Nature.com ପରିଦର୍ଶନ କରିବା ପାଇଁ ଆପଣଙ୍କୁ ଧନ୍ୟବାଦ। ଆପଣ ବ୍ୟବହାର କରୁଥିବା ବ୍ରାଉଜର ସଂସ୍କରଣରେ CSS ପାଇଁ ସୀମିତ ସମର୍ଥନ ଅଛି। ସର୍ବୋତ୍ତମ ଅଭିଜ୍ଞତା ପାଇଁ, ଆମେ ଆପଣଙ୍କୁ ଏକ ଅପଡେଟ୍ ବ୍ରାଉଜର୍ ବ୍ୟବହାର କରିବାକୁ ସୁପାରିଶ କରୁଛୁ (କିମ୍ବା ଇଣ୍ଟରନେଟ୍ ଏକ୍ସପ୍ଲୋରରରେ ସୁସଙ୍ଗତତା ମୋଡ୍ ବନ୍ଦ କରନ୍ତୁ)। ଏହି ସମୟ ମଧ୍ୟରେ, ନିରନ୍ତର ସମର୍ଥନ ସୁନିଶ୍ଚିତ କରିବା ପାଇଁ, ଆମେ ସାଇଟ୍‌କୁ ଷ୍ଟାଇଲ୍ ଏବଂ JavaScript ବିନା ପ୍ରଦର୍ଶନ କରିବୁ।
ଉଚ୍ଚ ଲୋଡିଂ କଣ୍ଟେଣ୍ଟ ସହିତ ଇନସୁଲିନ୍ ନାନୋପାର୍ଟିକଲ୍ସ (NPs) ବିଭିନ୍ନ ଡୋଜ୍ ଫର୍ମରେ ବିଭିନ୍ନ ପ୍ରୟୋଗ ପାଇଛି। ଏହି କାର୍ଯ୍ୟର ଲକ୍ଷ୍ୟ ହେଉଛି ଇନସୁଲିନ୍-ଲୋଡେଡ୍ ଚିଟୋସାନ୍ ନାନୋପାର୍ଟିକଲ୍ସର ଗଠନ ଉପରେ ଫ୍ରିଜ୍-ଡ୍ରାଇଂ ଏବଂ ସ୍ପ୍ରେ-ଡ୍ରାଇଂ ପ୍ରକ୍ରିୟାର ପ୍ରଭାବ ମୂଲ୍ୟାଙ୍କନ କରିବା, ଏକ କ୍ରାଇଓପ୍ରୋଟେକ୍ଟଣ୍ଟ ଭାବରେ ମାନିଟୋଲ୍ ସହିତ କିମ୍ବା ବିନା। ଆମେ ଏହି ନାନୋପାର୍ଟିକଲ୍ସଗୁଡ଼ିକୁ ପୁନଃ ଦ୍ରବୀଭୂତ କରି ସେମାନଙ୍କର ଗୁଣବତ୍ତା ମଧ୍ୟ ମୂଲ୍ୟାଙ୍କନ କରିଥିଲୁ। ଡିହାଇଡ୍ରେସନ୍ ପୂର୍ବରୁ, ଚିଟୋସାନ୍/ସୋଡିୟମ୍ ଟ୍ରାଇପଲିଫସଫେଟ୍/ଇନସୁଲିନ୍ କ୍ରସ୍-ଲିଙ୍କ୍ଡ୍ ନାନୋପାର୍ଟିକଲ୍ସର କଣିକା ଆକାର 318 nm, PDI 0.18, ଏନକ୍ୟାପସୁଲେସନ୍ ଦକ୍ଷତା 99.4% ଏବଂ ଲୋଡିଂ 25.01% ଥିଲା। ପୁନଃଗଠନ ପରେ, ସମସ୍ତ ନାନୋପାର୍ଟିକଲ୍ସ, ମାନିଟୋଲ୍ ବ୍ୟବହାର ବିନା ଫ୍ରିଜ୍-ଡ୍ରାଇଂ ପଦ୍ଧତି ଦ୍ୱାରା ଉତ୍ପାଦିତ ନାନୋପାର୍ଟିକଲ୍ସ ବ୍ୟତୀତ, ସେମାନଙ୍କର ଗୋଲାକାର କଣିକା ଗଠନ ବଜାୟ ରଖିଥିଲେ। ସ୍ପ୍ରେ ଦ୍ୱାରା ଡିହାଇଡ୍ରେଟେଡ୍ ମାନିଟୋଲ୍-ଧାରଣ ନାନୋପାର୍ଟିକଲ୍ସ ତୁଳନାରେ, ମାନିଟୋଲ୍-ମୁକ୍ତ ସ୍ପ୍ରେ-ଡ୍ରାଇଂ ନାନୋପାର୍ଟିକଲ୍ସ ମଧ୍ୟ ସମାନ ଏନକ୍ୟାପସୁଲେସନ୍ ହାର ସହିତ ସର୍ବନିମ୍ନ ହାରାହାରି କଣିକା ଆକାର (376 nm) ଏବଂ ସର୍ବାଧିକ ଲୋଡିଂ କଣ୍ଟେଣ୍ଟ (25.02%) ଦେଖାଇଥିଲେ। (98.7%) ଏବଂ ଶୁଖାଇବା କିମ୍ବା ଫ୍ରିଜ୍-ଶୁଖାଇବା କୌଶଳ ଦ୍ୱାରା PDI (0.20)। ମାନିଟଲ୍ ବିନା ସ୍ପ୍ରେ ଶୁଖାଇବା ଦ୍ୱାରା ଶୁଖିଲା ନାନୋପାର୍ଟିକଲ୍ ମଧ୍ୟ ଇନସୁଲିନ୍ ର ଦ୍ରୁତତମ ମୁକ୍ତି ଏବଂ କୋଷୀୟ ଗ୍ରହଣର ସର୍ବୋଚ୍ଚ ଦକ୍ଷତା ହାସଲ କରିଥିଲା। ଏହି କାର୍ଯ୍ୟ ଦର୍ଶାଏ ଯେ ସ୍ପ୍ରେ ଶୁଖାଇବା ପାରମ୍ପରିକ ଫ୍ରିଜ୍ ଶୁଖାଇବା ପଦ୍ଧତି ତୁଳନାରେ କ୍ରାଇଓପ୍ରୋଟେକ୍ଟଣ୍ଟର ଆବଶ୍ୟକତା ବିନା ଇନସୁଲିନ୍ ନାନୋପାର୍ଟିକଲ୍ସକୁ ଡିହାଇଡ୍ରେଟ୍ କରିପାରିବ, ଅଧିକ ଲୋଡିଂ କ୍ଷମତା ସୃଷ୍ଟି କରିବ, ଯୋଗକାରୀ ଆବଶ୍ୟକତା ହ୍ରାସ କରିବ ଏବଂ କାର୍ଯ୍ୟ ଖର୍ଚ୍ଚ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ଲାଭ ଦେବ।
୧୯୨୨୧,୨,୩ ରେ ଏହାର ଆବିଷ୍କାର ପରଠାରୁ, ଇନସୁଲିନ୍ ଏବଂ ଏହାର ଔଷଧ ପ୍ରସ୍ତୁତି ଟାଇପ୍ ୧ ମଧୁମେହ (T1DM) ଏବଂ ଟାଇପ୍ ୨ ମଧୁମେହ (T1DM) ରୋଗୀଙ୍କ ଜୀବନ ରକ୍ଷା କରିଛି। ତଥାପି, ଏକ ଉଚ୍ଚ ଆଣବିକ ଓଜନ ପ୍ରୋଟିନ୍ ଭାବରେ ଏହାର ଗୁଣ ଯୋଗୁଁ, ଇନସୁଲିନ୍ ସହଜରେ ଏକତ୍ରିତ ହୁଏ, ପ୍ରୋଟିଓଲାଇଟିକ୍ ଏନଜାଇମ ଦ୍ୱାରା ଭାଙ୍ଗିଯାଏ ଏବଂ ପ୍ରଥମ-ପାସ୍ ପ୍ରଭାବ ଦ୍ୱାରା ବାହାର କରିଦିଆଯାଏ। ଟାଇପ୍ ୧ ମଧୁମେହ ନିର୍ଣ୍ଣୟ ହୋଇଥିବା ଲୋକଙ୍କୁ ଜୀବନସାରା ଇନସୁଲିନ୍ ଇଞ୍ଜେକ୍ସନ ଆବଶ୍ୟକ ହୁଏ। ପ୍ରାରମ୍ଭରେ ଟାଇପ୍ ୨ ମଧୁମେହ ନିର୍ଣ୍ଣୟ ହୋଇଥିବା ଅନେକ ରୋଗୀଙ୍କୁ ଦୀର୍ଘକାଳୀନ ଇନସୁଲିନ୍ ଇଞ୍ଜେକ୍ସନ ମଧ୍ୟ ଆବଶ୍ୟକ ହୁଏ। ଦୈନିକ ଇନସୁଲିନ୍ ଇଞ୍ଜେକ୍ସନ ଏହି ବ୍ୟକ୍ତିମାନଙ୍କ ପାଇଁ ଦୈନିକ ଯନ୍ତ୍ରଣା ଏବଂ ଅସ୍ୱସ୍ତିର ଏକ ଗମ୍ଭୀର ଉତ୍ସ, ମାନସିକ ସ୍ୱାସ୍ଥ୍ୟ ଉପରେ ନକାରାତ୍ମକ ପ୍ରଭାବ ପକାଇଥାଏ। ଫଳସ୍ୱରୂପ, ଇନସୁଲିନ୍ ପ୍ରଶାସନର ଅନ୍ୟ ପ୍ରକାର ଯାହା କମ୍ ଅସ୍ୱସ୍ତି ସୃଷ୍ଟି କରେ, ଯେପରିକି ମୌଖିକ ଇନସୁଲିନ୍ ପ୍ରଶାସନ, ବ୍ୟାପକ ଭାବରେ ଅଧ୍ୟୟନ କରାଯାଉଛି5 କାରଣ ସେମାନଙ୍କର ବିଶ୍ୱବ୍ୟାପୀ ପ୍ରାୟ ୫ ବିଲିୟନ ମଧୁମେହ ରୋଗୀଙ୍କ ଜୀବନର ଗୁଣବତ୍ତା ପୁନଃସ୍ଥାପିତ କରିବାର ସମ୍ଭାବନା ଅଛି।
ନାନୋପାର୍ଟିକଲ୍ ପ୍ରଯୁକ୍ତିବିଦ୍ୟା ମୌଖିକ ଇନସୁଲିନ୍ ନେବାର ପ୍ରୟାସରେ ଏକ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ଅଗ୍ରଗତି ପ୍ରଦାନ କରିଛି 4,6,7। ଏହା ଏକ ଯାହା ଇନସୁଲିନ୍ କୁ ପ୍ରଭାବଶାଳୀ ଭାବରେ ଏନକ୍ୟାପସୁଲେଟ୍ କରେ ଏବଂ ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ଶରୀର ସ୍ଥାନଗୁଡ଼ିକୁ ଲକ୍ଷ୍ୟଭେଦ ବିତରଣ ପାଇଁ ନଷ୍ଟ ହେବାରୁ ରକ୍ଷା କରେ। ତଥାପି, ନାନୋପାର୍ଟିକଲ୍ ଫର୍ମୁଲେସନ୍ ବ୍ୟବହାରର ଅନେକ ସୀମା ଅଛି, ମୁଖ୍ୟତଃ କଣିକା ସସପେନ୍ସନର ସ୍ଥିରତା ସମସ୍ୟା ଯୋଗୁଁ। ସଂରକ୍ଷଣ ସମୟରେ କିଛି ଏକତ୍ରୀକରଣ ହୋଇପାରେ, ଯାହା ଇନସୁଲିନ୍-ଲୋଡ୍ ନାନୋପାର୍ଟିକଲ୍ସର ଜୈବ ଉପଲବ୍ଧତାକୁ ହ୍ରାସ କରେ 8। ଏହା ସହିତ, ଇନସୁଲିନ୍ ନାନୋପାର୍ଟିକଲ୍ସ (NPs) ର ସ୍ଥିରତା ସୁନିଶ୍ଚିତ କରିବା ପାଇଁ ନାନୋପାର୍ଟିକଲ୍ସ ଏବଂ ଇନସୁଲିନର ପଲିମର ମ୍ୟାଟ୍ରିକ୍ସର ରାସାୟନିକ ସ୍ଥିରତାକୁ ମଧ୍ୟ ବିଚାର କରାଯିବା ଆବଶ୍ୟକ। ବର୍ତ୍ତମାନ, ସଂରକ୍ଷଣ ସମୟରେ ଅନାବଶ୍ୟକ ପରିବର୍ତ୍ତନଗୁଡ଼ିକୁ ରୋକିବା ସହିତ ସ୍ଥିର NPs ସୃଷ୍ଟି କରିବା ପାଇଁ ଫ୍ରିଜ୍-ଡ୍ରାଇଂ ପ୍ରଯୁକ୍ତିବିଦ୍ୟା ହେଉଛି ସୁନା ମାନକ।
ତଥାପି, ଫ୍ରିଜ୍-ଡ୍ରାଇଂ ପାଇଁ କ୍ରାଇଓପ୍ରୋଟେକାଣ୍ଟ ଯୋଡାଯିବା ଆବଶ୍ୟକ ଯାହା ଦ୍ଵାରା NPs ର ଗୋଲାକାର ଗଠନ ବରଫ ସ୍ଫଟିକର ଯାନ୍ତ୍ରିକ ଚାପ ଦ୍ୱାରା ପ୍ରଭାବିତ ହୁଏ ନାହିଁ। ଏହା ଲାଇଓଫାଇଲାଇଜେସନ୍ ପରେ ଇନସୁଲିନ୍ ନାନୋପାର୍ଟିକଲ୍ସର ଲୋଡିଂକୁ ଯଥେଷ୍ଟ ହ୍ରାସ କରେ, କାରଣ କ୍ରାଇଓପ୍ରୋଟେକାଣ୍ଟ ଓଜନ ଅନୁପାତର ଅଧିକାଂଶ ଭାଗ ଦଖଲ କରେ। ତେଣୁ, ଇନସୁଲିନ୍ ର ଚିକିତ୍ସା ୱିଣ୍ଡୋ ହାସଲ କରିବା ପାଇଁ ପ୍ରଚୁର ପରିମାଣର ଶୁଷ୍କ ନାନୋପାର୍ଟିକଲ୍ସର ଆବଶ୍ୟକତା ହେତୁ ଉତ୍ପାଦିତ ଇନସୁଲିନ୍ NPs ପ୍ରାୟତଃ ମୌଖିକ ଟାବଲେଟ୍ ଏବଂ ମୌଖିକ ଫିଲ୍ମ ଭଳି ଶୁଷ୍କ ପାଉଡର ଫର୍ମୁଲେସନ୍ ପାଇଁ ଅନୁପଯୁକ୍ତ ବୋଲି ଜଣାପଡ଼ିଥାଏ।
ଔଷଧ ଶିଳ୍ପରେ ତରଳ ପର୍ଯ୍ୟାୟରୁ ଶୁଖିଲା ପାଉଡର ଉତ୍ପାଦନ ପାଇଁ ସ୍ପ୍ରେ ଶୁଖାଇବା ଏକ ସୁପରିଚିତ ଏବଂ ଶସ୍ତା ଶିଳ୍ପ-ସ୍ତରର ପ୍ରକ୍ରିୟା 10,11। କଣିକା ଗଠନ ପ୍ରକ୍ରିୟା ଉପରେ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ ଅନେକ ଜୈବିକ ସକ୍ରିୟ ଯୌଗିକ 12, 13 ର ସଠିକ୍ ଏନକ୍ୟାପସୁଲେସନ୍ ପାଇଁ ଅନୁମତି ଦିଏ। ଏହା ଅଧିକନ୍ତୁ, ଏହା ମୌଖିକ ପ୍ରଶାସନ ପାଇଁ ଏନକ୍ୟାପସୁଲେଟେଡ୍ ପ୍ରୋଟିନ୍ ପ୍ରସ୍ତୁତି ପାଇଁ ଏକ ପ୍ରଭାବଶାଳୀ କୌଶଳ ପାଲଟିଛି। ସ୍ପ୍ରେ ଶୁଖାଇବା ସମୟରେ, ପାଣି ବହୁତ ଶୀଘ୍ର ବାଷ୍ପୀଭୂତ ହୁଏ, ଯାହା କଣିକା କୋରର ତାପମାତ୍ରାକୁ କମ ରଖିବାରେ ସାହାଯ୍ୟ କରେ 11,14, ଏହାର ପ୍ରୟୋଗକୁ ତାପ-ସମ୍ବେଦନଶୀଳ ଉପାଦାନଗୁଡ଼ିକୁ ଏନକ୍ୟାପସୁଲେଟ୍ କରିବା ପାଇଁ ସକ୍ଷମ କରିଥାଏ। ସ୍ପ୍ରେ ଶୁଖାଇବା ପୂର୍ବରୁ, ଆବରଣ ସାମଗ୍ରୀକୁ ଏନକ୍ୟାପସୁଲେଟେଡ୍ ଉପାଦାନ ଧାରଣ କରିଥିବା ଦ୍ରବଣ ସହିତ ସମ୍ପୂର୍ଣ୍ଣ ଭାବରେ ଏକତ୍ରିତ କରାଯିବା ଉଚିତ 11,14। ଫ୍ରିଜ୍-ଶୁଖାଇବା ପରି ନୁହେଁ, ସ୍ପ୍ରେ-ଶୁଖାଇବାରେ ଏନକ୍ୟାପସୁଲେସନ୍ ପୂର୍ବରୁ ଏକତ୍ରିତ କରିବା ଡିହାଇଡ୍ରେସନ୍ ସମୟରେ ଏନକ୍ୟାପସୁଲେସନ୍ ଦକ୍ଷତାକୁ ଉନ୍ନତ କରେ। ଯେହେତୁ ସ୍ପ୍ରେ-ଶୁଖାଇବା ଏନକ୍ୟାପସୁଲେସନ୍ ପ୍ରକ୍ରିୟାକୁ କ୍ରାଇଓପ୍ରୋଟେକ୍ଟଣ୍ଟ ଆବଶ୍ୟକ ହୁଏ ନାହିଁ, ତେଣୁ ସ୍ପ୍ରେ-ଶୁଖାଇବା ଉଚ୍ଚ ଲୋଡିଂ ବିଷୟବସ୍ତୁ ସହିତ ଶୁଖିଲା NPs ଉତ୍ପାଦନ କରିବାକୁ ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇପାରିବ।
ଏହି ଅଧ୍ୟୟନଟି ଆୟନ ଜେଲ୍ ପଦ୍ଧତି ବ୍ୟବହାର କରି ଚିଟୋସାନ୍ ଏବଂ ସୋଡିୟମ୍ ଟ୍ରାଇପୋଲିଫସଫେଟ୍‌ର କ୍ରସ୍-ଲିଙ୍କିଂ ଦ୍ୱାରା ଇନସୁଲିନ୍-ଲୋଡେଡ୍ NPs ଉତ୍ପାଦନ ରିପୋର୍ଟ କରେ। ଆୟନ ଜେଲେସନ୍ ଏକ ପ୍ରସ୍ତୁତି ପଦ୍ଧତି ଯାହା ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ପରିସ୍ଥିତିରେ ଦୁଇ କିମ୍ବା ଅଧିକ ଆୟନିୟ ପ୍ରଜାତି ମଧ୍ୟରେ ଇଲେକ୍ଟ୍ରୋଷ୍ଟାଟିକ୍ ପାରସ୍ପରିକ କ୍ରିୟା ମାଧ୍ୟମରେ ନାନୋପାର୍ଟିକଲ୍ସର ଉତ୍ପାଦନକୁ ଅନୁମତି ଦିଏ। ଅପ୍ଟିମାଇଜ୍ ହୋଇଥିବା ଚିଟୋସାନ୍/ସୋଡିୟମ୍ ଟ୍ରାଇପୋଲିଫସଫେଟ୍/ଇନସୁଲିନ୍ କ୍ରସ୍-ଲିଙ୍କ୍ ହୋଇଥିବା ନାନୋପାର୍ଟିକଲ୍ସକୁ ଡିହାଇଡ୍ରେଟ୍ କରିବା ପାଇଁ ଫ୍ରିଜ୍-ଡ୍ରାଇଂ ଏବଂ ସ୍ପ୍ରେ-ଡ୍ରାଇଂ କୌଶଳ ଉଭୟ ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇଥିଲା। ଡିହାଇଡ୍ରେସନ୍ ପରେ, ସେମାନଙ୍କର ଆକୃତି SEM ଦ୍ୱାରା ବିଶ୍ଳେଷଣ କରାଯାଇଥିଲା। ସେମାନଙ୍କର ଆକାର ବଣ୍ଟନ, ପୃଷ୍ଠ ଚାର୍ଜ, PDI, ଏନକ୍ୟାପସୁଲେସନ୍ ଦକ୍ଷତା ଏବଂ ଲୋଡିଂ ବିଷୟବସ୍ତୁ ମାପି ସେମାନଙ୍କର ପୁନଃସଂଯୋଗ କ୍ଷମତା ମୂଲ୍ୟାଙ୍କନ କରାଯାଇଥିଲା। ବିଭିନ୍ନ ଡିହାଇଡ୍ରେସନ୍ ପଦ୍ଧତି ଦ୍ୱାରା ଉତ୍ପାଦିତ ରିଜୋଲୁବିଲାଇଜ୍ଡ୍ ନାନୋପାର୍ଟିକଲ୍ସର ଗୁଣବତ୍ତା ସେମାନଙ୍କର ଇନସୁଲିନ୍ ସୁରକ୍ଷା, ମୁକ୍ତି ଆଚରଣ ଏବଂ ସେଲ୍ୟୁଲାର୍ ଅପ୍ଟେକ୍ ପ୍ରଭାବଶାଳୀ ତୁଳନା କରି ମଧ୍ୟ ମୂଲ୍ୟାଙ୍କନ କରାଯାଇଥିଲା।
ମିଶ୍ରିତ ଦ୍ରବଣର pH ଏବଂ chitosan ଏବଂ ଇନସୁଲିନର ଅନୁପାତ ଦୁଇଟି ପ୍ରମୁଖ କାରଣ ଯାହା ଚୂଡ଼ାନ୍ତ NPsର କଣିକା ଆକାର ଏବଂ ଏନକ୍ୟାପସୁଲେସନ୍ ଦକ୍ଷତା (EE)କୁ ପ୍ରଭାବିତ କରେ, କାରଣ ସେମାନେ ସିଧାସଳଖ ଆୟନୋଟ୍ରପିକ୍ ଜେଲେସନ୍ ପ୍ରକ୍ରିୟାକୁ ପ୍ରଭାବିତ କରନ୍ତି। ମିଶ୍ରିତ ଦ୍ରବଣର pH କଣିକା ଆକାର ଏବଂ ଏନକ୍ୟାପସୁଲେସନ୍ ଦକ୍ଷତା ସହିତ ଅତ୍ୟନ୍ତ ସହବନ୍ଧିତ ଥିବା ଦେଖାଯାଇଥିଲା (ଚିତ୍ର 1a)। ଚିତ୍ର 1a ରେ ଦେଖାଯାଇଥିବା ପରି, pH 4.0 ରୁ 6.0 କୁ ବୃଦ୍ଧି ପାଇବା ସହିତ, ହାରାହାରି କଣିକା ଆକାର (nm) ହ୍ରାସ ପାଇଲା ଏବଂ EE ଉଲ୍ଲେଖନୀୟ ଭାବରେ ବୃଦ୍ଧି ପାଇଲା, ଯେତେବେଳେ pH 6.5 କୁ ବୃଦ୍ଧି ପାଇଲା, ହାରାହାରି କଣିକା ଆକାର ବୃଦ୍ଧି ପାଇବା ଆରମ୍ଭ କଲା ଏବଂ EE ଅପରିବର୍ତ୍ତିତ ରହିଲା। chitosan ଏବଂ ଇନସୁଲିନ୍ ର ଅନୁପାତ ବୃଦ୍ଧି ପାଇବା ସହିତ, ହାରାହାରି କଣିକା ଆକାର ମଧ୍ୟ ବୃଦ୍ଧି ପାଏ। ଅଧିକନ୍ତୁ, 2.5:1 (w/w) (ଚିତ୍ର 1b) ରୁ ଅଧିକ chitosan/insulin ର ଏକ ବହନ ଅନୁପାତରେ ନାନୋପାର୍ଟିକାଲ୍ ପ୍ରସ୍ତୁତ କରାଯାଇଥିବା ସମୟରେ EE ରେ କୌଣସି ପରିବର୍ତ୍ତନ ପରିଲକ୍ଷିତ ହୋଇନଥିଲା। ତେଣୁ, ଏହି ଅଧ୍ୟୟନରେ ସର୍ବୋତ୍ତମ ପ୍ରସ୍ତୁତି ଅବସ୍ଥା (pH 6.0, chitosan/insulin ର ବହନ ଅନୁପାତ) 2.5:1) ଅଧିକ ଅଧ୍ୟୟନ ପାଇଁ ଇନସୁଲିନ୍-ଲୋଡେଡ୍ ନାନୋପାର୍ଟିକଲ୍ ପ୍ରସ୍ତୁତ କରିବା ପାଇଁ ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇଥିଲା। ଏହି ପ୍ରସ୍ତୁତି ଅବସ୍ଥାରେ, ଇନସୁଲିନ୍ ନାନୋପାର୍ଟିକଲ୍‌ର ହାରାହାରି କଣିକା ଆକାର 318 nm (ଚିତ୍ର 1c), PDI ଥିଲା 0.18, ଏମ୍ବେଡିଂ ଦକ୍ଷତା 99.4%, ଜେଟା ପୋଟେନ୍ସିଆଲ୍ 9.8 mv, ଏବଂ ଇନସୁଲିନ୍ ଲୋଡିଂ ଥିଲା 25.01% (m/m)। ଟ୍ରାନ୍ସମିସନ୍ ଇଲେକ୍ଟ୍ରୋନ୍ ମାଇକ୍ରୋସ୍କୋପି (TEM) ଫଳାଫଳ ଉପରେ ଆଧାରିତ, ଅପ୍ଟିମାଇଜ୍ ହୋଇଥିବା ନାନୋପାର୍ଟିକଲ୍‌ଗୁଡ଼ିକ ପ୍ରାୟତଃ ଗୋଲାକାର ଏବଂ ଆପେକ୍ଷିକ ଭାବରେ ସମାନ ଆକାର (ଚିତ୍ର 1d) ସହିତ ବିଚ୍ଛିନ୍ନ ଥିଲା।
ଇନସୁଲିନ୍ ନାନୋପାର୍ଟିକଲ୍ସର ପାରାମିଟର ଅପ୍ଟିମାଇଜେସନ୍: (କ) ଇନସୁଲିନ୍ ନାନୋପାର୍ଟିକଲ୍ସର ହାରାହାରି ବ୍ୟାସ ଏବଂ ଏନକ୍ୟାପସୁଲେସନ୍ ଦକ୍ଷତା (EE) ଉପରେ pH ର ପ୍ରଭାବ (ଚିଟୋସାନ୍ ଏବଂ ଇନସୁଲିନ୍ର 5:1 ମାଂସ ଅନୁପାତରେ ପ୍ରସ୍ତୁତ); (ଖ) ଇନସୁଲିନ୍ NPsର ହାରାହାରି ବ୍ୟାସ ଏବଂ ଏନକ୍ୟାପସୁଲେସନ୍ ଦକ୍ଷତା (EE) ଉପରେ chitosan ଏବଂ ଇନସୁଲିନ୍ର ବୃହସ୍ ଅନୁପାତର ପ୍ରଭାବ (ପିଏଚ୍ 6 ରେ ପ୍ରସ୍ତୁତ); (ଗ) ଅପ୍ଟିମାଇଜ୍ ହୋଇଥିବା ଇନସୁଲିନ୍ ନାନୋପାର୍ଟିକଲ୍ସର କଣିକା ଆକାର ବଣ୍ଟନ; (ଘ) ଅପ୍ଟିମାଇଜ୍ ହୋଇଥିବା ଇନସୁଲିନ୍ NPsର TEM ମାଇକ୍ରୋଗ୍ରାଫ୍।
ଏହା ସମସ୍ତେ ଜାଣନ୍ତି ଯେ ଚିଟୋସାନ୍ ହେଉଛି ଏକ ଦୁର୍ବଳ ପଲିଇଲେକ୍ଟ୍ରୋଲାଇଟ୍ ଯାହାର pKa 6.5 ଅଟେ। ଏହା ଏସିଡିକ୍ ମିଡିଆରେ ଧନାତ୍ମକ ଭାବରେ ଚାର୍ଜିତ ହୋଇଥାଏ କାରଣ ଏହାର ମୁଖ୍ୟ ଆମିନୋ ଗ୍ରୁପ୍ ହାଇଡ୍ରୋଜେନ୍ ଆୟନ୍ 15 ଦ୍ୱାରା ପ୍ରୋଟୋନେଟେଡ୍ ହୋଇଥାଏ। ତେଣୁ, ଏହାକୁ ପ୍ରାୟତଃ ନକାରାତ୍ମକ ଭାବରେ ଚାର୍ଜ ହୋଇଥିବା ମାକ୍ରୋମଲିକ୍ୟୁଲ୍ସକୁ ଏନକ୍ୟାପସୁଲେଟ୍ କରିବା ପାଇଁ ଏକ ବାହକ ଭାବରେ ବ୍ୟବହାର କରାଯାଏ। ଏହି ଅଧ୍ୟୟନରେ, ଚିଟୋସାନ୍ 5.3 ର ଆଇସୋଇଲେକ୍ଟ୍ରିକ୍ ପଏଣ୍ଟ ସହିତ ଇନସୁଲିନ୍ ଏନକ୍ୟାପସୁଲେଟ୍ କରିବା ପାଇଁ ବ୍ୟବହୃତ ହୋଇଥିଲା। ଯେହେତୁ ଚିଟୋସାନ୍ ଏକ ଆବରଣ ସାମଗ୍ରୀ ଭାବରେ ବ୍ୟବହୃତ ହୁଏ, ଏହାର ଅନୁପାତ ବୃଦ୍ଧି ସହିତ, ନାନୋପାର୍ଟିକଲ୍ସର ବାହ୍ୟ ସ୍ତରର ଘନତା ଅନୁରୂପ ଭାବରେ ବୃଦ୍ଧି ପାଏ, ଯାହା ଫଳରେ ଏକ ବଡ଼ ହାରାହାରି କଣିକା ଆକାର ସୃଷ୍ଟି ହୁଏ। ଏହା ସହିତ, ଚିଟୋସାନ୍ ର ଉଚ୍ଚ ସ୍ତର ଅଧିକ ଇନସୁଲିନ୍ ଏନକ୍ୟାପସୁଲେଟ୍ କରିପାରିବ। ଆମ କ୍ଷେତ୍ରରେ, ଯେତେବେଳେ ଚିଟୋସାନ୍ ଏବଂ ଇନସୁଲିନ୍ ର ଅନୁପାତ 2.5:1 ରେ ପହଞ୍ଚିଥିଲା ​​ସେତେବେଳେ EE ସର୍ବାଧିକ ଥିଲା, ଏବଂ ଯେତେବେଳେ ଅନୁପାତ ବୃଦ୍ଧି ପାଉଥିଲା ସେତେବେଳେ EE ରେ କୌଣସି ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ପରିବର୍ତ୍ତନ ହୋଇନଥିଲା।
