ଏହି ପ୍ରବନ୍ଧଟି "ରୋଗ ଏବଂ କୀଟପତଙ୍ଗ ପ୍ରତି ଡାଲି ଫସଲର ପ୍ରତିରୋଧ ଶକ୍ତିକୁ ଉନ୍ନତ କରିବା" ଗବେଷଣା ବିଷୟର ଏକ ଅଂଶ, ସମସ୍ତ 5 ଟି ପ୍ରବନ୍ଧ ଦେଖନ୍ତୁ।
କବକ ଉଦ୍ଭିଦ ରୋଗ ନେକ୍ରୋସିସ୍ ସ୍କ୍ଲେରୋଟିନିଆ ସ୍କ୍ଲେରୋଟିଓରମ୍ (ଲିବ୍.) ଡି ବାରିର କାରକ କାରକ ବିଭିନ୍ନ ହୋଷ୍ଟ ଉଦ୍ଭିଦକୁ ସଂକ୍ରମିତ କରିବା ପାଇଁ ଏକ ବହୁସ୍ତରୀୟ ରଣନୀତି ବ୍ୟବହାର କରେ। ଏହି ଅଧ୍ୟୟନରେ ଡାଏମିନ୍ ଏଲ୍-ଅର୍ନିଥିନ୍, ଏକ ଅଣ-ପ୍ରୋଟିନ୍ ଆମିନୋ ଏସିଡ୍ ଯାହା ଅନ୍ୟାନ୍ୟ ଅତ୍ୟାବଶ୍ୟକ ଆମିନୋ ଏସିଡ୍ ର ସଂଶ୍ଳେଷଣକୁ ଉତ୍ତେଜିତ କରେ, ଏହାକୁ ସୁଡୋମୋନାସ୍ ସ୍କ୍ଲେରୋଟିଓରମ୍ ଦ୍ୱାରା ହେଉଥିବା ଧଳା ଛାଞ୍ଚ ପ୍ରତି ଫେସୋଲସ୍ ଭରସିସ୍ ଏଲ୍. ର ଆଣବିକ, ଶାରୀରିକ ଏବଂ ଜୈବ ରାସାୟନିକ ପ୍ରତିକ୍ରିୟାକୁ ବୃଦ୍ଧି କରିବା ପାଇଁ ଏକ ବିକଳ୍ପ ପରିଚାଳନା ରଣନୀତି ଭାବରେ ବ୍ୟବହାର କରିବାର ପ୍ରସ୍ତାବ ଦିଆଯାଇଛି। ଇନ୍ ଭିଟ୍ରୋ ପରୀକ୍ଷଣରୁ ଜଣାପଡିଛି ଯେ ଏଲ୍-ଅର୍ନିଥିନ୍ ଡୋଜ୍-ନିର୍ଭରଶୀଳ ଭାବରେ ଏସ୍. ପାଇରେନୋଇଡୋସାର ମାଇସେଲିଆଲ୍ ବୃଦ୍ଧିକୁ ଉଲ୍ଲେଖନୀୟ ଭାବରେ ପ୍ରତିହତ କରିଥିଲା। ଏହା ସହିତ, ଏହା ଗ୍ରୀନହାଉସ୍ ପରିସ୍ଥିତିରେ ଧଳା ଛାଞ୍ଚର ତୀବ୍ରତାକୁ ଯଥେଷ୍ଟ ହ୍ରାସ କରିପାରିବ। ଏହା ବ୍ୟତୀତ, ଏଲ୍-ଅର୍ନିଥିନ୍ ଚିକିତ୍ସା କରାଯାଇଥିବା ଉଦ୍ଭିଦଗୁଡ଼ିକର ବୃଦ୍ଧିକୁ ଉତ୍ତେଜିତ କରିଥିଲା, ଯାହା ସୂଚାଇଥିଲା ଯେ ଏଲ୍-ଅର୍ନିଥିନ୍ର ପରୀକ୍ଷିତ ସାନ୍ଦ୍ରତା ଚିକିତ୍ସା କରାଯାଇଥିବା ଉଦ୍ଭିଦଗୁଡ଼ିକ ପାଇଁ ଫାଇଟୋଟକ୍ସିକ ନଥିଲା। ଏହା ସହିତ, L-ଅର୍ନିଥିନ୍ ଅଣ-ଏନଜାଇମାଟିକ୍ ଆଣ୍ଟିଅକ୍ସିଡାଣ୍ଟ (ସମ୍ପୂର୍ଣ୍ଣ ଦ୍ରବଣୀୟ ଫେନୋଲିକ୍ସ ଏବଂ ଫ୍ଲାଭୋନୋଇଡ୍ସ) ଏବଂ ଏନଜାଇମାଟିକ୍ ଆଣ୍ଟିଅକ୍ସିଡାଣ୍ଟ (କାଟାଲେଜ୍ (CAT), ପେରୋକ୍ସିଡେଜ୍ (POX), ଏବଂ ପଲିଫେନୋଲ୍ ଅକ୍ସିଡେଜ୍ (PPO)) ର ପ୍ରକାଶନକୁ ବୃଦ୍ଧି କରିଥିଲା, ଏବଂ ତିନୋଟି ଆଣ୍ଟିଅକ୍ସିଡାଣ୍ଟ-ସମ୍ବନ୍ଧୀୟ ଜିନ୍ (PvCAT1, PvSOD, ଏବଂ PvGR) ର ପ୍ରକାଶନକୁ ବୃଦ୍ଧି କରିଥିଲା। ଏହା ବ୍ୟତୀତ, ସିଲିକୋ ବିଶ୍ଳେଷଣରେ S. ସ୍କ୍ଲେରୋଟିଓରମ୍ ଜିନୋମରେ ଏକ ପୁଟେଟିଭ୍ ଅକ୍ସାଲୋଏସେଟେଟ୍ ଆସିଟାଲ୍ହାଇଡ୍ରୋଲେଜ୍ (SsOAH) ପ୍ରୋଟିନ୍ ର ଉପସ୍ଥିତି ପ୍ରକାଶ କରିଥିଲା, ଯାହା କାର୍ଯ୍ୟକ୍ଷମ ବିଶ୍ଳେଷଣ, ସଂରକ୍ଷିତ ଡୋମେନ୍ ଏବଂ ଟୋପୋଲୋଜି ଦୃଷ୍ଟିରୁ ଆସ୍ପରଗିଲସ୍ ଫିଜିଏନ୍ସିସ୍ (AfOAH) ଏବଂ ପେନିସିଲିୟମ୍ sp. (PlOAH) ର ଅକ୍ସାଲୋଏସେଟେଟ୍ ଆସିଟାଲ୍ହାଇଡ୍ରୋଲେଜ୍ (SsOAH) ପ୍ରୋଟିନ୍ ସହିତ ଅତ୍ୟନ୍ତ ସମାନ ଥିଲା। ଆକର୍ଷଣୀୟ ଭାବରେ, ଆଳୁ ଡେକ୍ସଟ୍ରୋଜ୍ ବ୍ରୋଥ୍ (PDB) ମାଧ୍ୟମରେ L-ଅର୍ନିଥିନ୍ ଯୋଗ କରିବା ଦ୍ୱାରା S. ସ୍କ୍ଲେରୋଟିଓରମ୍ ମାଇସେଲିଆରେ SsOAH ଜିନ୍ ର ପ୍ରକାଶନକୁ ଯଥେଷ୍ଟ ହ୍ରାସ କରାଯାଇଥିଲା। ସେହିପରି, ଚିକିତ୍ସା କରାଯାଇଥିବା ଗଛରୁ ସଂଗୃହୀତ ଫଙ୍ଗାଲ ମାଇସେଲିଆରେ L-ଅର୍ନିଥିନର ବାହ୍ୟ ପ୍ରୟୋଗ SsOAH ଜିନର ପ୍ରକାଶନକୁ ଯଥେଷ୍ଟ ହ୍ରାସ କରିଥିଲା। ଶେଷରେ, L-ଅର୍ନିଥିନ ପ୍ରୟୋଗ PDB ମଧ୍ୟମ ଏବଂ ସଂକ୍ରମିତ ପତ୍ର ଉଭୟରେ ଅକ୍ସାଲିକ୍ ଏସିଡ୍ କ୍ଷରଣକୁ ଯଥେଷ୍ଟ ହ୍ରାସ କରିଥିଲା। ଶେଷରେ, L-ଅର୍ନିଥିନ ରେଡକ୍ସ ସ୍ଥିତି ବଜାୟ ରଖିବା ସହିତ ସଂକ୍ରମିତ ଗଛଗୁଡ଼ିକର ପ୍ରତିରକ୍ଷା ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ବୃଦ୍ଧି କରିବାରେ ଏକ ପ୍ରମୁଖ ଭୂମିକା ଗ୍ରହଣ କରେ। ଏହି ଅଧ୍ୟୟନର ଫଳାଫଳ ଧଳା ଛାଞ୍ଚକୁ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ କରିବା ଏବଂ ବିନ୍ ଉତ୍ପାଦନ ଏବଂ ଅନ୍ୟାନ୍ୟ ଫସଲ ଉପରେ ଏହାର ପ୍ରଭାବକୁ ହ୍ରାସ କରିବା ପାଇଁ ଅଭିନବ, ପରିବେଶ ଅନୁକୂଳ ପଦ୍ଧତି ବିକାଶ କରିବାରେ ସାହାଯ୍ୟ କରିପାରେ।
ନେକ୍ରୋଟ୍ରୋଫିକ୍ କବକ ସ୍କ୍ଲେରୋଟିନିଆ ସ୍କ୍ଲେରୋଟିଓରମ୍ (ଲିବ୍.) ଡି ବାରି ଦ୍ୱାରା ହେଉଥିବା ଧଳା ଛାଞ୍ଚ ହେଉଛି ଏକ ବିନାଶକାରୀ, ଅମଳ ହ୍ରାସକାରୀ ରୋଗ ଯାହା ବିଶ୍ୱ ବିନ୍ (ଫେଜୋଲସ୍ ଭଲଗାରିସ୍ ଏଲ୍.) ଉତ୍ପାଦନ ପାଇଁ ଏକ ଗୁରୁତର ବିପଦ ସୃଷ୍ଟି କରେ (ବୋଲ୍ଟନ୍ ଏଟ୍ ଅଲ୍., ୨୦୦୬)। ସ୍କ୍ଲେରୋଟିନିଆ ସ୍କ୍ଲେରୋଟିଓରମ୍ ହେଉଛି ନିୟନ୍ତ୍ରଣ କରିବା ସବୁଠାରୁ କଷ୍ଟକର ମାଟି ବାହିତ କବକ ଉଦ୍ଭିଦ ରୋଗଜନିତ ରୋଗ, 600 ରୁ ଅଧିକ ଉଦ୍ଭିଦ ପ୍ରଜାତିଙ୍କ ଏକ ବିସ୍ତୃତ ବାହକ ପରିସର ଏବଂ ଏକ ଅ-ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ଉପାୟରେ ବାହକ ଟିସୁକୁ ଦ୍ରୁତ ଗତିରେ ମାସେରେଟ୍ କରିବାର କ୍ଷମତା ସହିତ (ଲିଆଙ୍ଗ୍ ଏବଂ ରୋଲିନ୍ସ, 2018)। ପ୍ରତିକୂଳ ପରିସ୍ଥିତିରେ, ଏହା ଏହାର ଜୀବନଚକ୍ରର ଏକ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ପର୍ଯ୍ୟାୟ ଦେଇ ଗତି କରେ, ମାଟିରେ କଳା, କଠିନ, ବୀଜ ପରି ଗଠନ ଭାବରେ କିମ୍ବା ସଂକ୍ରମିତ ଉଦ୍ଭିଦର ମାଇସେଲିୟମ୍ କିମ୍ବା କାଣ୍ଡ ପିଥ୍ ରେ ଧଳା, ଫୁଲିଥିବା ବୃଦ୍ଧି ଭାବରେ ଦୀର୍ଘ ସମୟ ପାଇଁ ସୁପ୍ତ ରହିଥାଏ (ସ୍କ୍ୱେର୍ଟଜ୍ ଏଟ୍ ଅଲ୍., 2005)। ଏସ୍. ସ୍କ୍ଲେରୋଟିଓରମ୍ ସ୍କ୍ଲେରୋଟିଆ ଗଠନ କରିବାରେ ସକ୍ଷମ, ଯାହା ଏହାକୁ ସଂକ୍ରମିତ କ୍ଷେତରେ ଦୀର୍ଘ ସମୟ ପାଇଁ ବଞ୍ଚିବାକୁ ଏବଂ ରୋଗ ସମୟରେ ବଜାୟ ରଖିବାକୁ ଅନୁମତି ଦିଏ (ସ୍କ୍ୱାର୍ଜ୍ ଏଟ୍ ଅଲ୍., ୨୦୦୫)। ସ୍କ୍ଲେରୋଟିଆ ପୁଷ୍ଟିକର ପଦାର୍ଥରେ ଭରପୂର, ଦୀର୍ଘ ସମୟ ପାଇଁ ମାଟିରେ ବଜାୟ ରହିପାରେ ଏବଂ ପରବର୍ତ୍ତୀ ସଂକ୍ରମଣ ପାଇଁ ପ୍ରାଥମିକ ଇନୋକୁଲମ୍ ଭାବରେ କାର୍ଯ୍ୟ କରେ (ସ୍କ୍ୱାର୍ଜ୍ ଏଟ୍ ଅଲ୍., ୨୦୦୫)। ଅନୁକୂଳ ପରିସ୍ଥିତିରେ, ସ୍କ୍ଲେରୋଟିଆ ଅଙ୍କୁରିତ ହୁଏ ଏବଂ ବାୟୁରେ ବିଷାକ୍ତ ବୀଜାଣୁ ଉତ୍ପାଦନ କରେ ଯାହା ଫୁଲ, କାଣ୍ଡ କିମ୍ବା ଫଳ ସମେତ ଗଛର ସମସ୍ତ ଉପର ଅଂଶକୁ ସଂକ୍ରମିତ କରିପାରେ (ସ୍କ୍ୱାର୍ଜ୍ ଏଟ୍ ଅଲ୍., ୨୦୦୫)।
ସ୍କ୍ଲେରୋଟିନିଆ ସ୍କ୍ଲେରୋଟିଓରମ୍ ଏହାର ହୋଷ୍ଟ ଗଛଗୁଡ଼ିକୁ ସଂକ୍ରମିତ କରିବା ପାଇଁ ଏକ ବହୁସ୍ତରୀୟ ରଣନୀତି ବ୍ୟବହାର କରେ, ଯେଉଁଥିରେ ସ୍କ୍ଲେରୋଟିଆଲ୍ ଅଙ୍କୁରିତ ହେବା ଠାରୁ ଲକ୍ଷଣ ବିକାଶ ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ ସମନ୍ୱିତ ଘଟଣାଗୁଡ଼ିକର ଏକ ଶୃଙ୍ଖଳା ଅନ୍ତର୍ଭୁକ୍ତ। ପ୍ରାରମ୍ଭରେ, S. ସ୍କ୍ଲେରୋଟିଓରମ୍ ଆପୋଥେସିଆ ନାମକ ଛତୁ ପରି ଗଠନରୁ ନିଲମ୍ବିତ ସ୍ପୋର (ଆସ୍କସ୍ପୋର୍ସ କୁହାଯାଏ) ଉତ୍ପାଦନ କରେ, ଯାହା ବାୟୁମଣ୍ଡଳରେ ପରିଣତ ହୁଏ ଏବଂ ସଂକ୍ରମିତ ଗଛର ଅବଶେଷରେ ଅଣ-ଗତିଶୀଳ ସ୍କ୍ଲେରୋଟିଆରେ ବିକଶିତ ହୁଏ (ବୋଲ୍ଟନ୍ ଏଟ୍ ଅଲ୍., 2006)। ତା’ପରେ କବକ ଉଦ୍ଭିଦ କୋଷ କାନ୍ଥ pH ନିୟନ୍ତ୍ରଣ କରିବା ପାଇଁ, ଏନଜାଇମାଟିକ୍ ଅବକ୍ଷୟ ଏବଂ ଟିସୁ ଆକ୍ରମଣକୁ ପ୍ରୋତ୍ସାହିତ କରିବା ପାଇଁ (ହେଗେଡସ୍ ଏବଂ ରିମର, 2005) ଅକ୍ସାଲିକ୍ ଏସିଡ୍, ଏକ ଭାଇରୁଲେନ୍ସ ଫ୍ୟାକ୍ଟର କ୍ଷରଣ କରେ, ଏବଂ ହୋଷ୍ଟ ଗଛର ଅକ୍ସିଡେଟିଭ୍ ବିସ୍ଫୋରଣକୁ ଦମନ କରେ। ଏହି ଏସିଡିଫିକେସନ୍ ପ୍ରକ୍ରିୟା ଗଛ କୋଷ କାନ୍ଥକୁ ଦୁର୍ବଳ କରିଥାଏ, କବକ କୋଷ କାନ୍ଥ ଡିଗ୍ରେଡିଂ ଏଞ୍ଜାଇମ୍ (CWDEs) ର ସାଧାରଣ ଏବଂ ଦକ୍ଷ କାର୍ଯ୍ୟ ପାଇଁ ଏକ ଅନୁକୂଳ ପରିବେଶ ପ୍ରଦାନ କରେ, ଯାହା ଜୀବାଣୁକୁ ଭୌତିକ ପ୍ରତିବନ୍ଧକକୁ ଅତିକ୍ରମ କରିବାକୁ ଏବଂ ହୋଷ୍ଟ ଟିସୁଗୁଡ଼ିକୁ ପ୍ରବେଶ କରିବାକୁ ଅନୁମତି ଦିଏ (ମାର୍ସିଆନୋ ଏଟ୍ ଅଲ୍., 1983)। ଥରେ ପ୍ରବେଶ କରିବା ପରେ, S. ସ୍କ୍ଲେରୋଟିଓରମ୍ ଅନେକ CWDE କ୍ଷରଣ କରେ, ଯେପରିକି ପଲିଗାଲାକ୍ଟୁରୋନେଜ୍ ଏବଂ ସେଲୁଲେଜ୍, ଯାହା ସଂକ୍ରମିତ ଟିସୁରେ ଏହାର ପ୍ରସାରକୁ ସହଜ କରିଥାଏ ଏବଂ ଟିସୁ ନେକ୍ରୋସିସ୍ ସୃଷ୍ଟି କରିଥାଏ। କ୍ଷତ ଏବଂ ହାଇଫାଲ୍ ମ୍ୟାଟ୍ସର ଅଗ୍ରଗତି ଧଳା ଛାଞ୍ଚର ବୈଶିଷ୍ଟ୍ୟପୂର୍ଣ୍ଣ ଲକ୍ଷଣ ଆଡ଼କୁ ନେଇଥାଏ (ହେଗେଡସ୍ ଏବଂ ରିମର, 2005)। ଏହି ସମୟରେ, ହୋଷ୍ଟ ଉଦ୍ଭିଦଗୁଡ଼ିକ ପ୍ୟାଟର୍ନ ଚିହ୍ନଟ ରିସେପ୍ଟର (PRRs) ମାଧ୍ୟମରେ ରୋଗଜନିତ-ସମ୍ପର୍କିତ ଆଣବିକ ପ୍ୟାଟର୍ନ (PAMPs) ଚିହ୍ନିଥାଏ, ଯାହା ଶେଷରେ ପ୍ରତିରକ୍ଷା ପ୍ରତିକ୍ରିୟାକୁ ସକ୍ରିୟ କରିଥାଏ।
ଦଶନ୍ଧି ଧରି ରୋଗ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ ପ୍ରୟାସ ସତ୍ତ୍ୱେ, ରୋଗଜୀବାଣୁର ପ୍ରତିରୋଧ, ବଞ୍ଚିବା ଏବଂ ଅନୁକୂଳନ କ୍ଷମତା ହେତୁ, ଅନ୍ୟାନ୍ୟ ବାଣିଜ୍ୟିକ ଫସଲ ପରି ବିନ୍ସରେ ପର୍ଯ୍ୟାପ୍ତ ପ୍ରତିରୋଧୀ ଜର୍ମପ୍ଲାଜମର ଅଭାବ ରହିଛି। ତେଣୁ ରୋଗ ପରିଚାଳନା ଅତ୍ୟନ୍ତ ଚ୍ୟାଲେଞ୍ଜିଂ ଏବଂ ଏକ ସମନ୍ୱିତ, ବହୁମୁଖୀ ରଣନୀତି ଆବଶ୍ୟକ କରେ ଯେଉଁଥିରେ ସାଂସ୍କୃତିକ ଅଭ୍ୟାସ, ଜୈବିକ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ ଏବଂ ରାସାୟନିକ କବକନାଶକ (O'Sullivan et al., 2021) ର ମିଶ୍ରଣ ଅନ୍ତର୍ଭୁକ୍ତ। ଧଳା ଛାଞ୍ଚର ରାସାୟନିକ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ ସବୁଠାରୁ ପ୍ରଭାବଶାଳୀ କାରଣ କବକନାଶକ, ସଠିକ୍ ଭାବରେ ଏବଂ ସଠିକ୍ ସମୟରେ ପ୍ରୟୋଗ କଲେ, ରୋଗର ପ୍ରସାରକୁ ପ୍ରଭାବଶାଳୀ ଭାବରେ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ କରିପାରିବ, ସଂକ୍ରମଣର ତୀବ୍ରତା ହ୍ରାସ କରିପାରିବ ଏବଂ ଉତ୍ପାଦନ କ୍ଷତିକୁ କମ କରିପାରିବ। ତଥାପି, କବକନାଶକ ଉପରେ ଅତ୍ୟଧିକ ବ୍ୟବହାର ଏବଂ ଅତ୍ୟଧିକ ନିର୍ଭରଶୀଳତା S. sclerotiorum ର ପ୍ରତିରୋଧୀ ପ୍ରଜାତି ସୃଷ୍ଟି କରିପାରେ ଏବଂ ଲକ୍ଷ୍ୟହୀନ ଜୀବ, ମାଟି ସ୍ୱାସ୍ଥ୍ୟ ଏବଂ ଜଳ ଗୁଣବତ୍ତା ଉପରେ ନକାରାତ୍ମକ ପ୍ରଭାବ ପକାଇପାରେ (Le Cointe et al., 2016; Ceresini et al., 2024)। ତେଣୁ, ପରିବେଶ ଅନୁକୂଳ ବିକଳ୍ପ ଖୋଜିବା ଏକ ଶୀର୍ଷ ପ୍ରାଥମିକତା ପାଲଟିଛି।
