା ଉଚ୍ଚ (300μMm-2 s-1) ଆଲୋକରେ 72 ଘଣ୍ଟା ପାଇଁ ବଢାଯାଇଥିଲା। 100 ମିଲି ସ୍କ୍ରୁ-ଟପ୍ ବୋତଲରେ M22 ମଧ୍ୟମ (M22 ମାଧ୍ୟମ ଯେଉଁଥିରେ ଆମୋନିୟମ୍ ସଲଫେଟ୍ ବାଦ ଦିଆଯାଏ ଏବଂ ସୋଡିୟମ୍ ସସିନେଟ୍ ସୋଡିୟମ୍ ଆସେଟେଟ୍ ଦ୍ୱାରା ବଦଳାଯାଏ) (23)। ପାଞ୍ଚଟି 30-ସେକେଣ୍ଡ ଚକ୍ରରେ, କୋଷଗୁଡ଼ିକୁ ଲାଇଜ୍ କରିବା ପାଇଁ 1:1 ପରିମାଣର ପରିମାଣରେ 0.1 ମାଇକ୍ରୋନ୍ ଗ୍ଲାସ୍ ମଣିଗୁଡ଼ିକୁ 1:1 ରେ ବିଡ୍ କରାଯାଇଥିଲା ଏବଂ 5 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ ବରଫ ଉପରେ ଥଣ୍ଡା କରାଯାଇଥିଲା। ଅଦ୍ରବଣୀୟ ପଦାର୍ଥ, ଅଖଣ୍ଡ କୋଷ ଏବଂ ଗ୍ଲାସ୍ ମଣିଗୁଡ଼ିକୁ ଏକ ବେଞ୍ଚଟପ୍ ମାଇକ୍ରୋସେଣ୍ଟ୍ରିଫ୍ୟୁଜ୍‌ରେ 16,000 RCF ରେ ସେଣ୍ଟ୍ରିଫ୍ୟୁଗେସନ୍ ଦ୍ୱାରା ଅପସାରିତ କରାଯାଇଥିଲା। 20 mM tris-HCl (pH 8.0) ରେ 40/15% (w/w) ସୁକ୍ରୋଜ୍ ଗ୍ରେଡିଏଣ୍ଟ ସହିତ 100,000 RCF ସହିତ Ti 70.1 ରୋଟରରେ 10 ଘଣ୍ଟା ପାଇଁ ମେମ୍ବ୍ରାନକୁ ପୃଥକ କରାଯାଇଥିଲା।
ଆମର ପୂର୍ବ କାର୍ଯ୍ୟରେ ବର୍ଣ୍ଣିତ ହୋଇଛି ଯେ, PufW (16) ରେ ହିସ୍ ଟ୍ୟାଗ୍‌ର ଇମ୍ୟୁନୋଡିଟେକ୍ସନ୍। ସଂକ୍ଷେପରେ, 2x SDS ଲୋଡିଂ ବଫର (Merck, UK) ରେ Purified Core Complex (11.8 nM) କିମ୍ବା RC ର ସମାନ ସାନ୍ଦ୍ରତା ଧାରଣ କରିଥିବା ଝିଲ୍ଲୀ (ଅକ୍ସିଡେସନ୍ ଦ୍ୱାରା ହ୍ରାସିତ ପାର୍ଥକ୍ୟ ସ୍ପେକ୍ଟ୍ରମ୍ ବିଯୋଗ କରି ଏବଂ ଷ୍ଟେନ୍ ଜେଲ୍ ଉପରେ ଲୋଡ୍ ମେଳ କରି ନିର୍ଣ୍ଣୟ କରାଯାଏ) ଦୁଇଥର ତରଳାଇ ଦିଆଯାଇଥିଲା। ପ୍ରୋଟିନ୍‌ଗୁଡ଼ିକୁ ଏକ ପ୍ରତିକୃତି 12% ବିସ୍-ଟ୍ରିସ୍ ନୁପେଜ୍ ଜେଲ୍ (ଥର୍ମୋ ଫିସର ସାଇଣ୍ଟିଫିକ୍, UK) ରେ ପୃଥକ କରାଯାଇଥିଲା। RC-L ସବୟୁନିଟ୍ ଲୋଡ୍ ଏବଂ ଭିଜୁଆଲାଇଜ୍ କରିବା ପାଇଁ ଏକ ଜେଲ୍‌କୁ Coomassie Bruilliant Blue (Bio-Rad, UK) ସହିତ ରଙ୍ଗ କରାଯାଇଥିଲା। ଦ୍ୱିତୀୟ ଜେଲ୍‌ରେ ଥିବା ପ୍ରୋଟିନ୍‌କୁ ଇମ୍ୟୁନୋଏସେ ପାଇଁ ମିଥାନଲ୍-ସକ୍ରିୟ ପଲିଭିନାଇଲିଡିନ୍ ଫ୍ଲୋରାଇଡ୍ (PVDF) ଝିଲ୍ଲୀ (ଥର୍ମୋ ଫିସର ସାଇଣ୍ଟିଫିକ୍, UK) କୁ ସ୍ଥାନାନ୍ତରିତ କରାଯାଇଥିଲା। PVDF ମେମ୍ବ୍ରାନକୁ 50 mM tris-HCl (pH 7.6), 150 mM NaCl, 0.2% (v / v) Tween-20 ଏବଂ 5% (w / v) ସ୍କିମ୍ଡ କ୍ଷୀର ପାଉଡରରେ ଅବରୋଧ କରାଯାଇଥିଲା, ଏବଂ ତା’ପରେ ଆଣ୍ଟି-ହିସ୍ ପ୍ରାଥମିକ ଆଣ୍ଟିବଡି (ଆଣ୍ଟିବଡି ବଫରକୁ ଡାଇଲ୍ୟୁଟ୍ କରନ୍ତୁ [50 mM tris-HCl (pH 7.6), 150 mM NaCl ଏବଂ 0.05% (v / v) Tween-20] ସହିତ 1:1000 A190-114A, ବେଥାଇଲ୍ ଲାବୋରେଟୋରୀ, USA) ସହିତ 4 ଘଣ୍ଟା ପାଇଁ ଇନକ୍ୟୁବେଟେଡ୍ କରାଯାଇଥିଲା। ଆଣ୍ଟିବଡି ବଫରରେ 5 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ 3 ଥର ଧୋଇବା ପରେ, ମେମ୍ବ୍ରେନକୁ ହର୍ସରାଡିସ୍ ପେରୋକ୍ସିଡେଜ୍ (ସିଗ୍ମା-ଆଲଡ୍ରିଚ୍, ୟୁକେ) ଆଣ୍ଟି-ମାଉସ୍ ସେକେଣ୍ଡାରୀ ଆଣ୍ଟିବଡି (ଆଣ୍ଟିବଡି ବଫରରେ 1:10,000 ମିଲ୍ୟୁଇଡ୍) ସହିତ ମିଶ୍ରିତ କରାଯାଇଥିଲା। WESTAR ETA C 2.0 କେମିଲୁମିନେସେନ୍ସ ସବଷ୍ଟ୍ରେଟ୍ (ସାଇନାଜେନ୍, ଇଟାଲୀ) ଏବଂ ଆମର୍ଶାମ୍ ଇମେଜର 600 (GE ହେଲ୍ଥକେୟାର୍, ୟୁକେ) ବ୍ୟବହାର କରି ଚିହ୍ନଟ (ଆଣ୍ଟିବଡି ବଫରରେ 3 ଧୋଇବା ପରେ 5 ମିନିଟ୍) ଅନୁମତି ଦେବା ପାଇଁ ଇନକ୍ୟୁବେଟ୍ କରାଯାଇଥିଲା।