ଚିଟୋସାନ ଏବଂ ଇନସୁଲିନର ଅନୁପାତ ବ୍ୟତୀତ, NPs ପ୍ରସ୍ତୁତିରେ pH ମଧ୍ୟ ଏକ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ଭୂମିକା ଗ୍ରହଣ କରିଥିଲା। ଗାନ୍ ଏଟ୍ ଅଲ୍ 17 ଚିଟୋସାନ ନାନୋପାର୍ଟିକାଲ୍ସର କଣିକା ଆକାର ଉପରେ pH ର ପ୍ରଭାବ ଅଧ୍ୟୟନ କରିଥିଲେ। ସେମାନେ pH 6.0 ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ କଣିକା ଆକାରରେ ନିରନ୍ତର ହ୍ରାସ ପାଇଥିଲେ, ଏବଂ pH > 6.0 ରେ କଣିକା ଆକାରରେ ଏକ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ବୃଦ୍ଧି ପରିଲକ୍ଷିତ ହୋଇଥିଲା, ଯାହା ଆମର ପର୍ଯ୍ୟବେକ୍ଷଣ ସହିତ ସୁସଙ୍ଗତ। ଏହି ଘଟଣା ଏହି କାରଣ ଯେ ବର୍ଦ୍ଧିତ pH ସହିତ, ଇନସୁଲିନ୍ ଅଣୁ ଏକ ନକାରାତ୍ମକ ପୃଷ୍ଠ ଚାର୍ଜ ହାସଲ କରେ, ତେଣୁ, ଚିଟୋସାନ/ସୋଡିୟମ ଟ୍ରାଇପଲିଫସଫେଟ୍ (TPP) ଜଟିଳ ସହିତ ଇଲେକ୍ଟ୍ରୋଷ୍ଟାଟିକ୍ ପାରସ୍ପରିକ କ୍ରିୟାକୁ ପସନ୍ଦ କରେ, ଯାହା ଫଳରେ ଛୋଟ କଣିକା ଆକାର ଏବଂ ଉଚ୍ଚ EE ହୋଇଥାଏ। ତଥାପି, ଯେତେବେଳେ pH 6.5 ରେ ଆଡଜଷ୍ଟ କରାଯାଇଥିଲା, ଚିଟୋସାନରେ ଥିବା ଆମିନୋ ଗୋଷ୍ଠୀଗୁଡ଼ିକ ଡିପ୍ରୋଟୋନେଟେଡ୍ ହୋଇଯାଇଥିଲା, ଯାହା ଫଳରେ ଚିଟୋସାନ ଫୋଲ୍ଡିଂ ହୋଇଥିଲା। ଏହିପରି, ଉଚ୍ଚ pH TPP ଏବଂ ଇନସୁଲିନରେ ଆମିନୋ ଆୟନଗୁଡ଼ିକର କମ୍ ଏକ୍ସପୋଜରରେ ପରିଣତ ହୁଏ, ଯାହା ଫଳରେ କମ କ୍ରସ୍-ଲିଙ୍କିଂ, ବଡ଼ ଅନ୍ତିମ ହାରାହାରି କଣିକା ଆକାର ଏବଂ କମ EE ହୋଇଥାଏ।
ଫ୍ରିଜ୍-ଡ୍ରାଇଡ୍ ଏବଂ ସ୍ପ୍ରେ-ଡ୍ରାଇଡ୍ NPs ର ରୂପଗତ ଗୁଣଗୁଡ଼ିକର ବିଶ୍ଳେଷଣ ଉତ୍ତମ ଡିହାଇଡ୍ରେସନ୍ ଏବଂ ପାଉଡର ଗଠନ କୌଶଳ ଚୟନକୁ ମାର୍ଗଦର୍ଶନ କରିପାରିବ। ପସନ୍ଦିତ ପଦ୍ଧତି ଔଷଧ ସ୍ଥିରତା, ସମାନ କଣିକା ଆକାର, ଉଚ୍ଚ ଔଷଧ ଲୋଡିଂ ଏବଂ ମୂଳ ଦ୍ରବଣରେ ଭଲ ଦ୍ରବଣୀୟତା ପ୍ରଦାନ କରିବା ଉଚିତ। ଏହି ଅଧ୍ୟୟନରେ, ଦୁଇଟି କୌଶଳକୁ ଭଲ ଭାବରେ ତୁଳନା କରିବା ପାଇଁ, ଡିହାଇଡ୍ରେସନ୍ ସମୟରେ 1% ମାନିଟୋଲ୍ ସହିତ କିମ୍ବା ବିନା ଇନସୁଲିନ୍ NPs ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇଥିଲା। ଫ୍ରିଜ୍ ଡ୍ରାଇଭ୍ ଏବଂ ସ୍ପ୍ରେ ଡ୍ରାଇଭ୍ ପାଇଁ ବିଭିନ୍ନ ଶୁଖିଲା ପାଉଡର ଫର୍ମୁଲେସନ୍‌ରେ ମ୍ୟାନିଟୋଲ୍ ଏକ ବଲ୍କିଂ ଏଜେଣ୍ଟ କିମ୍ବା କ୍ରାଇଓପ୍ରୋଟେକ୍ଟଣ୍ଟ ଭାବରେ ବ୍ୟବହୃତ ହୁଏ। ଚିତ୍ର 2a ରେ ଦେଖାଯାଇଥିବା ପରି ମ୍ୟାନିଟୋଲ୍ ବିନା ଲାଇଓଫାଇଲାଇଜ୍ଡ୍ ଇନସୁଲିନ୍ ନାନୋପାର୍ଟିକଲ୍ ପାଇଁ, ବଡ଼, ଅନିୟମିତ ଏବଂ ରୁକ୍ଷ ପୃଷ୍ଠ ସହିତ ଏକ ଅତ୍ୟନ୍ତ ଛିଦ୍ରଯୁକ୍ତ ପାଉଡର ଗଠନ ଇଲେକ୍ଟ୍ରୋନ୍ ମାଇକ୍ରୋସ୍କୋପି (SEM) ସ୍କାନିଂ ଅଧୀନରେ ପରିଲକ୍ଷିତ ହୋଇଥିଲା। ଡିହାଇଡ୍ରେସନ୍ ପରେ ପାଉଡରରେ କିଛି ବିଚ୍ଛିନ୍ନ କଣିକା ଚିହ୍ନଟ ହୋଇଥିଲା (ଚିତ୍ର 2e)। ଏହି ଫଳାଫଳଗୁଡ଼ିକ ସୂଚାଇଛି ଯେ ଅଧିକାଂଶ NPs କୌଣସି କ୍ରାଇଓପ୍ରୋଟେକ୍ଟଣ୍ଟ ବିନା ଫ୍ରିଜ୍-ଡ୍ରାଇଂ ସମୟରେ ବିଘଟିତ ହୋଇଥିଲା। ଫ୍ରିଜ୍-ଡ୍ରାଇଡ୍ ଏବଂ ସ୍ପ୍ରେ-ଡ୍ରାଇଡ୍ ଇନସୁଲିନ୍ ନାନୋପାର୍ଟିକଲ୍ ପାଇଁ 1% ମାନିଟୋଲ୍ ଧାରଣ କରି, ମସୃଣ ପୃଷ୍ଠ ସହିତ ଗୋଲାକାର ନାନୋପାର୍ଟିକଲ୍ ପରିଲକ୍ଷିତ ହୋଇଥିଲା (ଚିତ୍ର)। 2b,d,f,h)।ମାନିଟୋଲ ବିନା ସ୍ପ୍ରେ-ଶୁଷ୍କ ଇନସୁଲିନ୍ ନାନୋପାର୍ଟିକଲ୍ସ ଗୋଲାକାର ରହିଲା କିନ୍ତୁ ପୃଷ୍ଠରେ କୁଞ୍ଚିତ ଥିଲା (ଚିତ୍ର 2c)। ନିମ୍ନରେ ମୁକ୍ତ ଆଚରଣ ଏବଂ କୋଷୀୟ ଗ୍ରହଣ ପରୀକ୍ଷାରେ ଗୋଲାକାର ଏବଂ କୁଞ୍ଚିତ ପୃଷ୍ଠ ବିଷୟରେ ଆହୁରି ଆଲୋଚନା କରାଯାଇଛି। ଶୁଖିଲା NPs ର ଦୃଶ୍ୟମାନ ଦୃଶ୍ୟ ଉପରେ ଆଧାର କରି, ମାନିଟୋଲ ବିନା ସ୍ପ୍ରେ-ଶୁଷ୍କ NPs ଏବଂ ଫ୍ରିଜ୍-ଶୁଷ୍କ ଏବଂ ମାନିଟୋଲ ସହିତ ସ୍ପ୍ରେ-ଶୁଷ୍କ NPs ଉଭୟ ସୂକ୍ଷ୍ମ NPs ପାଉଡର ପ୍ରଦାନ କରିଥିଲେ (ଚିତ୍ର 2f,g,h)। କଣିକା ପୃଷ୍ଠ ମଧ୍ୟରେ ପୃଷ୍ଠ କ୍ଷେତ୍ରଫଳ ଯେତେ ବଡ଼ ହେବ, ଦ୍ରବଣୀୟତା ସେତେ ଅଧିକ ହେବ ଏବଂ ତେଣୁ ମୁକ୍ତ ହାର ସେତେ ଅଧିକ ହେବ।
ବିଭିନ୍ନ ଡିହାଇଡ୍ରେଟେଡ୍ ଇନସୁଲିନ୍ NPs ର ରୂପ ବିଜ୍ଞାନ: (କ) ମାନିଟୋଲ୍ ବିନା ଲାଇଓଫାଇଲାଇଜ୍ଡ ଇନସୁଲିନ୍ NPs ର SEM ପ୍ରତିଛବି; (ଖ) ମାନିଟୋଲ୍ ସହିତ ଲାଇଓଫାଇଲାଇଜ୍ଡ ଇନସୁଲିନ୍ NPs ର SEM ପ୍ରତିଛବି; (ଗ) ମାନିଟୋଲ୍ ବିନା ସ୍ପ୍ରେ-ଶୁଷ୍କ ଇନସୁଲିନ୍ NPs ର SEM ପ୍ରତିଛବି; (ଘ) ମାନିଟୋଲ୍ ସହିତ ସ୍ପ୍ରେ-ଶୁଷ୍କ ଇନସୁଲିନ୍ NPs ର SEM ପ୍ରତିଛବି; (ଙ) ମାନିଟୋଲ୍ ବିନା ଲାଇଓଫାଇଲାଇଜ୍ଡ ଇନସୁଲିନ୍ NPs ପାଉଡରର ପ୍ରତିଛବି; (ଚ) ମାନିଟୋଲ୍ ସହିତ ଲାଇଓଫାଇଲାଇଜ୍ଡ ଇନସୁଲିନ୍ NPs ର ପ୍ରତିଛବି; (ଛ) ମାନିଟୋଲ୍ ବିନା ସ୍ପ୍ରେ-ଶୁଷ୍କ ଇନସୁଲିନ୍ NPs ପାଉଡରର ପ୍ରତିଛବି; (ଜ) ମାନିଟୋଲ୍ ସହିତ ସ୍ପ୍ରେ-ଶୁଷ୍କ ଇନସୁଲିନ୍ NPs ପାଉଡରର ପ୍ରତିଛବି।
ଫ୍ରିଜ୍-ଡ୍ରାଇଂ ସମୟରେ, ମାନିଟୋଲ ଏକ କ୍ରାଇଓପ୍ରୋଟେକ୍ଟଣ୍ଟ ଭାବରେ କାର୍ଯ୍ୟ କରେ, NPs କୁ ଏକ ଆକାରହୀନ ଆକାରରେ ରଖେ ଏବଂ ବରଫ ସ୍ଫଟିକ ଦ୍ୱାରା କ୍ଷତିକୁ ରୋକେ19। ବିପରୀତରେ, ସ୍ପ୍ରେ ଶୁଖାଇବା ସମୟରେ କୌଣସି ଫ୍ରିଜ୍ ପଦକ୍ଷେପ ନାହିଁ। ତେଣୁ ଏହି ପଦ୍ଧତିରେ ମାନିଟୋଲ ଆବଶ୍ୟକ ନାହିଁ। ପ୍ରକୃତରେ, ମାନିଟୋଲ ବିନା ସ୍ପ୍ରେ-ଡ୍ରାଇଂ NPs ପୂର୍ବ ବର୍ଣ୍ଣିତ ପରି ସୂକ୍ଷ୍ମ NPs ପ୍ରଦାନ କରେ। ତଥାପି, ମାନିଟୋଲ NPs କୁ ଅଧିକ ଗୋଲାକାର ଗଠନ ଦେବା ପାଇଁ ସ୍ପ୍ରେ-ଡ୍ରାଇଂ ପ୍ରକ୍ରିୟାରେ ଏକ ଫିଲର ଭାବରେ କାର୍ଯ୍ୟ କରିପାରିବ20 (ଚିତ୍ର 2d), ଯାହା ଏପରି ଏନକ୍ୟାପସୁଲେଟେଡ୍ NPs ର ସମାନ ମୁକ୍ତି ଆଚରଣ ପାଇବାରେ ସାହାଯ୍ୟ କରେ। ଏହା ସହିତ, ଏହା ସ୍ପଷ୍ଟ ଯେ କିଛି ବଡ଼ କଣିକା ଫ୍ରିଜ୍-ଡ୍ରାଇଂ ଏବଂ ସ୍ପ୍ରେ-ଡ୍ରାଇଂ ଇନସୁଲିନ୍ NPs ଧାରଣ କରି ମାନିଟୋଲ (ଚିତ୍ର 2b,d) ଉଭୟରେ ଚିହ୍ନଟ କରାଯାଇପାରିବ, ଯାହା ଏନକ୍ୟାପସୁଲେଟେଡ୍ ଇନସୁଲିନ୍ ସହିତ କଣିକା କୋରରେ ମାନିଟୋଲ ଜମା ହେବା ହେତୁ ହୋଇପାରେ। ପ୍ରତି.ଚିଟୋସାନ୍ ସ୍ତର। ଏହା ଉଲ୍ଲେଖନୀୟ ଯେ ଏହି ଅଧ୍ୟୟନରେ, ନିର୍ଜଳନ ପରେ ଗୋଲାକାର ଗଠନ ଅକ୍ଷୁର୍ଣ୍ଣ ରହିବା ନିଶ୍ଚିତ କରିବା ପାଇଁ, ମାନିଟଲ୍ ଏବଂ ଚିଟୋସାନ୍ ର ଅନୁପାତ 5:1 ରଖାଯାଇଛି, ଯାହା ଦ୍ଵାରା ବହୁ ପରିମାଣର ଫିଲର ଶୁଖିଲା NPs ର କଣିକା ଆକାରକୁ ମଧ୍ୟ ବୃଦ୍ଧି କରିପାରିବ।