ପଲିମାଇନ୍ସ (PAs), ଯେପରିକି ପୁଟ୍ରେସ୍ସାଇନ୍, ସ୍ପର୍ମିଡିନ୍, ସ୍ପର୍ମିନ୍ ଏବଂ କାଡାଭେରିନ୍, ମାଟି ବାହିତ ଉଦ୍ଭିଦ ରୋଗଜୀବାଣୁ ବିରୁଦ୍ଧରେ ଏକ ପ୍ରତିଶ୍ରୁତିପୂର୍ଣ୍ଣ ବିକଳ୍ପ ଭାବରେ କାର୍ଯ୍ୟ କରିପାରନ୍ତି, ଯାହାଦ୍ୱାରା ବିପଦପୂର୍ଣ୍ଣ ରାସାୟନିକ କବକନାଶକର ବ୍ୟବହାର ସମ୍ପୂର୍ଣ୍ଣ କିମ୍ବା ଆଂଶିକ ଭାବରେ ହ୍ରାସ ପାଇଥାଏ (ନେହେଲା ଏବଂ ଅନ୍ୟାନ୍ୟ, 2024; ୟି ଏବଂ ଅନ୍ୟାନ୍ୟ, 2024)। ଉଚ୍ଚ ଉଦ୍ଭିଦରେ, PAs ଅନେକ ଶାରୀରିକ ପ୍ରକ୍ରିୟାରେ ସାମିଲ ଥାଏ ଯେଉଁଥିରେ କୋଷ ବିଭାଜନ, ପାର୍ଥକ୍ୟ ଏବଂ ଅଜୈବିକ ଏବଂ ଜୈବିକ ଚାପ ପ୍ରତି ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ଅନ୍ତର୍ଭୁକ୍ତ, କିନ୍ତୁ ସୀମିତ ନୁହେଁ (କିଲିନି ଏବଂ ନେହେଲା, 2020)। ଏଗୁଡ଼ିକ ଆଣ୍ଟିଅକ୍ସିଡାଣ୍ଟ ଭାବରେ କାର୍ଯ୍ୟ କରିପାରିବେ, ପ୍ରତିକ୍ରିୟାଶୀଳ ଅମ୍ଳଜାନ ପ୍ରଜାତି (ROS) କୁ ସଫା କରିବାରେ ସାହାଯ୍ୟ କରିପାରିବେ, ରେଡକ୍ସ ହୋମିଓଷ୍ଟାସିସ୍ ବଜାୟ ରଖିପାରିବେ (ନେହେଲା ଏବଂ କିଲିନି, 2023), ପ୍ରତିରକ୍ଷା-ସମ୍ବନ୍ଧୀୟ ଜିନ୍ ପ୍ରେରଣା ଦେଇପାରିବେ (ରୋମେରୋ ଏଟ୍ ଅଲ୍., 2018), ବିଭିନ୍ନ ମେଟାବୋଲିକ୍ ପଥକୁ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ କରିପାରିବେ (ନେହେଲା ଏବଂ କିଲିନି, 2023), ଏଣ୍ଡୋଜେନ୍ ଫାଇଟୋହର୍ମୋନ୍ (ନେହେଲା ଏବଂ କିଲିନି, 2019), ପଦ୍ଧତିଗତ ଅର୍ଜିତ ପ୍ରତିରୋଧ (SAR) ସ୍ଥାପନ କରିପାରିବେ, ଏବଂ ଉଦ୍ଭିଦ-ରୋଗୀ ପାରସ୍ପରିକ କ୍ରିୟାକୁ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ କରିପାରିବେ (ନେହେଲା ଏବଂ କିଲିନି, 2020; ଆସିଜା ଏଟ୍ ଅଲ୍., 2022; ଜରୱୋନିକ୍, 2022)। ଏହା ଲକ୍ଷ୍ୟ କରିବା ଯୋଗ୍ୟ ଯେ ଉଦ୍ଭିଦ ପ୍ରତିରକ୍ଷାରେ PA ର ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ଯନ୍ତ୍ରପାତି ଏବଂ ଭୂମିକା ଉଦ୍ଭିଦ ପ୍ରଜାତି, ରୋଗଜୀବାଣୁ ଏବଂ ପରିବେଶଗତ ପରିସ୍ଥିତି ଉପରେ ନିର୍ଭର କରି ଭିନ୍ନ ହୋଇଥାଏ। ଉଦ୍ଭିଦରେ ସବୁଠାରୁ ପ୍ରଚୁର ପରିମାଣର PA ଅତ୍ୟାବଶ୍ୟକ ପଲିଆମାଇନ୍ L-ଅର୍ନିଥିନ୍ (କିଲିନି ଏବଂ ନେହେଲା, 2020) ରୁ ଜୈବ ସଂଶ୍ଳେଷଣ କରାଯାଏ।
ଉଦ୍ଭିଦ ବୃଦ୍ଧି ଏବଂ ବିକାଶରେ L-ଅର୍ନିଥିନ୍ ବହୁବିଧ ଭୂମିକା ଗ୍ରହଣ କରେ। ଉଦାହରଣ ସ୍ୱରୂପ, ପୂର୍ବ ଅଧ୍ୟୟନଗୁଡ଼ିକ ଦର୍ଶାଇଛି ଯେ ଚାଉଳରେ (Oryza sativa), ଅର୍ନିଥିନ୍ ନାଇଟ୍ରୋଜେନ୍ ପୁନଃଚକ୍ରଣ (Liu et al., 2018), ଧାନ ଉତ୍ପାଦନ, ଗୁଣବତ୍ତା ଏବଂ ସୁଗନ୍ଧ (Lu et al., 2020), ଏବଂ ଜଳ ଚାପ ପ୍ରତିକ୍ରିୟା (Yang et al., 2000) ସହିତ ଜଡିତ ହୋଇପାରେ। ଏହା ବ୍ୟତୀତ, L-ଅର୍ନିଥିନ୍ ର ବାହ୍ୟ ପ୍ରୟୋଗ ଚିନି ବିଟ୍ (Beta vulgaris) (Hussein et al., 2019) ରେ ମରୁଡ଼ି ସହନଶୀଳତାକୁ ଉଲ୍ଲେଖନୀୟ ଭାବରେ ବୃଦ୍ଧି କରିଛି ଏବଂ ପିଆଜ (Allium Cepa) (Cavuşoǧlu and