ImageJ (57) ରେ ପ୍ରତ୍ୟେକ ଷ୍ଟେଣ୍ଡ ଜେଲ୍ କିମ୍ବା ଇମ୍ୟୁନୋଏସେ ଲେନ୍‌ର ତୀବ୍ରତା ବଣ୍ଟନ ଆଙ୍କି, ଶିଖର ତଳେ ଥିବା କ୍ଷେତ୍ରକୁ ଏକୀକୃତ କରି ଏବଂ RC-L (ଷ୍ଟେଣ୍ଡ ଜେଲ୍) ଏବଂ ପ୍ରୋଟିନ୍-W (ଇମ୍ୟୁନୋଏସେ) ର ତୀବ୍ରତା ଅନୁପାତ ଗଣନା କରି। ଏହି ଅନୁପାତଗୁଡ଼ିକୁ ବିଶୁଦ୍ଧ RC-LH114-W ନମୁନାରେ ପ୍ରୋଟିନ୍-W ରୁ RC-L ର ଅନୁପାତ 1:1 ବୋଲି ଧରି ଏବଂ ସେହି ଅନୁସାରେ ସମଗ୍ର ତଥ୍ୟ ସେଟ୍‌କୁ ସାଧାରଣ କରି ମୋଲାର ଅନୁପାତରେ ରୂପାନ୍ତରିତ କରାଯାଇଥିଲା।
ଏହି ଆର୍ଟିକିଲର ପରିପୂରକ ସାମଗ୍ରୀ ପାଇଁ, ଦୟାକରି http://advances.sciencemag.org/cgi/content/full/7/3/eabe2631/DC1 ଦେଖନ୍ତୁ।
ଏହା ଏକ ଖୋଲା ପ୍ରବେଶ ପ୍ରବନ୍ଧ ଯାହା କ୍ରିଏଟିଭ୍ କମନ୍ସ ଆଟ୍ରିବ୍ୟୁସନ୍ ଲାଇସେନ୍ସର ନିୟମ ଅନୁଯାୟୀ ବଣ୍ଟନ କରାଯାଇଛି। ଏହି ପ୍ରବନ୍ଧଟି ଯେକୌଣସି ମାଧ୍ୟମରେ ଅପ୍ରତିବନ୍ଧିତ ବ୍ୟବହାର, ବଣ୍ଟନ ଏବଂ ପୁନରୁତ୍ପାଦନକୁ ଅନୁମତି ଦିଏ ଯଦି ମୂଳ କାର୍ଯ୍ୟଟି ସଠିକ୍ ଭାବରେ ଉଦ୍ଧୃତ ହୋଇଥାଏ।
ଟିପ୍ପଣୀ: ଆମେ କେବଳ ଆପଣଙ୍କୁ ଆପଣଙ୍କର ଇମେଲ୍ ଠିକଣା ପ୍ରଦାନ କରିବାକୁ କହୁଛୁ ଯାହା ଦ୍ଵାରା ଆପଣ ପୃଷ୍ଠାକୁ ସୁପାରିଶ କରୁଥିବା ବ୍ୟକ୍ତି ଜାଣିପାରିବେ ଯେ ଆପଣ ତାଙ୍କୁ ଇମେଲ୍ ଦେଖିବାକୁ ଚାହୁଁଛନ୍ତି ଏବଂ ଏହା ସ୍ପାମ୍ ନୁହେଁ। ଆମେ କୌଣସି ଇମେଲ୍ ଠିକଣା କ୍ୟାପଚର କରିବୁ ନାହିଁ।
ଏହି ପ୍ରଶ୍ନଟି ଆପଣ ଜଣେ ପରିଦର୍ଶକ କି ନାହିଁ ତାହା ପରୀକ୍ଷା କରିବା ଏବଂ ସ୍ୱୟଂଚାଳିତ ସ୍ପାମ୍ ଦାଖଲକୁ ରୋକିବା ପାଇଁ ବ୍ୟବହୃତ ହୁଏ।