ଫୁରିୟର ଟ୍ରାନ୍ସଫର୍ମ ଇନଫ୍ରାରେଡ ଆଟେନୁଏଟେଡ୍ ଟୋଟାଲ ରିଫ୍ଲେକ୍ସନ (FTIR-ATR) ସ୍ପେକ୍ଟ୍ରୋସ୍କୋପି ମାଗଣା ଇନସୁଲିନ୍, ଚିଟୋସାନ୍, ଚିଟୋସାନ୍, TPP ଏବଂ ଇନସୁଲିନ୍ ର ଭୌତିକ ମିଶ୍ରଣକୁ ଚିହ୍ନିତ କରିଥିଲା। ସମସ୍ତ ଡିହାଇଡ୍ରେଟେଡ୍ NPଗୁଡ଼ିକୁ FTIR-ATR ସ୍ପେକ୍ଟ୍ରୋସ୍କୋପି ବ୍ୟବହାର କରି ଚିହ୍ନିତ କରାଯାଇଥିଲା। ଉଲ୍ଲେଖନୀୟ ଭାବରେ, 1641, 1543 ଏବଂ 1412 cm-1 ବ୍ୟାଣ୍ଡ ତୀବ୍ରତା ମାନିଟୋଲ୍ ସହିତ ଫ୍ରିଜ୍-ଡ୍ରାଏ ଏନକ୍ୟାପସୁଲେଟେଡ୍ NPs ଏବଂ ମାନିଟୋଲ୍ ସହିତ ଏବଂ ବିନା ସ୍ପ୍ରେ-ଡ୍ରାଏ NPs ରେ ପରିଲକ୍ଷିତ ହୋଇଥିଲା (ଚିତ୍ର 3)। ପୂର୍ବରୁ ରିପୋର୍ଟ କରାଯାଇଥିବା ପରି, ଶକ୍ତିରେ ଏହି ବୃଦ୍ଧି ଚିଟୋସାନ୍, TPP ଏବଂ ଇନସୁଲିନ୍ ମଧ୍ୟରେ କ୍ରସ୍-ଲିଙ୍କିଂ ସହିତ ଜଡିତ ଥିଲା। ଚିଟୋସାନ୍ ଏବଂ ଇନସୁଲିନ୍ ମଧ୍ୟରେ ପାରସ୍ପରିକ କ୍ରିୟାର ତଦନ୍ତରୁ ଜଣାପଡିଛି ଯେ ଇନସୁଲିନ୍-ଲୋଡେଡ୍ ଚିଟୋସାନ୍ ନାନୋପାର୍ଟିକଲ୍ସର FTIR ସ୍ପେକ୍ଟ୍ରାରେ, ଚିଟୋସାନ୍ ବ୍ୟାଣ୍ଡ ଇନସୁଲିନ୍ ସହିତ ଓଭରଲାପ୍ ହୋଇଥିଲା, କାର୍ବୋନିଲ୍ ତୀବ୍ରତା (1641 cm-1) ଏବଂ ଆମାଇନ୍ (1543 cm-1) ବେଲ୍ଟ ବୃଦ୍ଧି କରିଥିଲା। TPP ର ଟ୍ରାଇପଲିଫସଫେଟ୍ ଗୋଷ୍ଠୀଗୁଡ଼ିକ ଆମୋନିୟମ୍ ସହିତ ଲିଙ୍କ୍ ହୋଇଥିଲା। ଚିଟୋସାନରେ ଗୋଷ୍ଠୀ, ୧୪୧୨ ସେମି-୧ ରେ ଏକ ବ୍ୟାଣ୍ଡ ଗଠନ କରୁଛନ୍ତି।
ବିଭିନ୍ନ ପଦ୍ଧତି ଦ୍ୱାରା ନିର୍ଜଳିତ ମାଗଣା ଇନସୁଲିନ୍, ଚିଟୋସାନ୍, ଚିଟୋସାନ୍/TPP/ଇନସୁଲିନ୍ ଏବଂ NPs ର ଭୌତିକ ମିଶ୍ରଣର FTIR-ATR ସ୍ପେକ୍ଟ୍ରା।
ଅଧିକନ୍ତୁ, ଏହି ଫଳାଫଳଗୁଡ଼ିକ SEM ରେ ଦେଖାଯାଇଥିବା ସହିତ ସମାନ, ଯାହା ଦର୍ଶାଉଛି ଯେ ଏନକ୍ୟାପସୁଲେଟେଡ୍ NPs ସ୍ପ୍ରେ ଏବଂ ଫ୍ରିଜ୍-ଡ୍ରାଏ ଉଭୟ ସମୟରେ ଅକ୍ଷୁର୍ଣ୍ଣ ରହିଥାଏ, କିନ୍ତୁ ମାନଟିଲ ଅନୁପସ୍ଥିତିରେ, କେବଳ ସ୍ପ୍ରେ-ଡ୍ରାଏଇଂ ଏନକ୍ୟାପସୁଲେଟେଡ୍ କଣିକା ଉତ୍ପାଦନ କରିଥିଲା। ବିପରୀତରେ, ମାନଟିଲ ବିନା ଫ୍ରିଜ୍-ଡ୍ରାଏ NPs ର FTIR-ATR ସ୍ପେକ୍ଟ୍ରଲ୍ ଫଳାଫଳ ଚିଟୋସାନ୍, TPP ଏବଂ ଇନସୁଲିନ୍ ର ଭୌତିକ ମିଶ୍ରଣ ସହିତ ବହୁତ ସମାନ ଥିଲା। ଏହି ଫଳାଫଳ ସୂଚାଇ ଦିଏ ଯେ ଚିଟୋସାନ୍, TPP ଏବଂ ଇନସୁଲିନ୍ ମଧ୍ୟରେ କ୍ରସ୍-ଲିଙ୍କ୍ ଆଉ ମ୍ୟାନିଟୋଲ୍ ବିନା ଫ୍ରିଜ୍-ଡ୍ରାଏ NPs ରେ ଉପସ୍ଥିତ ନାହିଁ। କ୍ରାଇଓପ୍ରୋଟେକ୍ଟ୍ୟାଣ୍ଟ ବିନା ଫ୍ରିଜ୍-ଡ୍ରାଏଇଂ ସମୟରେ NPs ଗଠନ ନଷ୍ଟ ହୋଇଯାଇଥିଲା, ଯାହା SEM ଫଳାଫଳରେ ଦେଖାଯାଇପାରେ (ଚିତ୍ର 2a)। ଡିହାଇଡ୍ରେଟେଡ୍ ଇନସୁଲିନ୍ NPs ର ଆକୃତି ଏବଂ FTIR ଫଳାଫଳ ଉପରେ ଆଧାରିତ, କେବଳ ଲାଇଓଫାଇଲାଇଜ୍ଡ, ସ୍ପ୍ରେ-ଡ୍ରାଏ ଏବଂ ମ୍ୟାନିଟୋଲ୍-ମୁକ୍ତ NPs ପୁନଃଗଠନ ପରୀକ୍ଷଣ ପାଇଁ ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇଥିଲା ଏବଂ ମାନିଟୋଲ୍-ମୁକ୍ତ NPs ର ବିଘଟନ ଯୋଗୁଁ ମାନିଟୋଲ୍-ମୁକ୍ତ NPs ର ବିଘଟନ ହୋଇଥିଲା। ନିର୍ଜଳନ। ଆଲୋଚନା କରନ୍ତୁ।
ଡିହାଇଡ୍ରେସନ୍ ଦୀର୍ଘକାଳୀନ ସଂରକ୍ଷଣ ଏବଂ ଅନ୍ୟ ଫର୍ମୁଲେସନରେ ପୁନଃପ୍ରକ୍ରିୟାକରଣ ପାଇଁ ବ୍ୟବହୃତ ହୁଏ। ଶୁଷ୍କ NPs ର ସଂରକ୍ଷଣ ପରେ ପୁନର୍ଗଠିତ ହେବାର କ୍ଷମତା ଟାବଲେଟ୍ ଏବଂ ଫିଲ୍ମ ଭଳି ବିଭିନ୍ନ ଫର୍ମୁଲେସନରେ ବ୍ୟବହାର ପାଇଁ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ। ଆମେ ଦେଖିଲୁ ଯେ ମାନିଟୋଲର ଅନୁପସ୍ଥିତିରେ ସ୍ପ୍ରେ-ଶୁଷ୍କ ଇନସୁଲିନ୍ NPs ର ହାରାହାରି କଣିକା ଆକାର ପୁନର୍ଗଠନ ପରେ କେବଳ ସାମାନ୍ୟ ବୃଦ୍ଧି ପାଇଥିଲା। ଅନ୍ୟପକ୍ଷରେ, ମାନିଟୋଲ ସହିତ ସ୍ପ୍ରେ-ଶୁଷ୍କ ଏବଂ ଫ୍ରିଜ୍-ଶୁଷ୍କ ଇନସୁଲିନ୍ ନାନୋପାର୍ଟିକଲର କଣିକା ଆକାର ଉଲ୍ଲେଖନୀୟ ଭାବରେ ବୃଦ୍ଧି ପାଇଥିଲା (ସାରଣୀ 1)। ଏହି ଅଧ୍ୟୟନରେ ସମସ୍ତ NPs ର ପୁନଃସଂଯୋଗ ପରେ PDI ଏବଂ EE ଉଲ୍ଲେଖନୀୟ ଭାବରେ ପରିବର୍ତ୍ତନ ହୋଇନଥିଲା (p > 0.05)। ଏହି ଫଳାଫଳ ସୂଚାଇଥାଏ ଯେ ପୁନଃଦ୍ରବଣ ପରେ ଅଧିକାଂଶ କଣିକା ଅକ୍ଷୁର୍ଣ୍ଣ ରହିଥିଲା। ତଥାପି, ମାନିଟୋଲ ଯୋଡିବା ଫଳରେ ଲାଇଓଫାଇଲାଇଜଡ୍ ଏବଂ ସ୍ପ୍ରେ-ଶୁଷ୍କ ମାନିଟୋଲ ନାନୋପାର୍ଟିକଲର ଇନସୁଲିନ୍ ଲୋଡିଂ ବହୁତ ହ୍ରାସ ପାଇଥିଲା (ସାରଣୀ 1)। ବିପରୀତରେ, ମାନିଟୋଲ ବିନା ସ୍ପ୍ରେ-ଶୁଷ୍କ NPs ର ଇନସୁଲିନ୍ ଲୋଡ୍ ବିଷୟବସ୍ତୁ ପୂର୍ବ ପରି ସମାନ ରହିଥିଲା ​​(ସାରଣୀ 1)।
ଏହା ସମସ୍ତେ ଜାଣନ୍ତି ଯେ ଔଷଧ ବିତରଣ ଉଦ୍ଦେଶ୍ୟରେ ବ୍ୟବହାର କରାଯିବା ସମୟରେ ନାନୋପାର୍ଟିକଲ୍ସ ଲୋଡିଂ ଅତ୍ୟନ୍ତ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ। କମ୍ ଲୋଡିଂ ଥିବା NP ପାଇଁ, ଚିକିତ୍ସା ସୀମାରେ ପହଞ୍ଚିବା ପାଇଁ ବହୁତ ପରିମାଣର ସାମଗ୍ରୀ ଆବଶ୍ୟକ। ତଥାପି, ଏପରି ଉଚ୍ଚ NP ସାନ୍ଦ୍ରତାର ଉଚ୍ଚ ସାନ୍ଦ୍ରତା ଯଥାକ୍ରମେ ମୌଖିକ ପ୍ରଶାସନ ଏବଂ ଇଞ୍ଜେକ୍ସନଯୋଗ୍ୟ ଫର୍ମୁଲେସନରେ ଅସୁବିଧା ଏବଂ ଅସୁବିଧା ସୃଷ୍ଟି କରେ 22। ଏହା ବ୍ୟତୀତ, ଇନସୁଲିନ୍ NPଗୁଡ଼ିକୁ ଟାବଲେଟ୍ ଏବଂ ସାନ୍ଦ୍ର ବାୟୋଫିଲ୍ମ୍ ତିଆରି କରିବା ପାଇଁ ମଧ୍ୟ ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇପାରିବ 23, 24, ଯାହା ପାଇଁ କମ ଲୋଡିଂ ସ୍ତରରେ ବହୁ ପରିମାଣର NP ବ୍ୟବହାର ଆବଶ୍ୟକ, ଫଳସ୍ୱରୂପ ବଡ଼ ଟାବଲେଟ୍ ଏବଂ ଘନ ବାୟୋଫିଲ୍ମ୍ ଯାହା ମୌଖିକ ପ୍ରୟୋଗ ପାଇଁ ଉପଯୁକ୍ତ ନୁହେଁ। ତେଣୁ, ଉଚ୍ଚ ଇନସୁଲିନ୍ ଲୋଡ୍ ସହିତ ଡିହାଇଡ୍ରେଟେଡ୍ NPଗୁଡ଼ିକ ଅତ୍ୟନ୍ତ ଆଗ୍ରହ୍ୟ। ଆମର ଫଳାଫଳଗୁଡ଼ିକ ସୂଚାଇ ଦିଏ ଯେ ମାନିଟଲ୍-ମୁକ୍ତ ସ୍ପ୍ରେ-ଶୁଷ୍କ NPଗୁଡ଼ିକର ଉଚ୍ଚ ଇନସୁଲିନ୍ ଲୋଡ୍ ଏହି ବିକଳ୍ପ ବିତରଣ ପଦ୍ଧତି ପାଇଁ ଅନେକ ଆକର୍ଷଣୀୟ ସୁବିଧା ପ୍ରଦାନ କରିପାରିବ।
ସମସ୍ତ ଡିହାଇଡ୍ରେଟେଡ୍ NPଗୁଡ଼ିକୁ ତିନି ମାସ ପାଇଁ ରେଫ୍ରିଜରେଟରରେ ରଖାଯାଇଥିଲା। SEM ଫଳାଫଳରୁ ଜଣାପଡିଛି ଯେ ତିନି ମାସର ସଂରକ୍ଷଣ ସମୟରେ ସମସ୍ତ ଡିହାଇଡ୍ରେଟେଡ୍ NPଗୁଡ଼ିକର ଆକୃତି ବିଶେଷ ଭାବରେ ପରିବର୍ତ୍ତନ ହୋଇନାହିଁ (ଚିତ୍ର 4)। ପାଣିରେ ପୁନର୍ଗଠନ ପରେ, ସମସ୍ତ NPଗୁଡ଼ିକ EEରେ ସାମାନ୍ୟ ହ୍ରାସ ଦେଖାଇଥିଲେ ଏବଂ ତିନି ମାସର ସଂରକ୍ଷଣ ଅବଧି ମଧ୍ୟରେ ପ୍ରାୟ ଅଳ୍ପ ପରିମାଣ (~5%) ଇନସୁଲିନ୍ ଛାଡିଥିଲେ (ସାରଣୀ 2)। ତଥାପି, ସମସ୍ତ ନାନୋପାର୍ଟିକାଲ୍‌ର ହାରାହାରି କଣିକା ଆକାର ବୃଦ୍ଧି ପାଇଥିଲା। ମାନିଟୋଲ୍ ବିନା ସ୍ପ୍ରେ-ଶୁଷ୍କ NPsର କଣିକା ଆକାର 525 nm କୁ ବୃଦ୍ଧି ପାଇଥିଲା, ଯେତେବେଳେ ମାନିଟୋଲ୍ ସହିତ ସ୍ପ୍ରେ-ଶୁଷ୍କ ଏବଂ ଫ୍ରିଜ୍-ଶୁଷ୍କ NPsର କଣିକା ଆକାର ଯଥାକ୍ରମେ 872 ଏବଂ 921 nm କୁ ବୃଦ୍ଧି ପାଇଥିଲା (ସାରଣୀ 2)।
ତିନି ମାସ ପାଇଁ ସଂରକ୍ଷିତ ବିଭିନ୍ନ ଡିହାଇଡ୍ରେଟେଡ୍ ଇନସୁଲିନ୍ NPs ର ଆକୃତି: (କ) ମାନିଟୋଲ୍ ସହିତ ଲାଇଓଫାଇଲାଇଜ୍ଡ ଇନସୁଲିନ୍ NPs ର SEM ପ୍ରତିଛବି; (ଖ) ମାନିଟୋଲ୍ ବିନା ସ୍ପ୍ରେ-ଶୁଷ୍କ ଇନସୁଲିନ୍ ନାନୋପାର୍ଟିକଲ୍ ର SEM ପ୍ରତିଛବି; (ଗ) ସ୍ପ୍ରେ-ଶୁଷ୍କ ଇନସୁଲିନ୍ NPs ର ମାନିଟୋଲ୍ ବିନା SEM ପ୍ରତିଛବି।
ଏହା ବ୍ୟତୀତ, ମାନିଟୋଲ ସହିତ ସ୍ପ୍ରେ-ଶୁଷ୍କ ଏବଂ ଫ୍ରିଜ୍-ଶୁଷ୍କ ପୁନଃଗଠିତ ଇନସୁଲିନ୍ ନାନୋପାର୍ଟିକଲ୍ସରେ ଅବକ୍ଷେପଣ ଦେଖାଯାଇଥିଲା (ଚିତ୍ର S2)। ଏହା ପାଣିରେ ସଠିକ୍ ଭାବରେ ଝୁଲି ନ ଥିବା ବଡ଼ କଣିକା ଯୋଗୁଁ ହୋଇପାରେ। ଉପରୋକ୍ତ ସମସ୍ତ ଫଳାଫଳ ଦର୍ଶାଏ ଯେ ସ୍ପ୍ରେ ଶୁଷ୍କ କରିବା କୌଶଳ ଇନସୁଲିନ୍ ନାନୋପାର୍ଟିକଲ୍ସକୁ ନିର୍ଜଳନରୁ ରକ୍ଷା କରିପାରିବ ଏବଂ ଇନସୁଲିନ୍ ନାନୋପାର୍ଟିକଲ୍ସର ଉଚ୍ଚ ଲୋଡିଂ କୌଣସି ଫିଲର କିମ୍ବା କ୍ରାଇଓପ୍ରୋଟେକ୍ଟଣ୍ଟ ବିନା ପ୍ରାପ୍ତ କରାଯାଇପାରିବ।
ଡିହାଇଡ୍ରେସନ୍ ପରେ ଏନଜାଇମାଟିକ୍ ହଜମ ବିରୁଦ୍ଧରେ NPs ର ସୁରକ୍ଷା କ୍ଷମତା ପ୍ରଦର୍ଶନ କରିବା ପାଇଁ ଇନସୁଲିନ୍ ପ୍ରତିଧାରଣକୁ pH = 2.5 ମାଧ୍ୟମରେ ପେପ୍ସିନ୍, ଟ୍ରିପ୍ସିନ୍ ଏବଂ α-କାଇମୋଟ୍ରିପ୍ସିନ୍ ସହିତ ପରୀକ୍ଷା କରାଯାଇଥିଲା। ଡିହାଇଡ୍ରେସନ୍ NPs ର ଇନସୁଲିନ୍ ପ୍ରତିଧାରଣକୁ ସଦ୍ୟ ପ୍ରସ୍ତୁତ NPs ସହିତ ତୁଳନା କରାଯାଇଥିଲା, ଏବଂ ମାଗଣା ଇନସୁଲିନ୍ କୁ ଏକ ନକାରାତ୍ମକ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ ଭାବରେ ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇଥିଲା। ଏହି ଅଧ୍ୟୟନରେ, ତିନୋଟି ଏନଜାଇମାଟିକ୍ ଚିକିତ୍ସାରେ 4 ଘଣ୍ଟା ମଧ୍ୟରେ ମାଗଣା ଇନସୁଲିନ୍ ଦ୍ରୁତ ଇନସୁଲିନ୍ ନିଷ୍କାସନ ଦେଖାଇଥିଲା (ଚିତ୍ର 5a–c)। ବିପରୀତରେ, ମ୍ୟାନଟିଟୋଲ୍ ସହିତ ଫ୍ରିଜ୍-ଡ୍ରାଏ ଏବଂ ମ୍ୟାନଟିଟୋଲ୍ ସହିତ କିମ୍ବା ବିନା ସ୍ପ୍ରେ-ଡ୍ରାଏ NPs ର ଇନସୁଲିନ୍ ନିଷ୍କାସନ ପରୀକ୍ଷା ଏନଜାଇମାଟିକ୍ ହଜମ ବିରୁଦ୍ଧରେ ଏହି NPs ର ଯଥେଷ୍ଟ ଅଧିକ ସୁରକ୍ଷା ଦେଖାଇଥିଲା, ଯାହା ସଦ୍ୟ ପ୍ରସ୍ତୁତ ଇନସୁଲିନ୍ NPs (ଚିତ୍ର 1) ସହିତ ସମାନ ଥିଲା। ପେପ୍ସିନ୍, ଟ୍ରିପ୍ସିନ୍ ଏବଂ α-କାଇମୋଟ୍ରିପ୍ସିନ୍ ରେ ନାନୋପାର୍ଟିକଲ୍ ସାହାଯ୍ୟରେ, ଯଥାକ୍ରମେ 50%, 60%, ଏବଂ 75% ରୁ ଅଧିକ ଇନସୁଲିନ୍ 4 ଘଣ୍ଟା ମଧ୍ୟରେ ସୁରକ୍ଷିତ କରାଯାଇପାରିବ (ଚିତ୍ର 5a–c)। ଏହା ଇନସୁଲିନ୍-ପ୍ରତିରକ୍ଷା କ୍ଷମତା ରକ୍ତପ୍ରବାହରେ ଅଧିକ ଇନସୁଲିନ୍ ଶୋଷଣର ସମ୍ଭାବନାକୁ ବୃଦ୍ଧି କରିପାରେ25। ଏହି ଫଳାଫଳଗୁଡ଼ିକ ସୂଚାଇ ଦିଏ ଯେ ମାନିଟୋଲ ସହିତ କିମ୍ବା ବିନା ସ୍ପ୍ରେ ଶୁଖାଇବା ଏବଂ ମାନିଟୋଲ ସହିତ ଫ୍ରିଜ୍-ଶୁଖାଇବା ଦ୍ୱାରା ଡିହାଇଡ୍ରେସନ୍ ପରେ NPs ର ଇନସୁଲିନ୍-ପ୍ରତିରକ୍ଷା କ୍ଷମତା ସଂରକ୍ଷିତ ରହିପାରିବ।
ଡିହାଇଡ୍ରେଟେଡ୍ ଇନସୁଲିନ୍ NPs ର ସୁରକ୍ଷା ଏବଂ ମୁକ୍ତି ଆଚରଣ: (କ) ପେପ୍ସିନ୍ ଦ୍ରବଣରେ ଇନସୁଲିନ୍ ର ସୁରକ୍ଷା; (ଖ) ଟ୍ରିପ୍ସିନ୍ ଦ୍ରବଣରେ ଇନସୁଲିନ୍ ର ସୁରକ୍ଷା; (ଗ) α-କାଇମୋଟ୍ରିପ୍ସିନ୍ ଦ୍ରବଣ ଦ୍ୱାରା ଇନସୁଲିନ୍ ର ସୁରକ୍ଷା; (ଘ) pH = 2.5 ଦ୍ରବଣରେ ଡିହାଇଡ୍ରେଟେଡ୍ NPs ର ମୁକ୍ତି ଆଚରଣ; (ଙ) pH = 6.6 ଦ୍ରବଣରେ ଡିହାଇଡ୍ରେଟେଡ୍ NPs ର ମୁକ୍ତି ଆଚରଣ; (ଚ) pH = 7.0 ଦ୍ରବଣରେ ଡିହାଇଡ୍ରେଟେଡ୍ NPs ର ମୁକ୍ତି ଆଚରଣ।
ଇନସୁଲିନ୍ ପ୍ରତିରୋଧ ଉପରେ ଇନସୁଲିନ୍ର ପ୍ରଭାବ ପରୀକ୍ଷା କରିବା ପାଇଁ, ପାକସ୍ଥଳୀ, ଗ୍ରହଣୀ ଏବଂ ଉପର କ୍ଷୁଦ୍ରାନ୍ତ୍ରର pH ପରିବେଶକୁ ଅନୁକରଣ କରି, ସଦ୍ୟ ପ୍ରସ୍ତୁତ ଏବଂ ପୁନଃଗଠିତ ଶୁଷ୍କ ଇନସୁଲିନ୍ NPଗୁଡ଼ିକୁ ୩୭ ଡିଗ୍ରୀ ସେଲସିୟସ୍ ତାପମାତ୍ରାରେ ବିଭିନ୍ନ ବଫରରେ (pH = 2.5, 6.6, 7.0) ଇନକ୍ୟୁବେଟେଡ୍ କରାଯାଇଥିଲା। ବିଭିନ୍ନ ପରିବେଶରେ ମୁକ୍ତି ଆଚରଣ। ପାକସ୍ଥଳୀର ଖଣ୍ଡ। pH = 2.5 ରେ, ଇନସୁଲିନ୍-ଲୋଡେଡ୍ NPs ଏବଂ ରିଜୋଲୁବିଲାଇଜ୍ଡ୍ ଶୁଷ୍କ ଇନସୁଲିନ୍ NPs ପ୍ରଥମ ଗୋଟିଏ ଘଣ୍ଟା ମଧ୍ୟରେ ପ୍ରାରମ୍ଭିକ ବିସ୍ଫୋରଣ ପ୍ରକାଶନ ଦେଖାଇଥିଲେ, ପରବର୍ତ୍ତୀ 5 ଘଣ୍ଟା ମଧ୍ୟରେ ଧୀର ମୁକ୍ତି (ଚିତ୍ର 5d)। ଆରମ୍ଭରେ ଏହି ଦ୍ରୁତ ମୁକ୍ତି ସମ୍ଭବତଃ କଣିକାର ଆଭ୍ୟନ୍ତରୀଣ ଗଠନରେ ସମ୍ପୂର୍ଣ୍ଣ ସ୍ଥିର ନଥିବା ପ୍ରୋଟିନ୍ ଅଣୁଗୁଡ଼ିକର ଦ୍ରୁତ ପୃଷ୍ଠ ଅବଶୋଷଣର ଫଳାଫଳ। pH = 6.5 ରେ, ଇନସୁଲିନ୍-ଲୋଡେଡ୍ NPs ଏବଂ ପୁନଃଗଠିତ ଶୁଷ୍କ ଇନସୁଲିନ୍ NPs 6 ଘଣ୍ଟା ମଧ୍ୟରେ ଏକ ମସୃଣ ଏବଂ ଧୀର ମୁକ୍ତି ଦେଖାଇଥିଲେ, କାରଣ ପରୀକ୍ଷଣ ଦ୍ରବଣର pH NPs-ପ୍ରସ୍ତୁତ ଦ୍ରବଣ (ଚିତ୍ର 5e) ସହିତ ସମାନ ଥିଲା। pH = 7 ରେ, NPs ଅସ୍ଥିର ଥିଲା ଏବଂ ପ୍ରଥମ ଦୁଇ ଘଣ୍ଟା ମଧ୍ୟରେ ପ୍ରାୟ ସମ୍ପୂର୍ଣ୍ଣ ଭାବରେ ବିଘଟିତ ହୋଇଥିଲା (ଚିତ୍ର 5f)। କାରଣ ଚିଟୋସାନର ଡିପ୍ରୋଟୋନେସନ୍ ଅଧିକ pH ରେ ଘଟେ, ଯାହା ଫଳରେ ଏକ କମ୍ କମ୍ପାକ୍ଟ ପଲିମର ନେଟୱାର୍କ ଏବଂ ଲୋଡେଡ୍ ଇନସୁଲିନ୍ ମୁକ୍ତ ହୁଏ।
ଅଧିକନ୍ତୁ, ମାନିଟୋଲ ବିନା ସ୍ପ୍ରେ-ଶୁଷ୍କ ଇନସୁଲିନ୍ NPs ଅନ୍ୟ ଡିହାଇଡ୍ରେଟେଡ୍ NPs ତୁଳନାରେ ଦ୍ରୁତ ମୁକ୍ତି ପ୍ରୋଫାଇଲ୍ ଦେଖାଇଥିଲା (ଚିତ୍ର 5d–f)। ପୂର୍ବରୁ ବର୍ଣ୍ଣିତ ପରି, ମାନିଟୋଲ ବିନା ଶୁଷ୍କ ପୁନଃଗଠିତ ଇନସୁଲିନ୍ NPs ସବୁଠାରୁ କ୍ଷୁଦ୍ରତମ କଣିକା ଆକାର ଦେଖାଇଥିଲା। ଛୋଟ କଣିକାଗୁଡ଼ିକ ଏକ ବଡ଼ ପୃଷ୍ଠ କ୍ଷେତ୍ର ପ୍ରଦାନ କରନ୍ତି, ତେଣୁ ଅଧିକାଂଶ ପ୍ରାସଙ୍ଗିକ ଔଷଧ କଣିକା ପୃଷ୍ଠରେ କିମ୍ବା ନିକଟରେ ରହିବ, ଯାହା ଫଳରେ ଦ୍ରୁତ ଔଷଧ ମୁକ୍ତି ହେବ26।
NPsର ସାଇଟୋଟକ୍ସିସିଟି MTT ପରୀକ୍ଷା ଦ୍ୱାରା ତଦନ୍ତ କରାଯାଇଥିଲା। ଚିତ୍ର S4 ରେ ଦେଖାଯାଇଥିବା ପରି, ସମସ୍ତ ଡିହାଇଡ୍ରେଟେଡ୍ NPs 50-500 μg/ml ସାନ୍ଦ୍ରତାରେ କୋଷ କାର୍ଯ୍ୟକ୍ଷମତା ଉପରେ କୌଣସି ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ପ୍ରଭାବ ପକାଇନଥିବା ଜଣାପଡିଛି, ଯାହା ସୂଚାଇ ଦିଏ ଯେ ସମସ୍ତ ଡିହାଇଡ୍ରେଟେଡ୍ NPs ନିରାପଦ ଭାବରେ ଚିକିତ୍ସା ୱିଣ୍ଡୋରେ ପହଞ୍ଚିବା ପାଇଁ ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇପାରିବ।
ଯକୃତ ହେଉଛି ମୁଖ୍ୟ ଅଙ୍ଗ ଯାହା ମାଧ୍ୟମରେ ଇନସୁଲିନ୍ ଏହାର ଶାରୀରିକ କାର୍ଯ୍ୟ କରିଥାଏ। HepG2 କୋଷଗୁଡ଼ିକ ଏକ ମାନବ ହେପାଟୋମା କୋଷ ରେଖା ଯାହାକୁ ସାଧାରଣତଃ ଇନ ଭିଟ୍ରୋ ହେପାଟୋସାଇଟ୍ ଅପ୍ଟେକ୍ ମଡେଲ୍ ଭାବରେ ବ୍ୟବହାର କରାଯାଏ। ଏଠାରେ, ଫ୍ରିଜ୍-ଡ୍ରାଇଂ ଏବଂ ସ୍ପ୍ରେ-ଡ୍ରାଇଂ ପଦ୍ଧତି ବ୍ୟବହାର କରି ଡିହାଇଡ୍ରେଟେଡ୍ NPs ର ସେଲ୍ୟୁଲାର୍ ଅପ୍ଟେକ୍ ମୂଲ୍ୟାଙ୍କନ କରିବା ପାଇଁ HepG2 କୋଷଗୁଡ଼ିକୁ ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇଥିଲା। 25 μg/mL ସାନ୍ଦ୍ରତାରେ ମାଗଣା FITC ଇନସୁଲିନ୍ ସହିତ କିଛି ଘଣ୍ଟା ଇନକ୍ୟୁବେସନ୍ ପରେ ପ୍ରବାହ ସାଇଟୋମେଟ୍ରି ଏବଂ ଦୃଷ୍ଟି ବ୍ୟବହାର କରି କନଫୋକାଲ୍ ଲେଜର ସ୍କାନିଂ ଦ୍ୱାରା ସେଲ୍ୟୁଲାର୍ ଅପ୍ଟେକ୍, ସଦ୍ୟ ପ୍ରସ୍ତୁତ FITC ଇନସୁଲିନ୍-ଲୋଡେଡ୍ NPs ଏବଂ ସମାନ ଇନସୁଲିନ୍ ସାନ୍ଦ୍ରତାରେ ଡିହାଇଡ୍ରେଟେଡ୍ FITC ଇନସୁଲିନ୍-ଲୋଡେଡ୍ NPs କ୍ୱାଣ୍ଟିଟେଟିଭ୍ ମାଇକ୍ରୋସ୍କୋପି (CLSM) ପର୍ଯ୍ୟବେକ୍ଷଣ କରାଯାଇଥିଲା। ଡିହାଇଡ୍ରେଟେଡ୍ ସମୟରେ ମାନିଟୋଲ୍ ବିନା ଲାଇଓଫିଲାଇଜ୍ଡ୍ NPs ନଷ୍ଟ ହୋଇଯାଇଥିଲା ଏବଂ ଏହି ପରୀକ୍ଷାରେ ମୂଲ୍ୟାଙ୍କନ କରାଯାଇନଥିଲା। ସଦ୍ୟ ପ୍ରସ୍ତୁତ ଇନସୁଲିନ୍-ଲୋଡେଡ୍ NPs, ମାନିଟୋଲ୍ ସହିତ ଲାଇଓଫିଲାଇଜ୍ଡ୍ NPs, ଏବଂ ମାନିଟୋଲ୍ ସହିତ ଏବଂ ବିନା ସ୍ପ୍ରେ-ଡ୍ରାଇଡ୍ NPs (ଚିତ୍ର 6a) ର ଆଣ୍ଟେରାସେଲୁଲାର୍ ଫ୍ଲୋରୋସେନ୍ସ ତୀବ୍ରତା 4.3, 2.6, 2.4, ଏବଂ 4.1 ଗୁଣ ଅଧିକ। FITC-ଇନସୁଲିନ୍ ଗୋଷ୍ଠୀ, ଯଥାକ୍ରମେ (ଚିତ୍ର 6b)। ଏହି ଫଳାଫଳଗୁଡ଼ିକ ସୂଚାଇ ଦିଏ ଯେ ଏନକ୍ୟାପସୁଲେଟେଡ୍ ଇନସୁଲିନ୍ ମାଗଣା ଇନସୁଲିନ୍ ଅପେକ୍ଷା କୋଷୀୟ ଗ୍ରହଣରେ ଅଧିକ ଶକ୍ତିଶାଳୀ, ମୁଖ୍ୟତଃ ଅଧ୍ୟୟନରେ ଉତ୍ପାଦିତ ଇନସୁଲିନ୍-ଲୋଡେଡ୍ ନାନୋପାର୍ଟିକଲ୍ସର ଛୋଟ ଆକାର ଯୋଗୁଁ।
ସଦ୍ୟ ପ୍ରସ୍ତୁତ NP ଏବଂ ଡିହାଇଡ୍ରେଟେଡ୍ NP ସହିତ 4 ଘଣ୍ଟା ଇନକ୍ୟୁବେସନ୍ ପରେ HepG2 କୋଷ ଗ୍ରହଣ: (a) HepG2 କୋଷ ଦ୍ୱାରା FITC-ଇନସୁଲିନ୍ ଗ୍ରହଣର ବଣ୍ଟନ। (b) ଫ୍ଲୋ ସାଇଟୋମେଟ୍ରି ଦ୍ୱାରା ବିଶ୍ଳେଷଣ କରାଯାଇଥିବା ଫ୍ଲୋରୋସେନ୍ସ ତୀବ୍ରତାର ଜ୍ୟାମିତିକ ମଧ୍ୟମା (n = 3), *P < 0.05 ମାଗଣା ଇନସୁଲିନ୍ ସହିତ ତୁଳନା।
ସେହିପରି, CLSM ଚିତ୍ରଗୁଡ଼ିକ ଦର୍ଶାଇଛି ଯେ ସଦ୍ୟ ପ୍ରସ୍ତୁତ FITC-ଇନସୁଲିନ୍-ଲୋଡେଡ୍ NPs ଏବଂ FITC-ଇନସୁଲିନ୍-ଲୋଡେଡ୍ ସ୍ପ୍ରେ-ଡ୍ରାଏଡ୍ NPs (ମାନିଟୋଲ୍ ବିନା) ର FITC ଫ୍ଲୋରୋସେନ୍ସ ତୀବ୍ରତା ଅନ୍ୟ ନମୁନା ଅପେକ୍ଷା ବହୁତ ଶକ୍ତିଶାଳୀ ଥିଲା (ଚିତ୍ର 6a)। ଏହା ବ୍ୟତୀତ, ମାନିଟୋଲ୍ ଯୋଗ ସହିତ, ଦ୍ରବଣର ଉଚ୍ଚ ସାନ୍ଦ୍ରତା କୋଷୀୟ ଗ୍ରହଣ ପ୍ରତିରୋଧକୁ ବୃଦ୍ଧି କରିଥିଲା, ଯାହା ଫଳରେ ଇନସୁଲିନ୍ ପ୍ରସାର ହ୍ରାସ ପାଇଥିଲା। ଏହି ଫଳାଫଳଗୁଡ଼ିକ ସୂଚାଇ ଦିଏ ଯେ ମାନିଟୋଲ୍-ମୁକ୍ତ ସ୍ପ୍ରେ-ଡ୍ରାଏଡ୍ NPs ସର୍ବାଧିକ କୋଷୀୟ ଗ୍ରହଣ ଦକ୍ଷତା ପ୍ରଦର୍ଶନ କରିଥିଲା ​​କାରଣ ପୁନଃ ଦ୍ରବୀଭୂତ ହେବା ପରେ ସେମାନଙ୍କର କଣିକା ଆକାର ଫ୍ରିଜ୍-ଡ୍ରାଏଡ୍ NPs ତୁଳନାରେ ଛୋଟ ଥିଲା।
ଚିଟୋସାନ (ହାରାହାରି ଆଣବିକ ଓଜନ 100 KDa, 75–85% ଡିଆସିଟାଇଲେଟେଡ୍) ସିଗମା-ଆଲଡ୍ରିଚ୍ (ଓକଭିଲ୍, ଅଣ୍ଟାରିୟୋ, କାନାଡା) ରୁ କିଣାଯାଇଥିଲା। ସୋଡିୟମ୍ ଟ୍ରାଇପଲିଫସଫେଟ୍ (TPP) VWR (ରାଡନର୍, ପେନସିଲଭାନିଆ, ଆମେରିକା) ରୁ କିଣାଯାଇଥିଲା। ଏହି ଅଧ୍ୟୟନରେ ବ୍ୟବହୃତ ପୁନଃସଂଯୋଜିତ ମାନବ ଇନସୁଲିନ୍ ଫିଶର୍ ସାଇଣ୍ଟିଫିକ୍ (ୱାଲଥାମ୍, MA, ଆମେରିକା) ରୁ ଥିଲା। ଫ୍ଲୋରେସିନ୍ ଆଇସୋଥିଓସାଇନାଟ୍ (FITC)-ଲେବଲ୍ ହୋଇଥିବା ମାନବ ଇନସୁଲିନ୍ ଏବଂ 4′,6-ଡାୟାମିଡିନୋ-2-ଫେନାଇଲିଣ୍ଡୋଲ୍ ଡାଇହାଇଡ୍ରୋକ୍ଲୋରାଇଡ୍ (DAPI) ସିଗମା-ଆଲଡ୍ରିଚ୍ (ଓକଭିଲ୍, ଅଣ୍ଟାରିୟୋ, କାନାଡା) ରୁ କିଣାଯାଇଥିଲା। HepG2 କୋଷ ଲାଇନ ATCC (ମାନାସାସ, ଭର୍ଜିନିଆ, ଆମେରିକା) ରୁ ପ୍ରାପ୍ତ ହୋଇଥିଲା। ଅନ୍ୟ ସମସ୍ତ ରିଏଜେଣ୍ଟ ବିଶ୍ଳେଷଣାତ୍ମକ କିମ୍ବା କ୍ରୋମାଟୋଗ୍ରାଫିକ୍ ଗ୍ରେଡ୍ ଥିଲା।
0.1% ଆସେଟିକ୍ ଏସିଡ୍ ଥିବା ଡବଲ୍ ଡିଷ୍ଟିଲ୍ ଡ ପାଣି (DD ପାଣି)ରେ ଦ୍ରବୀଭୂତ କରି 1 mg/ml CS ଦ୍ରବୀଭୂତ ପ୍ରସ୍ତୁତ କରନ୍ତୁ। TPP ଏବଂ ଇନସୁଲିନ୍ ର 1 mg/ml ଦ୍ରବୀଭୂତ କରି ଯଥାକ୍ରମେ DD ପାଣି ଏବଂ 0.1% ଆସେଟିକ୍ ଏସିଡ୍ ରେ ଦ୍ରବୀଭୂତ କରି ପ୍ରସ୍ତୁତ କରନ୍ତୁ। ପ୍ରି-ଏମଲସନ୍ ଏକ ପଲିଟ୍ରନ୍ PCU-2-110 ହାଇ ସ୍ପିଡ୍ ହୋମୋଜେନାଇଜର୍ (ବ୍ରିଙ୍କମ୍ୟାନ୍ ଇଣ୍ଡଷ୍ଟ୍ରିଜ୍ ୱେଷ୍ଟବରୀ, NY, USA) ସହିତ ପ୍ରସ୍ତୁତ କରାଯାଇଥିଲା। ପ୍ରସ୍ତୁତି ପ୍ରକ୍ରିୟା ନିମ୍ନଲିଖିତ: ପ୍ରଥମେ, 2ml TPP ଦ୍ରବୀଭୂତ କରି 4ml ଇନସୁଲିନ୍ ଦ୍ରବୀଭୂତ କରି ମିଶ୍ରିତ ଦ୍ରବୀଭୂତ କରି 4ml ଇନସୁଲିନ୍ ଦ୍ରବୀଭୂତ କରି ମିଶ୍ରିତ ଦ୍ରବୀଭୂତ କରି 30 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ ଘାଣ୍ଟାଇ ଦିଆଯାଇ ସମ୍ପୂର୍ଣ୍ଣ ମିଶ୍ରିତ କରାଯାଏ। ତା'ପରେ, ମିଶ୍ରିତ ଦ୍ରବୀଭୂତକୁ ହାଇ-ସ୍ପିଡ୍ ଷ୍ଟିରିଂ (10,000 rpm) ଅଧୀନରେ ଏକ ସିରିଞ୍ଜ ମାଧ୍ୟମରେ CS ଦ୍ରବୀଭୂତ କରି ଡ୍ରପ୍ ୱାଇଜ୍ କରି CS ଦ୍ରବୀଭୂତ କରି 30 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ ଏକ ବରଫ ସ୍ନାନରେ ରଖାଯାଇଥିଲା, ଏବଂ କ୍ରସ୍-ଲିଙ୍କ୍ଡ୍ ଇନସୁଲିନ୍ NP ପାଇବା ପାଇଁ ସେମାନଙ୍କୁ ଏକ ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ pH ରେ ଆଡଜଷ୍ଟ କରାଯାଇଥିଲା। ଇନସୁଲିନ୍ ର କଣିକା ଆକାରକୁ ଆହୁରି ସମନ୍ୱିତ କରିବା ଏବଂ ହ୍ରାସ କରିବା ପାଇଁ। NPs, ସେମାନଙ୍କୁ ଏକ ପ୍ରୋବ୍-ଟାଇପ୍ ସୋନିକେଟର (UP 200ST, Hielscher Ultrasonics, Teltow, Germany) ବ୍ୟବହାର କରି ଏକ ବରଫ ବାଥରେ ଅତିରିକ୍ତ 30 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ ସୋନିକେଟ କରାଯାଇଥିଲା।
ଇନସୁଲିନ୍ NPS କୁ 25°C ରେ DD ପାଣିରେ ଡିଲ୍ୟୁଇଟ୍ କରି ଲିଟାଇଜର୍ 500 (ଆଣ୍ଟନ୍ ପାର, ଗ୍ରାଜ୍, ଅଷ୍ଟ୍ରିଆ) ବ୍ୟବହାର କରି ଗତିଶୀଳ ଆଲୋକ ବିଚ୍ଛିନ୍ନ (DLS) ମାପ ବ୍ୟବହାର କରି Z-ହାରାହାରି ବ୍ୟାସ, ପଲିଡିସପର୍ସିଟି ଇଣ୍ଡେକ୍ସ (PDI) ଏବଂ ଜେଟା ପୋଟେନସିଆଲ୍ ପାଇଁ ପରୀକ୍ଷା କରାଯାଇଥିଲା। ହିଟାଚି H7600 ଟ୍ରାନ୍ସମିସନ୍ ଇଲେକ୍ଟ୍ରୋନ୍ ମାଇକ୍ରୋସ୍କୋପ୍ (TEM) (ହିଟାଚି, ଟୋକିଓ, ଜାପାନ) ଦ୍ୱାରା ରୂପ ବିଜ୍ଞାନ ଏବଂ ଆକାର ବଣ୍ଟନକୁ ବର୍ଣ୍ଣିତ କରାଯାଇଥିଲା, ଏବଂ ପରବର୍ତ୍ତୀ ସମୟରେ ହିଟାଚି ଇମେଜିଂ ସଫ୍ଟୱେର୍ (ହିଟାଚି, ଟୋକିଓ, ଜାପାନ) ବ୍ୟବହାର କରି ପ୍ରତିଛବିଗୁଡ଼ିକୁ ବିଶ୍ଳେଷଣ କରାଯାଇଥିଲା। ଇନସୁଲିନ୍ NPs ର ଏନକ୍ୟାପସୁଲେସନ୍ ଦକ୍ଷତା (EE) ଏବଂ ଲୋଡିଂ କ୍ଷମତା (LC) ମୂଲ୍ୟାଙ୍କନ କରିବା ପାଇଁ, NPs କୁ 100 kDa ର ଆଣବିକ ଓଜନ କଟ୍-ଅଫ୍ ସହିତ ଅଲ୍ଟ୍ରାଫିଲ୍ଟ୍ରେସନ୍ ଟ୍ୟୁବ୍‌ରେ ପାଇପେଟ୍ କରାଯାଇଥିଲା ଏବଂ 30 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ 500 xg ରେ ସେଣ୍ଟ୍ରିଫ୍ୟୁଗ୍ କରାଯାଇଥିଲା। ଫିଲ୍ଟ୍ରେଟ୍ ରେ ଅନଏନକ୍ୟାପସୁଲେଟେଡ୍ ଇନସୁଲିନ୍ କୁ Agilent 1100 Series HPLC ସିଷ୍ଟମ୍ (Agilent, Santa Clara, କାଲିଫର୍ନିଆ, USA) ବ୍ୟବହାର କରି ପରିମାଣ କରାଯାଇଥିଲା। କ୍ୱାଟର୍ଣ୍ଣାରୀ ପମ୍ପ, ଅଟୋସାମ୍ପଲର, କଲମ ହିଟର, ଏବଂ DAD ଡିଟେକ୍ଟର। ଇନସୁଲିନ୍ କୁ C18 ସ୍ତମ୍ଭ (ଜୋରବାକ୍ସ, 3.5 μm, 4.6 mm × 150 mm, Agilent, USA) ଦ୍ୱାରା ବିଶ୍ଳେଷଣ କରାଯାଇଥିଲା ଏବଂ 214 nm ରେ ଚିହ୍ନଟ କରାଯାଇଥିଲା। ମୋବାଇଲ୍ ପର୍ଯ୍ୟାୟଟି ଆସେଟୋନିଟ୍ରାଇଲ୍ ଏବଂ ପାଣି ଥିଲା, ଯେଉଁଥିରେ 0.1% TFA ଥିଲା, ଗ୍ରେଡିଏଣ୍ଟ ଅନୁପାତ 10/90 ରୁ 100/0 ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ ଥିଲା, ଏବଂ 10 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ ଚାଲିଥିଲା। ମୋବାଇଲ୍ ପର୍ଯ୍ୟାୟଟି 1.0 ମିଲି/ମିନିଟ୍ ପ୍ରବାହ ହାରରେ ପମ୍ପ କରାଯାଇଥିଲା। କଲମ ତାପମାତ୍ରା 20 °C ରେ ସେଟ୍ କରାଯାଇଥିଲା। ସମୀକରଣ ବ୍ୟବହାର କରି EE ଏବଂ LC ର ପ୍ରତିଶତ ଗଣନା କରନ୍ତୁ। (1) ଏବଂ ସମୀକରଣ (2)।