Çavuşoǧlu, 2021) ଏବଂ କାଜୁ (Anacardium occidentale) ଗଛ (da Rocha et al., 2012) ରେ ଲୁଣ ଚାପ ହ୍ରାସ କରିଛି। ଅବାୟୋଟିକ୍ ଚାପ ପ୍ରତିରକ୍ଷାରେ L-ଅର୍ନିଥିନ୍ ର ସମ୍ଭାବ୍ୟ ଭୂମିକା ଚିକିତ୍ସା କରାଯାଇଥିବା ଗଛଗୁଡ଼ିକରେ ପ୍ରୋଲାଇନ୍ ସଂଗ୍ରହରେ ଏହାର ସମ୍ପୃକ୍ତି ହେତୁ ହୋଇପାରେ। ଉଦାହରଣ ସ୍ୱରୂପ, ପ୍ରୋଲାଇନ୍ ମେଟାବୋଲିଜିମ୍ ସହିତ ଜଡିତ ଜିନ୍, ଯେପରିକି ଅର୍ନିଥିନ୍ ଡେଲ୍ଟା ଆମିନୋଟ୍ରାନ୍ସଫେରେଜ୍ (ଡେଲ୍ଟା-OAT) ଏବଂ ପ୍ରୋଲାଇନ୍ ଡିହାଇଡ୍ରୋଜେନେଜ୍ (ProDH1 ଏବଂ ProDH2) ଜିନ୍, ପୂର୍ବରୁ ଅଣ-ହୋଷ୍ଟ ସୁଡୋମୋନାସ୍ ସିରିଙ୍ଗା ଷ୍ଟ୍ରେନ୍ (ସେଣ୍ଟିଲ୍-କୁମାର ଏବଂ ମାଇସୁର, 2012) ବିରୁଦ୍ଧରେ ନିକୋଟିଆନା ବେନ୍ଥାମିଆନା ଏବଂ ଆରାବିଡୋପ୍ସିସ୍ ଥାଲିଆନାର ପ୍ରତିରକ୍ଷାରେ ସାମିଲ ଥିବା ରିପୋର୍ଟ କରାଯାଇଛି। ଅନ୍ୟପକ୍ଷରେ, ରୋଗଜୀବନ ବୃଦ୍ଧି ପାଇଁ ଫଙ୍ଗାଲ୍ ଅର୍ନିଥିନ୍ ଡେକାର୍ବୋକ୍ସିଲେଜ୍ (ODC) ଆବଶ୍ୟକ (ସିଂହ ଏଟ୍ ଅଲ୍., 2020)। ହୋଷ୍ଟ-ପ୍ରେରିତ ଜିନ୍ ସାଇଲେନ୍ସିଂ (HIGS) ମାଧ୍ୟମରେ ଫୁସାରିଅମ୍ ଅକ୍ସିସ୍ପୋରମ ଏଫ୍. ଏସ୍ପି. ଲାଇକୋପର୍ସିସିର ODCକୁ ଟାର୍ଗେଟ କରିବା ଫୁସାରିଅମ୍ ୱିଲ୍ଟ ପ୍ରତି ଟମାଟୋ ଗଛର ପ୍ରତିରୋଧକୁ ଉଲ୍ଲେଖନୀୟ ଭାବରେ ବୃଦ୍ଧି କରିଛି (ସିଂହ ଏଟ୍ ଅଲ୍., 2020)। ତଥାପି, ଫାଇଟୋପାଥୋଜେନ୍ ଭଳି ବାୟୋଟିକ୍ ଚାପ ବିରୁଦ୍ଧରେ ଏକ୍ସୋଜେନସ୍ ଅର୍ନିଥିନ୍ ପ୍ରୟୋଗର ସମ୍ଭାବ୍ୟ ଭୂମିକା ଭଲ ଭାବରେ ଅଧ୍ୟୟନ କରାଯାଇ ନାହିଁ। ଅଧିକ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ କଥା ହେଉଛି, ରୋଗ ପ୍ରତିରୋଧକ ଶକ୍ତି ଏବଂ ଜୈବ ରାସାୟନିକ ଏବଂ ଶାରୀରିକ ଘଟଣା ଉପରେ ଅର୍ନିଥିନର ପ୍ରଭାବ ପ୍ରାୟତଃ ଅନାବିଷ୍କୃତ ରହିଛି।
ପ୍ରଭାବଶାଳୀ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ ରଣନୀତି ବିକାଶ ପାଇଁ ଶିମ୍ବଗୁଡ଼ିକର S. ସ୍କ୍ଲେରୋଟିଓରମ୍ ସଂକ୍ରମଣର ଜଟିଳତାକୁ ବୁଝିବା ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ। ଏହି ଅଧ୍ୟୟନରେ, ଆମେ ସ୍କ୍ଲେରୋଟିନିଆ ସ୍କ୍ଲେରୋଟିଓରମ୍ ସଂକ୍ରମଣ ପ୍ରତି ଶିମ୍ବ ଗଛଗୁଡ଼ିକର ପ୍ରତିରକ୍ଷା ଯନ୍ତ୍ର ଏବଂ ପ୍ରତିରୋଧକୁ ବୃଦ୍ଧି କରିବାରେ ଡାଇମାଇନ୍ L-ଅର୍ନିଥିନ୍ ର ସମ୍ଭାବ୍ୟ ଭୂମିକାକୁ ଏକ ପ୍ରମୁଖ କାରକ ଭାବରେ ଚିହ୍ନଟ କରିବାକୁ ଲକ୍ଷ୍ୟ ରଖିଥିଲୁ। ଆମେ ଅନୁମାନ କରୁଛୁ ଯେ, ସଂକ୍ରମିତ ଉଦ୍ଭିଦଗୁଡ଼ିକର ପ୍ରତିରକ୍ଷା ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ବୃଦ୍ଧି କରିବା ସହିତ, L-ଅର୍ନିଥିନ୍ ରେଡକ୍ସ ସ୍ଥିତି ବଜାୟ ରଖିବାରେ ମଧ୍ୟ ଏକ ପ୍ରମୁଖ ଭୂମିକା ଗ୍ରହଣ କରେ। ଆମେ ପ୍ରସ୍ତାବ ଦେଉଛୁ ଯେ L-ଅର୍ନିଥିନ୍ ର ସମ୍ଭାବ୍ୟ ପ୍ରଭାବ ଏନଜାଇମାଟିକ୍ ଏବଂ ଅଣ-ଏନଜାଇମାଟିକ୍ ଆଣ୍ଟିଅକ୍ସିଡାଣ୍ଟ ପ୍ରତିରକ୍ଷା ଯନ୍ତ୍ରର ନିୟନ୍ତ୍ରଣ ଏବଂ ଫଙ୍ଗାଲ୍ ରୋଗଜନିତତା/ଭାଇରୁଲେନ୍ସ କାରକ ଏବଂ ସମ୍ବନ୍ଧିତ ପ୍ରୋଟିନ୍ ସହିତ ହସ୍ତକ୍ଷେପ ସହିତ ଜଡିତ। L-ଅର୍ନିଥିନ୍ ର ଏହି ଦ୍ୱୈତ କାର୍ଯ୍ୟକାରିତା ଏହାକୁ ଧଳା ଛାଞ୍ଚର ପ୍ରଭାବକୁ ହ୍ରାସ କରିବା ଏବଂ ଏହି ଶକ୍ତିଶାଳୀ କବକ ରୋଗଜନିତ ପ୍ରତି ସାଧାରଣ ଶିମ୍ବ ଫସଲର ପ୍ରତିରୋଧକୁ ବୃଦ୍ଧି କରିବା ପାଇଁ ଏକ ସ୍ଥାୟୀ ରଣନୀତି ପାଇଁ ଏକ ପ୍ରତିଶ୍ରୁତିବଦ୍ଧ ପ୍ରାର୍ଥୀ କରିଥାଏ। ବର୍ତ୍ତମାନର ଅଧ୍ୟୟନର ଫଳାଫଳ ଧଳା ଛାଞ୍ଚକୁ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ କରିବା ଏବଂ ଶିମ୍ବ ଉତ୍ପାଦନ ଉପରେ ଏହାର ପ୍ରଭାବକୁ ହ୍ରାସ କରିବା ପାଇଁ ଅଭିନବ, ପରିବେଶ ଅନୁକୂଳ ପଦ୍ଧତି ବିକାଶରେ ସାହାଯ୍ୟ କରିପାରେ।
ଏହି ଅଧ୍ୟୟନରେ, ସାଧାରଣ ବିନ୍‌ର ଏକ ସମ୍ବେଦନଶୀଳ ବାଣିଜ୍ୟିକ ପ୍ରଜାତିର, Giza 3 (Phaseolus vulgaris L. cv. Giza 3), ପରୀକ୍ଷାମୂଳକ ସାମଗ୍ରୀ ଭାବରେ ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇଥିଲା। ଲେଗ୍ୟୁମ୍ ଗବେଷଣା ବିଭାଗ, କ୍ଷେତ୍ର ଫସଲ ଗବେଷଣା ପ୍ରତିଷ୍ଠାନ (FCRI), କୃଷି ଗବେଷଣା କେନ୍ଦ୍ର (ARC), ଇଜିପ୍ଟ ଦ୍ୱାରା ଦୟାପୂର୍ବକ ସୁସ୍ଥ ବିହନ ଯୋଗାଇ ଦିଆଯାଇଥିଲା। ଗ୍ରୀନହାଉସ୍ ପରିସ୍ଥିତିରେ (25 ± 2 °C, ଆପେକ୍ଷିକ ଆର୍ଦ୍ରତା 75 ± 1%, 8 ଘଣ୍ଟା ହାଲୁକା/16 ଘଣ୍ଟା ଅନ୍ଧକାର) S. ସ୍କ୍ଲେରୋଟିଓରମ୍-ସଂକ୍ରମିତ ମାଟିରେ ପୂର୍ଣ୍ଣ ପ୍ଲାଷ୍ଟିକ୍ ପାତ୍ରରେ (ଭିତର ବ୍ୟାସ 35 ସେମି, ଗଭୀରତା 50 ସେମି) ପାଞ୍ଚଟି ବିହନ ବୁଣାଯାଇଥିଲା। ବୁଣିବାର 7-10 ଦିନ ପରେ (DPS), ଚାରାଗୁଡ଼ିକୁ ପତଳା କରାଯାଇଥିଲା ଯାହା ଦ୍ଵାରା ସମାନ ବୃଦ୍ଧି ସହିତ କେବଳ ଦୁଇଟି ଚାରା ଏବଂ ପ୍ରତ୍ୟେକ ପାତ୍ରରେ ତିନୋଟି ସମ୍ପୂର୍ଣ୍ଣ ବିସ୍ତାରିତ ପତ୍ର ରହିଲା। ସମସ୍ତ ପାତ୍ର ଗଛଗୁଡ଼ିକୁ ପ୍ରତି ଦୁଇ ସପ୍ତାହରେ ଥରେ ପାଣି ଦିଆଯାଇଥିଲା ଏବଂ ପ୍ରଦତ୍ତ ପ୍ରକାର ପାଇଁ ସୁପାରିଶ ହାରରେ ପ୍ରତି ମାସରେ ସାର ଦିଆଯାଇଥିଲା।
500 ମିଗ୍ରା/ଲିଟର L-ornithinediamin (ଯାହାକୁ (+)-(S)-2,5-diaminopentanoic acid; Sigma-Aldrich, Darmstadt, ଜର୍ମାନୀ ଭାବରେ ମଧ୍ୟ ଜଣାଶୁଣା) ର ସାନ୍ଦ୍ରତା ପ୍ରସ୍ତୁତ କରିବା ପାଇଁ, ପ୍ରଥମେ 50 ମିଗ୍ରା 100 ମିଲି ଜୀବାଣୁମୁକ୍ତ ଡିଷ୍ଟିଲଡ୍ ପାଣିରେ ଦ୍ରବୀଭୂତ କରାଯାଇଥିଲା। ତାପରେ ଷ୍ଟକ୍ ଦ୍ରବଣକୁ ତରଳ କରାଯାଇ ପରବର୍ତ୍ତୀ ପରୀକ୍ଷଣରେ ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇଥିଲା। ସଂକ୍ଷେପରେ, ଛଅଟି ସିରିଜ୍ L-ornithine ସାନ୍ଦ୍ରତା (12.5, 25, 50, 75, 100, ଏବଂ 125 ମିଗ୍ରା/ଲିଟର) ଭିଟ୍ରୋରେ ପରୀକ୍ଷଣ କରାଯାଇଥିଲା। ଏହା ବ୍ୟତୀତ, ଜୀବାଣୁମୁକ୍ତ ଡିଷ୍ଟିଲଡ୍ ପାଣିକୁ ଏକ ନକାରାତ୍ମକ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ (ମକ୍) ଭାବରେ ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇଥିଲା ଏବଂ ବାଣିଜ୍ୟିକ କବକନାଶକ "Rizolex-T" 50% ଓଦାଯୋଗ୍ୟ ପାଉଡର (ଟୋକ୍ଲୋଫସ୍-ମିଥାଇଲ୍ 20% + ଥିରାମ 30%; KZ-Kafr El Zayat Pesticides and Chemicals Company, Kafr El Zayat, Gharbia Governorate, Egypt) କୁ ଏକ ସକାରାତ୍ମକ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ ଭାବରେ ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇଥିଲା। ବାଣିଜ୍ୟିକ କବକନାଶକ "ରିଜୋଲେକ୍ସ-ଟି" ପାଞ୍ଚଟି ସାନ୍ଦ୍ରତା (୨, ୪, ୬, ୮ ଏବଂ ୧୦ ମିଗ୍ରା/ଲି) ରେ ଭିଟ୍ରୋରେ ପରୀକ୍ଷଣ କରାଯାଇଥିଲା।