ଡେଭିଡ୍ ଜେକେ ସ୍ୱାଇନ୍ସବରୀ, ପାର୍କ କ୍ୱିଆନ୍, ଫିଲିପ୍ ଜେ. ଜ୍ୟାକସନ୍, କୈଟଲିନ୍ ଏମ୍. ଫାରିସ୍, ଡାରିୟୁସ୍ ଏମ୍. ନିଡଜ୍ୱିଡ୍ଜକି, ଏଲିଜାବେଥ୍ ସି. ମାର୍ଟିନ୍, ଡେଭିଡ୍ ଏ. ଫାର୍ମର୍, ଲୋର୍ନା ଏ. ମାଲୋନ୍, ରେବେକା ଏଫ୍. ଥମ୍ପସନ୍, ନୀଲ୍ ଏ. ରାନସନ୍, ଡାନିଏଲ୍ ପି କାନିଫ୍, ମାର୍କ ଜେ. ଡିକମ୍ୟାନ୍, ଡେୱି ହୋଲ୍ଟେନ୍, କ୍ରିଷ୍ଟିନ୍ କିର୍ମାୟାର, ଆଣ୍ଡ୍ରୁ ହିଚକକ୍, ସି. ନୀଲ୍ ହଣ୍ଟର୍
ପ୍ରତିକ୍ରିୟା କେନ୍ଦ୍ରରେ ଥିବା ଆଲୋକ ଯନ୍ତା 1 କମ୍ପ୍ଲେକ୍ସର ଉଚ୍ଚ-ରିଜୋଲ୍ୟୁସନ୍ ଗଠନ କ୍ୱିନୋନ୍ ଗତିବିଧି ବିଷୟରେ ନୂତନ ଅନ୍ତର୍ଦୃଷ୍ଟି ପ୍ରଦାନ କରେ।
ଡେଭିଡ୍ ଜେକେ ସ୍ୱାଇନ୍ସବରୀ, ପାର୍କ କ୍ୱିଆନ୍, ଫିଲିପ୍ ଜେ. ଜ୍ୟାକସନ୍, କୈଟଲିନ୍ ଏମ୍. ଫାରିସ୍, ଡାରିୟୁସ୍ ଏମ୍. ନିଡଜ୍ୱିଡ୍ଜକି, ଏଲିଜାବେଥ୍ ସି. ମାର୍ଟିନ୍, ଡେଭିଡ୍ ଏ. ଫାର୍ମର୍, ଲୋର୍ନା ଏ. ମାଲୋନ୍, ରେବେକା ଏଫ୍. ଥମ୍ପସନ୍, ନୀଲ୍ ଏ. ରାନସନ୍, ଡାନିଏଲ୍ ପି କାନିଫ୍, ମାର୍କ ଜେ. ଡିକମ୍ୟାନ୍, ଡେୱି ହୋଲ୍ଟେନ୍, କ୍ରିଷ୍ଟିନ୍ କିର୍ମାୟାର, ଆଣ୍ଡ୍ରୁ ହିଚକକ୍, ସି. ନୀଲ୍ ହଣ୍ଟର୍
ପ୍ରତିକ୍ରିୟା କେନ୍ଦ୍ରରେ ଥିବା ଆଲୋକ ଯନ୍ତା 1 କମ୍ପ୍ଲେକ୍ସର ଉଚ୍ଚ-ରିଜୋଲ୍ୟୁସନ୍ ଗଠନ କ୍ୱିନୋନ୍ ଗତିବିଧି ବିଷୟରେ ନୂତନ ଅନ୍ତର୍ଦୃଷ୍ଟି ପ୍ରଦାନ କରେ।
© 2021 ଆମେରିକୀୟ ଆସୋସିଏସନ ପାଇଁ ବିଜ୍ଞାନର ଉନ୍ନତି ପାଇଁ | ସମସ୍ତ ଅଧିକାର ସଂରକ୍ଷିତ | AAAS ହେଉଛି HINARI, AGORA, OARE, CHORUS, CLOCKSS, CrossRef ଏବଂ COUNTER ର ଅଂଶୀଦାର | ସାଇନ୍ସ ଆଡଭାନ୍ସ ISSN 2375-2548 |