ଇନସୁଲିନ୍ NP କୁ ଅପ୍ଟିମାଇଜ୍ କରିବା ପାଇଁ 2.0 ରୁ 4.0 ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ ବିଭିନ୍ନ CS/ଇନସୁଲିନ୍ ଅନୁପାତ ପରୀକ୍ଷଣ କରାଯାଇଥିଲା। ପ୍ରସ୍ତୁତି ସମୟରେ ବିଭିନ୍ନ ପରିମାଣର CS ଦ୍ରବଣ ଯୋଡା ଯାଇଥିଲା, ଯେତେବେଳେ ଇନସୁଲିନ୍/TPP ମିଶ୍ରଣକୁ ସ୍ଥିର ରଖାଯାଇଥିଲା। ସମସ୍ତ ଦ୍ରବଣ (ଇନସୁଲିନ୍, TPP ଏବଂ CS) ଯୋଡିବା ପରେ ମିଶ୍ରଣର pH କୁ ସତର୍କତାର ସହିତ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ କରି ଇନସୁଲିନ୍ NP ଗୁଡିକୁ 4.0 ରୁ 6.5 pH ପରିସର ମଧ୍ୟରେ ପ୍ରସ୍ତୁତ କରାଯାଇଥିଲା। ଇନସୁଲିନ୍ NP ଗଠନକୁ ଅପ୍ଟିମାଇଜ୍ କରିବା ପାଇଁ ଇନସୁଲିନ୍ ନାନୋପାର୍ଟିକଲ୍ସର EE ଏବଂ କଣିକା ଆକାରକୁ ବିଭିନ୍ନ pH ମୂଲ୍ୟ ଏବଂ CS/ଇନସୁଲିନ୍ ମାସ୍ ଅନୁପାତରେ ମୂଲ୍ୟାଙ୍କନ କରାଯାଇଥିଲା।
ଅପ୍ଟିମାଇଜ୍ ହୋଇଥିବା ଇନସୁଲିନ୍ NPଗୁଡ଼ିକୁ ଆଲୁମିନିୟମ୍ ପାତ୍ରରେ ରଖାଯାଇଥିଲା ଏବଂ କିଛି ଟେପ୍ ସହିତ କଡ଼ା ଟିସୁ ସହିତ ଆଚ୍ଛାଦିତ କରାଯାଇଥିଲା। ପରବର୍ତ୍ତୀ ସମୟରେ, ସ୍କ୍ରୁଡ୍ ହୋଇଥିବା ପାତ୍ରଗୁଡ଼ିକୁ ଏକ ଟ୍ରେ ଡ୍ରାୟର୍ ସହିତ ସଜ୍ଜିତ ଏକ Labconco FreeZone ଫ୍ରିଜ୍ ଡ୍ରାୟର୍ (Labconco, Kansas City, MO, USA) ରେ ରଖାଯାଇଥିଲା। ଶୁଷ୍କ ଇନସୁଲିନ୍ NP ପାଇବା ପାଇଁ ତାପମାତ୍ରା ଏବଂ ଭାକ୍ୟୁମ୍ ଚାପ -10 °C, ପ୍ରଥମ 2 ଘଣ୍ଟା ପାଇଁ 0.350 Torr, ଏବଂ 24 ଘଣ୍ଟାର ଅବଶିଷ୍ଟ 22 ଘଣ୍ଟା ପାଇଁ 0 °C ଏବଂ 0.120 Torr ରେ ସେଟ୍ କରାଯାଇଥିଲା।
ବୁଚି ମିନି ସ୍ପ୍ରେ ଡ୍ରାୟର B-290 (BÜCHI, ଫ୍ଲାୱିଲ୍, ସ୍ୱିଜରଲ୍ୟାଣ୍ଡ) ଏନକ୍ୟାପସୁଲେଟେଡ୍ ଇନସୁଲିନ୍ ଉତ୍ପାଦନ କରିବା ପାଇଁ ବ୍ୟବହୃତ ହୋଇଥିଲା। ଚୟନିତ ଶୁଖାଇବା ପାରାମିଟରଗୁଡ଼ିକ ଥିଲା: ତାପମାତ୍ରା 100 °C, ଫିଡ୍ ପ୍ରବାହ 3 ଲି/ମିନିଟ୍, ଏବଂ ଗ୍ୟାସ ପ୍ରବାହ 4 ଲି/ମିନିଟ୍।
ଡିହାଇଡ୍ରେସନ୍ ପୂର୍ବରୁ ଏବଂ ପରେ ଇନସୁଲିନ୍ NPଗୁଡ଼ିକୁ FTIR-ATR ସ୍ପେକ୍ଟ୍ରୋସ୍କୋପି ବ୍ୟବହାର କରି ବର୍ଣ୍ଣିତ କରାଯାଇଥିଲା। ଡିହାଇଡ୍ରେଟେଡ୍ ନାନୋପାର୍ଟିକାଲ୍ସ ଏବଂ ମାଗଣା ଇନସୁଲିନ୍ ଏବଂ ଚିଟୋସାନ୍ କୁ ଏକ ସାର୍ବଜନୀନ ATR ନମୁନା ଆସେସୋରୀ (ପର୍କିନ୍ଏଲମର, ୱାଲଥାମ୍, ମାସାଚୁସେଟ୍ସ, ଆମେରିକା) ସହିତ ସଜ୍ଜିତ ଏକ ସ୍ପେକ୍ଟ୍ରମ 100 FTIR ସ୍ପେକ୍ଟ୍ରୋଫୋଟୋମିଟର (ପର୍କିନ୍ଏଲମର, ୱାଲଥାମ୍, ମାସାଚୁସେଟ୍ସ, ଆମେରିକା) ବ୍ୟବହାର କରି ବିଶ୍ଳେଷଣ କରାଯାଇଥିଲା। 4000-600 cm2 ଫ୍ରିକ୍ୱେନ୍ସି ରେଞ୍ଜରେ 4 cm2 ରିଜୋଲ୍ୟୁସନରେ 16 ଟି ସ୍କାନରୁ ସିଗନାଲ୍ ହାରାହାରି ପ୍ରାପ୍ତ କରାଯାଇଥିଲା।
Helios NanoLab 650 ଫୋକସଡ୍ ଆୟନ୍ ବିମ୍-ସ୍କାନିଂ ଇଲେକ୍ଟ୍ରୋନ୍ ମାଇକ୍ରୋସ୍କୋପ୍ (FIB-SEM) (FEI, ହିଲ୍ସବୋରୋ, ଓରେଗନ୍, USA) ଦ୍ୱାରା କଏଦ କରାଯାଇଥିବା ଫ୍ରିଜ୍-ଡ୍ରାଇଡ୍ ଏବଂ ସ୍ପ୍ରେ-ଡ୍ରାଇଡ୍ ଇନସୁଲିନ୍ NPsର SEM ପ୍ରତିଛବି ଦ୍ୱାରା ଶୁଷ୍କ ଇନସୁଲିନ୍ NPsର ରୂପ ବିଜ୍ଞାନ ମୂଲ୍ୟାଙ୍କନ କରାଯାଇଥିଲା। ବ୍ୟବହୃତ ମୁଖ୍ୟ ପାରାମିଟର ଥିଲା ଭୋଲଟେଜ୍ 5 keV ଏବଂ କରେଣ୍ଟ 30 mA।
ସମସ୍ତ ଡିହାଇଡ୍ରେଟେଡ୍ ଇନସୁଲିନ୍ NPଗୁଡ଼ିକୁ dd ପାଣିରେ ପୁନଃ ଦ୍ରବୀଭୂତ କରାଯାଇଥିଲା। ଡିହାଇଡ୍ରେଟେଡ୍ ପରେ ସେମାନଙ୍କର ଗୁଣବତ୍ତା ମୂଲ୍ୟାଙ୍କନ କରିବା ପାଇଁ ପୂର୍ବରୁ ଉଲ୍ଲେଖ କରାଯାଇଥିବା ସମାନ ପଦ୍ଧତି ବ୍ୟବହାର କରି କଣା ଆକାର, PDI, EE ଏବଂ LC ପୁନର୍ବାର ପରୀକ୍ଷା କରାଯାଇଥିଲା। ଦୀର୍ଘ ସମୟ ଧରି ସଂରକ୍ଷଣ ପରେ NPଗୁଡ଼ିକର ଗୁଣବତ୍ତା ପରୀକ୍ଷା କରି ଆନହାଇଡ୍ରୋଇନସୁଲିନ୍ NPଗୁଡ଼ିକର ସ୍ଥିରତା ମଧ୍ୟ ମାପ କରାଯାଇଥିଲା। ଏହି ଅଧ୍ୟୟନରେ, ଡିହାଇଡ୍ରେଟେଡ୍ ପରେ ସମସ୍ତ NPଗୁଡ଼ିକୁ ତିନି ମାସ ପାଇଁ ରେଫ୍ରିଜରେଟରରେ ସଂରକ୍ଷଣ କରାଯାଇଥିଲା। ତିନି ମାସ ସଂରକ୍ଷଣ ପରେ, NPଗୁଡ଼ିକୁ ଆକୃତିଗତ କଣିକା ଆକାର, PDI, EE ଏବଂ LC ପାଇଁ ପରୀକ୍ଷା କରାଯାଇଥିଲା।
ଡିହାଇଡ୍ରେସନ ପରେ NP ଗୁଡିକୁ ସୁରକ୍ଷା ଦେବାରେ ଇନସୁଲିନର ପ୍ରଭାବ ମୂଲ୍ୟାଙ୍କନ କରିବା ପାଇଁ ସିମୁଲେଟେଡ୍ ଗ୍ୟାଷ୍ଟ୍ରିକ୍ ତରଳ (pH 1.2, 1% ପେପ୍ସିନ୍ ଧାରଣ କରୁଥିବା), ଅନ୍ତନଳୀ ତରଳ (pH 6.8, 1% ଟ୍ରିପ୍ସିନ୍ ଧାରଣ କରୁଥିବା) କିମ୍ବା କାଇମୋଟ୍ରିପ୍ସିନ୍ ଦ୍ରବଣ (100 g/mL, ଫସଫେଟ୍ ବଫରରେ, pH 7.8) ଯୁକ୍ତ 45 mL ରେ 5 mL ପୁନଃଗଠିତ NP ଗୁଡିକୁ ଦ୍ରବଣ କରନ୍ତୁ। ସେଗୁଡ଼ିକୁ 100 rpm ର ଆନ୍ଦୋଳନ ଗତି ସହିତ 37°C ରେ ଇନକ୍ୟୁବେଟେଡ୍ କରାଯାଇଥିଲା। ବିଭିନ୍ନ ସମୟରେ 500 μL ଦ୍ରବଣ ସଂଗ୍ରହ କରାଯାଇଥିଲା ଏବଂ HPLC ଦ୍ୱାରା ଇନସୁଲିନ୍ ସାନ୍ଦ୍ରତା ନିର୍ଣ୍ଣୟ କରାଯାଇଥିଲା।
ଡାଏଲିସିସ୍ ବ୍ୟାଗ୍ ପଦ୍ଧତି (ଆଣବିକ ଓଜନ କଟ୍-ଅଫ୍ 100 kDa, ସ୍ପେକ୍ଟ୍ରା ପୋର୍ ଇନକର୍ପୋରେଟେଡ୍) ଦ୍ୱାରା ସଦ୍ୟ ପ୍ରସ୍ତୁତ ଏବଂ ଡିହାଇଡ୍ରେଟେଡ୍ ଇନସୁଲିନ୍ NP ଗୁଡ଼ିକର ଇନ ଭିଟ୍ରୋ ରିଲିଜ୍ ଆଚରଣ ପରୀକ୍ଷା କରାଯାଇଥିଲା। ପାକସ୍ଥଳୀ, ଡୁଓଡେନମ୍ ଏବଂ ଉପର କ୍ଷୁଦ୍ରାନ୍ତ୍ରର pH ପରିବେଶକୁ ଅନୁକରଣ କରିବା ପାଇଁ ସଦ୍ୟ ପ୍ରସ୍ତୁତ ଏବଂ ପୁନଃଗଠିତ ଶୁଷ୍କ NP ଗୁଡ଼ିକୁ ଯଥାକ୍ରମେ pH 2.5, pH 6.6, ଏବଂ pH 7.0 (0.1 M ଫସଫେଟ୍-ବଫର୍ଡ୍ ସାଲାଇନ୍, PBS) ରେ ତରଳ ପଦାର୍ଥରେ ଡାଏଲାଇଜ୍ କରାଯାଇଥିଲା। ସମସ୍ତ ନମୁନାଗୁଡ଼ିକୁ 200 rpm ରେ ନିରନ୍ତର ହଲାଇବା ସହିତ 37 °C ରେ ଇନକ୍ୟୁବେଟେଡ୍ କରାଯାଇଥିଲା। ନିମ୍ନଲିଖିତ ସମୟରେ 5 mL ଡାଏଲିସିସ୍ ବ୍ୟାଗ୍ ବାହାରେ ତରଳ ପଦାର୍ଥକୁ ଆସ୍ପିରେଟ୍ କରନ୍ତୁ: 0.5, 1, 2, 3, 4, ଏବଂ 6 ଘଣ୍ଟା, ଏବଂ ତୁରନ୍ତ ତାଜା ଡାଏଲିସେଟ୍ ସହିତ ପରିମାଣକୁ ପୂରଣ କରନ୍ତୁ। HPLC ଦ୍ୱାରା ତରଳ ପଦାର୍ଥରେ ଇନସୁଲିନ୍ ପ୍ରଦୂଷଣ ବିଶ୍ଳେଷଣ କରାଯାଇଥିଲା, ଏବଂ ନାନୋପାର୍ଟିକଲ୍ସରୁ ଇନସୁଲିନ୍ ମୁକ୍ତ ଇନସୁଲିନ୍ ମୁକ୍ତ ଇନସୁଲିନ୍ ସହିତ ମୁକ୍ତ ଇନସୁଲିନ୍ ଅନୁପାତରୁ ଗଣନା କରାଯାଇଥିଲା ନାନୋପାର୍ଟିକଲ୍ସରେ ଏନକ୍ୟାପସୁଲେଟ୍ ହୋଇଥିବା ମୋଟ ଇନସୁଲିନ୍ (ସମୀକରଣ 3) ରୁ।
ମାନବ ହେପାଟୋସେଲୁଲାର କର୍ସିନୋମା କୋଷ ଲାଇନ୍ HepG2 କୋଷଗୁଡ଼ିକୁ 60 ମିମି ବ୍ୟାସ ପାତ୍ରରେ ଡଲବେକୋର ମଡିଫାଏଡ୍ ଇଗଲ୍ସ ମିଡିୟମ୍ (DMEM) ବ୍ୟବହାର କରି ବୃଦ୍ଧି କରାଯାଇଥିଲା ଯେଉଁଥିରେ 10% ଭ୍ରୁଣ ବୋଭାଇନ୍ ସେରମ୍, 100 IU/mL ପେନିସିଲିନ୍ ଏବଂ 100 μg/mL ଷ୍ଟ୍ରେପ୍ଟୋମାଇସିନ୍ ଥିଲା। ସଂସ୍କୃତିଗୁଡ଼ିକୁ 37°C, 95% ଆପେକ୍ଷିକ ଆର୍ଦ୍ରତା ଏବଂ 5% CO2 ରେ ରଖା ଯାଇଥିଲା। ଅପ୍ଟେକ୍ ପରୀକ୍ଷା ପାଇଁ, HepG2 କୋଷଗୁଡ଼ିକୁ 1 × 105 କୋଷ/ml ରେ ଏକ 8-ୱେଲ୍ ନନ୍କ୍ ଲ୍ୟାବ୍-ଟେକ୍ ଚାମ୍ବର ସ୍ଲାଇଡ୍ ସିଷ୍ଟମରେ (ଥର୍ମୋ ଫିସର, NY, USA) ବିହନ କରାଯାଇଥିଲା। ସାଇଟୋଟକ୍ସିସିଟି ପରୀକ୍ଷା ପାଇଁ, ସେମାନଙ୍କୁ 5 × 104 କୋଷ/ml ଘନତାରେ 96-ୱେଲ୍ ପ୍ଲେଟ୍ (କର୍ଣ୍ଣିଂ, NY, USA) ରେ ବିହନ କରାଯାଇଥିଲା।
ସଦ୍ୟ ପ୍ରସ୍ତୁତ ଏବଂ ଡିହାଇଡ୍ରେଟେଡ୍ ଇନସୁଲିନ୍ NPs30 ର ସାଇଟୋଟକ୍ସିସିଟି ମୂଲ୍ୟାଙ୍କନ ପାଇଁ MTT ପରୀକ୍ଷା ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇଥିଲା। HepG2 କୋଷଗୁଡ଼ିକୁ 5 × 104 କୋଷ/mL ଘନତାରେ 96-କୂପ ପ୍ଲେଟରେ ବିହନ କରାଯାଇଥିଲା ଏବଂ ପରୀକ୍ଷା ପୂର୍ବରୁ 7 ଦିନ ପାଇଁ କଲଚର କରାଯାଇଥିଲା। ଇନସୁଲିନ୍ NPଗୁଡ଼ିକୁ କଲଚର ମାଧ୍ୟମରେ ବିଭିନ୍ନ ସାନ୍ଦ୍ରତା (50 ରୁ 500 μg/mL) ରେ ପତଳା କରାଯାଇଥିଲା ଏବଂ ତା'ପରେ କୋଷଗୁଡ଼ିକୁ ଦିଆଯାଇଥିଲା। 24 ଘଣ୍ଟା ଇନକ୍ୟୁବେସନ୍ ପରେ, କୋଷଗୁଡ଼ିକୁ PBS ସହିତ 3 ଥର ଧୋଇ ଦିଆଯାଇଥିଲା ଏବଂ 0.5 mg/ml MTT ଧାରଣ କରିଥିବା ମାଧ୍ୟମ ସହିତ ଅତିରିକ୍ତ 4 ଘଣ୍ଟା ପାଇଁ ଇନକ୍ୟୁବେଟ୍ କରାଯାଇଥିଲା। ଟେକାନ୍ ଇନଫିନିଟ୍ M200 ପ୍ରୋ ସ୍ପେକ୍ଟ୍ରୋଫୋଟୋମିଟର୍ ପ୍ଲେଟ୍ ରିଡର (ଟେକାନ୍, ମାନେଡର୍ଫ, ସ୍ୱିଜରଲ୍ୟାଣ୍ଡ) ବ୍ୟବହାର କରି 570 nm ରେ ହଳଦିଆ ଟେଟ୍ରାଜୋଲିୟମ୍ MTT ର ବାଇଗଣି ଫର୍ମାଜାନକୁ ଏନଜାଇମାଟିକ୍ ହ୍ରାସ ମାପ କରି ସାଇଟୋଟକ୍ସିସିଟି ମୂଲ୍ୟାଙ୍କନ କରାଯାଇଥିଲା।
କନଫୋକାଲ୍ ଲେଜର ସ୍କାନିଂ ମାଇକ୍ରୋସ୍କୋପି ଏବଂ ଫ୍ଲୋ ସାଇଟୋମେଟ୍ରି ବିଶ୍ଳେଷଣ ଦ୍ୱାରା NPs ର ସେଲ୍ୟୁଲାର୍ ଅପ୍ଟେକ୍ ଦକ୍ଷତା ପରୀକ୍ଷା କରାଯାଇଥିଲା। Nunc Lab-Tek ଚାମ୍ବର ସ୍ଲାଇଡ୍ ସିଷ୍ଟମର ପ୍ରତ୍ୟେକ କୂପକୁ ମାଗଣା FITC-ଇନସୁଲିନ୍, FITC-ଇନସୁଲିନ୍-ଲୋଡେଡ୍ NPs ସହିତ ଚିକିତ୍ସା କରାଯାଇଥିଲା, ଏବଂ ସମାନ ସାନ୍ଦ୍ରତାରେ 25 μg/mL ଡିହାଇଡ୍ରେଟେଡ୍ FITC-ଇନସୁଲିନ୍ NPs ପୁନଃଗଠିତ କରାଯାଇଥିଲା ଏବଂ 4 ଘଣ୍ଟା ପାଇଁ ଇନକ୍ୟୁବେଟେଡ୍ କରାଯାଇଥିଲା। କୋଷଗୁଡ଼ିକୁ PBS ସହିତ 3 ଥର ଧୋଇ ଦିଆଯାଇଥିଲା ଏବଂ 4% ପାରାଫର୍ମାଲ୍ଡିହାଇଡ୍ ସହିତ ସ୍ଥିର କରାଯାଇଥିଲା। ନ୍ୟୁକ୍ଲିକୁ 4′,6-ଡାୟାମିଡିନୋ-2-ଫିନାଇଲିଣ୍ଡୋଲ୍ (DAPI) ସହିତ ରଙ୍ଗ କରାଯାଇଥିଲା। ଏକ Olympus FV1000 ଲେଜର ସ୍କାନିଂ/ଟୁ-ଫୋଟନ୍ କନଫୋକାଲ୍ ମାଇକ୍ରୋସ୍କୋପ୍ (Olympus, Sinjuku City, Tokyo, Japan) ବ୍ୟବହାର କରି ଇନସୁଲିନ୍ ସ୍ଥାନୀୟକରଣ ପର୍ଯ୍ୟବେକ୍ଷଣ କରାଯାଇଥିଲା। ପ୍ରବାହ ସାଇଟୋମେଟ୍ରି ବିଶ୍ଳେଷଣ ପାଇଁ, 10 μg/mL ମୁକ୍ତ FITC-ଇନସୁଲିନ୍, FITC-ଇନସୁଲିନ୍-ଲୋଡେଡ୍ NPs ଏବଂ ରିଜୋଲୁବିଲାଇଜ୍ଡ୍ ଡିହାଇଡ୍ରେଟେଡ୍ FITC-ଇନସୁଲିନ୍ NPs ର ସମାନ ସାନ୍ଦ୍ରତା ଯୋଡା ଯାଇଥିଲା। 96-କୂପ ପ୍ଲେଟଗୁଡ଼ିକୁ HepG2 କୋଷ ସହିତ ସିଡ୍ କରାଯାଇଥିଲା ଏବଂ 4 ଘଣ୍ଟା ପାଇଁ ଇନକ୍ୟୁବେଟେଡ୍ କରାଯାଇଥିଲା। 4 ଘଣ୍ଟା ଇନକ୍ୟୁବେଟେଡ୍ ପରେ, କୋଷଗୁଡ଼ିକୁ FBS ସହିତ 3 ଥର ଅପସାରିତ କରାଯାଇଥିଲା ଏବଂ ଧୋଇ ଦିଆଯାଇଥିଲା। ପ୍ରତି ନମୁନାରେ 5 × 104 କୋଷଗୁଡ଼ିକୁ BD LSR II ପ୍ରବାହ ସାଇଟୋମିଟର (BD, ଫ୍ରାଙ୍କଲିନ୍ ଲେକ୍ସ, ନ୍ୟୁ ଜର୍ସି, ଯୁକ୍ତରାଷ୍ଟ୍ର) ଦ୍ୱାରା ବିଶ୍ଳେଷଣ କରାଯାଇଥିଲା।
ସମସ୍ତ ମୂଲ୍ୟକୁ ମଧ୍ୟମ ± ମାନକ ବିଚ୍ୟୁତି ଭାବରେ ପ୍ରକାଶ କରାଯାଇଛି। ସମସ୍ତ ଗୋଷ୍ଠୀ ମଧ୍ୟରେ ତୁଳନା ଏକ-ପାଖିଆ ANOVA କିମ୍ବା Mac (IBM, Endicott, New York, USA) ପାଇଁ IBM SPSS Statistics 26 ଦ୍ୱାରା t-test ବ୍ୟବହାର କରି ମୂଲ୍ୟାଙ୍କନ କରାଯାଇଥିଲା ଏବଂ p < 0.05 କୁ ପରିସଂଖ୍ୟାନଗତ ଭାବରେ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ବୋଲି ବିବେଚନା କରାଯାଇଥିଲା।
ଏହି ଅଧ୍ୟୟନ ବଲ୍କିଂ ଏଜେଣ୍ଟ କିମ୍ବା କ୍ରାଇପ୍ରୋଟେକ୍ଟଣ୍ଟ କ୍ଷମତା ଏବଂ ଅଧିକ ଲୋଡ୍ କ୍ଷମତା ବ୍ୟବହାର କରି ମାନକ ଫ୍ରିଜ୍-ଡ୍ରାଇଂ ପଦ୍ଧତି ତୁଳନାରେ ସ୍ପ୍ରେ ଶୁଖାଇବାର ନମନୀୟତା ଏବଂ କ୍ରସ୍-ଲିଙ୍କ୍ଡ୍ ଚିଟୋସାନ୍/TPP/ଇନସୁଲିନ୍ ନାନୋପାର୍ଟିକଲ୍ସକୁ ଡିହାଇଡ୍ରେଟ୍ କରିବା ପାଇଁ କ୍ଷମତା ପ୍ରଦର୍ଶନ କରେ। ଅପ୍ଟିମାଇଜ୍ ହୋଇଥିବା ଇନସୁଲିନ୍ ନାନୋପାର୍ଟିକଲ୍ସ ହାରାହାରି କଣିକା ଆକାର 318 nm ଏବଂ 99.4% ଏନକ୍ୟାପସୁଲେସନ୍ ଦକ୍ଷତା ପ୍ରଦାନ କରିଥିଲା। ଡିହାଇଡ୍ରେସନ୍ ପରେ SEM ଏବଂ FTIR ଫଳାଫଳ ଦେଖାଇଲା ଯେ ଗୋଲାକାର ଗଠନ କେବଳ ସ୍ପ୍ରେ-ଡ୍ରାଇଡ୍ NPs ରେ ମାନିଟୋଲ୍ ସହିତ ଏବଂ ବିନା ଏବଂ ମାନିଟୋଲ୍ ସହିତ ଲାଇଓଫାଇଲାଇଜ୍ କରାଯାଇଥିଲା, କିନ୍ତୁ ମାନିଟୋଲ୍ ବିନା ଲାଇଓଫାଇଲାଇଜ୍ ହୋଇଥିବା NPs ଡିହାଇଡ୍ରେସନ୍ ସମୟରେ ବିଘଟିତ ହୋଇଥିଲା। ପୁନଃଗଠନ କ୍ଷମତା ପରୀକ୍ଷାରେ, ମାନିଟୋଲ୍ ବିନା ସ୍ପ୍ରେ-ଡ୍ରାଇଡ୍ ଇନସୁଲିନ୍ ନାନୋପାର୍ଟିକଲ୍ସ ସବୁଠାରୁ କ୍ଷୁଦ୍ରତମ ମଧ୍ୟମ କଣିକା ଆକାର ଏବଂ ପୁନଃଗଠନ ଉପରେ ସର୍ବାଧିକ ଲୋଡିଂ ଦେଖାଇଲା। ଏହି ସମସ୍ତ ଡିହାଇଡ୍ରେଟେଡ୍ NPs ର ମୁକ୍ତି ଆଚରଣ ଦର୍ଶାଇଲା ଯେ ସେମାନେ pH = 2.5 ଏବଂ pH = 7 ର ଦ୍ରବଣରେ ଦ୍ରୁତ ଭାବରେ ମୁକ୍ତ ହୋଇଥିଲେ, ଏବଂ pH = 6.5 ର ଦ୍ରବଣରେ ବହୁତ ସ୍ଥିର ଥିଲେ। ଅନ୍ୟ ପୁନଃ ଦ୍ରବଣିତ ଡିହାଇଡ୍ରେଟେଡ୍ NPs ତୁଳନାରେ, NPs ମାନିଟୋଲ ବିନା ସ୍ପ୍ରେ-ଶୁଷ୍କ ସବୁଠାରୁ ଦ୍ରୁତ ମୁକ୍ତି ଦେଖାଇଲା। ଏହି ଫଳାଫଳ କୋଷୀୟ ଅପଟେକ୍ ପରୀକ୍ଷାରେ ପରିଲକ୍ଷିତ ହୋଇଥିବା ପରିଣାମ ସହିତ ସମାନ, କାରଣ ମାନିଟୋଲର ଅନୁପସ୍ଥିତିରେ ସ୍ପ୍ରେ-ଶୁଷ୍କ NPs ପ୍ରାୟ ସମ୍ପୂର୍ଣ୍ଣ ଭାବରେ ସଦ୍ୟ ପ୍ରସ୍ତୁତ NPs ର କୋଷୀୟ ଅପଟେକ୍ ଦକ୍ଷତା ବଜାୟ ରଖିଥିଲା। ଏହି ଫଳାଫଳଗୁଡ଼ିକ ସୂଚାଇ ଦିଏ ଯେ ମାନିଟୋଲ-ମୁକ୍ତ ସ୍ପ୍ରେ ଶୁଷ୍କୀକରଣ ଦ୍ୱାରା ପ୍ରସ୍ତୁତ ଶୁଷ୍କ ଇନସୁଲିନ୍ ନାନୋପାର୍ଟିକଲ୍ ଅନ୍ୟ ନିର୍ଜଳ ଡୋଜ୍ ଫର୍ମ, ଯେପରିକି ମୌଖିକ ଟାବଲେଟ୍ କିମ୍ବା ବାୟୋଆଡେସିଭ୍ ଫିଲ୍ମରେ ଅଧିକ ପ୍ରକ୍ରିୟାକରଣ ପାଇଁ ସବୁଠାରୁ ଉପଯୁକ୍ତ।
ବୌଦ୍ଧିକ ସମ୍ପତ୍ତି ସମସ୍ୟା ଯୋଗୁଁ, ବର୍ତ୍ତମାନର ଅଧ୍ୟୟନ ସମୟରେ ସୃଷ୍ଟି ହୋଇଥିବା ଏବଂ/ଅଥବା ବିଶ୍ଳେଷଣ କରାଯାଇଥିବା ଡାଟାସେଟ୍ ସାର୍ବଜନୀନ ଭାବରେ ଉପଲବ୍ଧ ନୁହେଁ, କିନ୍ତୁ ଯୁକ୍ତିଯୁକ୍ତ ଅନୁରୋଧ ପରେ ସମ୍ପୃକ୍ତ ଲେଖକମାନଙ୍କଠାରୁ ଉପଲବ୍ଧ।
କାଗାନ, ଏ. ଟାଇପ୍ 2 ମଧୁମେହ: ସାମାଜିକ ଏବଂ ବୈଜ୍ଞାନିକ ଉତ୍ପତ୍ତି, ଚିକିତ୍ସା ଜଟିଳତା, ଏବଂ ରୋଗୀ ଏବଂ ଅନ୍ୟମାନଙ୍କ ପାଇଁ ପ୍ରଭାବ। (ମ୍ୟାକଫାରଲେନ୍, 2009)।
ସିଂହ, ଏପି, ଗୁଓ, ୱାଇ., ସିଂହ, ଏ., ଜୀ, ଡବ୍ଲୁ. ଏବଂ ଜିଆଙ୍ଗ, ପି. ଇନସୁଲିନ୍ ଏନକ୍ୟାପସୁଲେସନର ବିକାଶ: କ'ଣ ଏବେ ମୌଖିକ ପ୍ରଶାସନ ସମ୍ଭବ? ଜେ. Pharmacy.bio-pharmacy.reservoir.1, 74–92 (2019)।
ଓଙ୍ଗ, ସିୱାଇ, ଅଲ-ସଲାମି, ଏଚ୍. ଏବଂ ଦାସ, ସିଆର ମଧୁମେହ ଚିକିତ୍ସା ପାଇଁ ମୌଖିକ ଇନସୁଲିନ୍-ଲୋଡେଡ୍ ଲାଇପୋସୋମ୍ ବିତରଣ ପ୍ରଣାଳୀରେ ସାମ୍ପ୍ରତିକ ଉନ୍ନତି। ବ୍ୟାଖ୍ୟା। ଜେ. ଫାର୍ମାସି। ୫୪୯, ୨୦୧-୨୧୭ (୨୦୧୮)।