ସାଧାରଣ ବିନ୍ କାଣ୍ଡ ଏବଂ କଡ଼ର ନମୁନା ଯାହା ଧଳା ଛାଞ୍ଚର ସାଧାରଣ ଲକ୍ଷଣ (ଆକ୍ରମଣ ହାର: 10-30%) ଦର୍ଶାଉଛି ବାଣିଜ୍ୟିକ ଫାର୍ମରୁ ସଂଗ୍ରହ କରାଯାଇଥିଲା। ଯଦିଓ ଅଧିକାଂଶ ସଂକ୍ରମିତ ଉଦ୍ଭିଦ ସାମଗ୍ରୀ ପ୍ରଜାତି/ପ୍ରକାର (ସମ୍ବେଦନଶୀଳ ବାଣିଜ୍ୟିକ ପ୍ରକାର ଗିଜା 3) ଦ୍ୱାରା ଚିହ୍ନଟ କରାଯାଇଥିଲା, ଅନ୍ୟଗୁଡ଼ିକ, ବିଶେଷକରି ସ୍ଥାନୀୟ ବଜାରରୁ ପ୍ରାପ୍ତ, ଅଜଣା ପ୍ରଜାତିର ଥିଲା। ସଂଗୃହିତ ସଂକ୍ରମିତ ସାମଗ୍ରୀଗୁଡ଼ିକୁ ପ୍ରଥମେ 0.5% ସୋଡିୟମ୍ ହାଇପୋକ୍ଲୋରାଇଟ୍ ଦ୍ରବଣ ସହିତ 3 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ ଜୀବାଣୁମୁକ୍ତ କରାଯାଇଥିଲା, ତା’ପରେ ଜୀବାଣୁମୁକ୍ତ ଡିଷ୍ଟିଲଡ୍ ପାଣିରେ ଅନେକ ଥର ଧୋଇ ଦିଆଯାଇଥିଲା ଏବଂ ଅତିରିକ୍ତ ପାଣି ବାହାର କରିବା ପାଇଁ ଜୀବାଣୁମୁକ୍ତ ଫିଲ୍ଟର ପେପରରେ ପୋଛି ପୋଛି ଦିଆଯାଇଥିଲା। ସଂକ୍ରମିତ ଅଙ୍ଗଗୁଡ଼ିକୁ ମଧ୍ୟମ ଟିସୁ (ସ୍ୱସ୍ଥ ଏବଂ ସଂକ୍ରମିତ ଟିସୁ ମଧ୍ୟରେ) ରୁ ଛୋଟ ଛୋଟ ଖଣ୍ଡରେ କାଟି ଆଳୁ ଡେକ୍ସଟ୍ରୋଜ୍ ଆଗର (PDA) ମାଧ୍ୟମରେ କଲଚର କରାଯାଇଥିଲା ଏବଂ ସ୍କ୍ଲେରୋଟିଆ ଗଠନକୁ ଉତ୍ତେଜିତ କରିବା ପାଇଁ 25 ± 2 °C ତାପମାତ୍ରାରେ 12 ଘଣ୍ଟା ଆଲୋକ/12 ଘଣ୍ଟା ଅନ୍ଧାର ଚକ୍ର ସହିତ 5 ଦିନ ପାଇଁ ଇନକ୍ୟୁବେଟ୍ କରାଯାଇଥିଲା। ମିଶ୍ରିତ କିମ୍ବା ଦୂଷିତ କଲଚରରୁ କବକ ଆଇସୋଲେଟ୍ଗୁଡ଼ିକୁ ବିଶୋଧିତ କରିବା ପାଇଁ ମାଇସେଲିଆଲ୍ ଟିପ୍ ପଦ୍ଧତି ମଧ୍ୟ ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇଥିଲା। ବିଶୋଧିତ କବକ ଆଇସୋଲେଟ୍ ପ୍ରଥମେ ଏହାର ସାଂସ୍କୃତିକ ରୂପଗତ ବୈଶିଷ୍ଟ୍ୟଗୁଡ଼ିକୁ ଆଧାର କରି ଚିହ୍ନଟ କରାଯାଇଥିଲା ଏବଂ ତା’ପରେ ଅଣୁବୀକ୍ଷଣିକ ବୈଶିଷ୍ଟ୍ୟଗୁଡ଼ିକୁ ଆଧାର କରି S. sclerotiorum ବୋଲି ନିଶ୍ଚିତ କରାଯାଇଥିଲା। ଶେଷରେ, ସମସ୍ତ ବିଶୋଧିତ ଆଇସୋଲେଟ୍‌ଗୁଡ଼ିକୁ ସମ୍ବେଦନଶୀଳ ସାଧାରଣ ବିନ୍ ପ୍ରକାର ଗିଜା 3 ରେ ରୋଗଜନିତତା ପାଇଁ ପରୀକ୍ଷା କରାଯାଇଥିଲା ଯାହା ଦ୍ୱାରା କୋଚ୍‌ଙ୍କ ଧାରଣା ପୂରଣ ହୋଇଥିଲା।
ଏହା ସହିତ, ହ୍ୱାଇଟ୍ ଏଟ୍ ଅଲ୍., 1990; ବାଟୁରୋ-ସିଏସ୍ନିୱସ୍କା ଏଟ୍ ଅଲ୍., 2017 ଦ୍ୱାରା ବର୍ଣ୍ଣିତ ଆଭ୍ୟନ୍ତରୀଣ ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିବ୍ଡ୍ ସ୍ପେସର୍ (ITS) ସିକୋଇନ୍ସିଂ ଉପରେ ଆଧାର କରି ସବୁଠାରୁ ଆକ୍ରମଣାତ୍ମକ S. ସ୍କ୍ଲେରୋଟିଓରମ୍ ଆଇସୋଲେଟ୍ (ଆଇସୋଲେଟ୍ #3) ଆହୁରି ନିଶ୍ଚିତ କରାଯାଇଥିଲା। ସଂକ୍ଷେପରେ, ଆଇସୋଲେଟ୍‌ଗୁଡ଼ିକୁ ଆଳୁ ଡେକ୍ସଟ୍ରୋଜ୍ ବ୍ରୋଥ୍ (PDB) ରେ କଲଚର କରାଯାଇଥିଲା ଏବଂ 5-7 ଦିନ ପାଇଁ 25 ± 2 °C ରେ ଇନକ୍ୟୁବେଟେଡ୍ କରାଯାଇଥିଲା। ତା'ପରେ ଫଙ୍ଗାଲ୍ ମାଇସେଲିୟମ୍ ସଂଗ୍ରହ କରାଯାଇଥିଲା, ଚିଜ୍କ୍ଲଥ୍ ମାଧ୍ୟମରେ ଫିଲ୍ଟର କରାଯାଇଥିଲା, ଜୀବାଣୁମୁକ୍ତ ପାଣିରେ ଦୁଇଥର ଧୋଇ ଦିଆଯାଇଥିଲା ଏବଂ ଜୀବାଣୁମୁକ୍ତ ଫିଲ୍ଟର ପେପର୍ ସହିତ ଶୁଖାଯାଇଥିଲା। କ୍ୱିକ୍-DNA™ ଫଙ୍ଗାଲ୍/ବ୍ୟାକ୍ଟେରିଆଲ୍ ମିନିପ୍ରେପ୍ କିଟ୍ (କୁରାମେଇ-ଇଜିଓକା, 1997; ଆଟାଲ୍ଲା ଏଟ୍ ଅଲ୍., 2022, 2024) ବ୍ୟବହାର କରି ଜେନୋମିକ୍ DNAକୁ ପୃଥକ କରାଯାଇଥିଲା। ତା'ପରେ ITS rDNA କ୍ଷେତ୍ରକୁ ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ପ୍ରାଇମର ପେୟାର ITS1/ITS4 (TCCGTAGGTGAACCTGCGG TCCTCCGCTTATTGATATGC; ଆଶାକରାଯାଇଥିବା ଆକାର: 540 bp) (Baturo-Ciesniewska et al., 2017) ବ୍ୟବହାର କରି ବୃଦ୍ଧି କରାଯାଇଥିଲା। ପରିଷ୍କୃତ PCR ଉତ୍ପାଦଗୁଡ଼ିକୁ କ୍ରମୀକରଣ ପାଇଁ ଦାଖଲ କରାଯାଇଥିଲା (Beijing Aoke Dingsheng Biotechnology Co., Ltd.)। ITS rDNA କ୍ରମଗୁଡ଼ିକୁ Sanger କ୍ରମ ପଦ୍ଧତି ବ୍ୟବହାର କରି ଦ୍ୱିଦିଗୀୟ ଭାବରେ କ୍ରମବଦ୍ଧ କରାଯାଇଥିଲା। BLASTn ସଫ୍ଟୱେର୍ ବ୍ୟବହାର କରି GenBank ଏବଂ National Center for Biotechnology Information (NCBI, http://www.ncbi.nlm.nih.gov/gene/) ରେ ଥିବା ସର୍ବଶେଷ ତଥ୍ୟ ସହିତ ଏକତ୍ରିତ କ୍ୱେରୀ କ୍ରମଗୁଡ଼ିକୁ ତୁଳନା କରାଯାଇଥିଲା। ମଲିକୁଲାର ଇଭୋଲ୍ୟୁସନାରୀ ଜେନେଟିକ୍ସ ଆନାଲିସିସ୍ ପ୍ୟାକେଜ୍ (MEGA-11; ସଂସ୍କରଣ 11) (କୁମାର et al., 2024) ରେ ClustalW ବ୍ୟବହାର କରି NCBI GenBank (ସପ୍ଲିମେଣ୍ଟାରୀ ଟେବୁଲ S1) ରେ ଥିବା ସର୍ବଶେଷ ତଥ୍ୟରୁ ପ୍ରାପ୍ତ 20ଟି ଅନ୍ୟ S. sclerotiorum strains/isolates ସହିତ କ୍ୱେରୀ କ୍ରମକୁ ତୁଳନା କରାଯାଇଥିଲା। ସର୍ବାଧିକ ସମ୍ଭାବନା ପଦ୍ଧତି ଏବଂ ସାଧାରଣ ସମୟ-ପ୍ରତିବର୍ତ୍ତନୀୟ ନ୍ୟୁକ୍ଲିଓଟାଇଡ୍ ପ୍ରତିସ୍ଥାପନ ମଡେଲ୍ (Nei ଏବଂ Kumar, 2000) ବ୍ୟବହାର କରି ବିବର୍ତ୍ତନମୂଳକ ବିଶ୍ଳେଷଣ କରାଯାଇଥିଲା। ସର୍ବାଧିକ ଲଗ୍-ସମ୍ଭାବନା ଥିବା ଗଛ ଦର୍ଶାଯାଇଛି। ପଡ଼ୋଶୀ-ଯୋଗ (NJ) ଗଛ (କୁମାର ଏବଂ ଅନ୍ୟମାନେ, 2024) ଏବଂ ସର୍ବାଧିକ ପାର୍ସିମୋନି (MP) ଗଛ ମଧ୍ୟରେ ଅଧିକ ଲଗ୍-ସମ୍ଭାବନା ଥିବା ଗଛକୁ ବାଛି ହ୍ୟୁରିଷ୍ଟିକ୍ ସନ୍ଧାନ ପାଇଁ ପ୍ରାରମ୍ଭିକ ଗଛ ଚୟନ କରାଯାଇଛି। ସାଧାରଣ ସମୟ-ପ୍ରତିବର୍ତ୍ତନୀୟ ମଡେଲ୍ (Nei ଏବଂ Kumar, 2000) ବ୍ୟବହାର କରି ଗଣନା କରାଯାଇଥିବା ଏକ ଯୋଡ଼ାୱାଇଜ୍ ଦୂରତା ମାଟ୍ରିକ୍ସ ବ୍ୟବହାର କରି NJ ଗଛ ନିର୍ମାଣ କରାଯାଇଥିଲା।
L-ଅର୍ନିଥିନ୍ ଏବଂ ଜୀବାଣୁନାଶକ "ରିଜୋଲେକ୍ସ-ଟି" ର ଆଣ୍ଟିବ୍ୟାକ୍ଟେରିଆ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ଆଗର ପ୍ରସାରଣ ପଦ୍ଧତି ଦ୍ୱାରା ଭିଟ୍ରୋରେ ନିର୍ଣ୍ଣୟ କରାଯାଇଥିଲା। ପଦ୍ଧତି: L-ଅର୍ନିଥିନ୍ (500 ମିଗ୍ରା/ଲି) ର ଷ୍ଟକ୍ ଦ୍ରବଣର ଉପଯୁକ୍ତ ପରିମାଣ ନିଅନ୍ତୁ ଏବଂ ଏହାକୁ 10 ମିଲି PDA ପୁଷ୍ଟିକର ମାଧ୍ୟମ ସହିତ ଭଲ ଭାବରେ ମିଶ୍ରଣ କରନ୍ତୁ ଯାହା ଯଥାକ୍ରମେ 12.5, 25, 50, 75, 100 ଏବଂ 125 ମିଗ୍ରା/ଲିଟର ଅନ୍ତିମ ସାନ୍ଦ୍ରତା ସହିତ ଦ୍ରବଣ ପ୍ରସ୍ତୁତ କରିବ। ନିୟନ୍ତ୍ରଣ ଭାବରେ ପାଞ୍ଚଟି କବକନାଶକ "ରିଜୋଲେକ୍ସ-ଟି" (2, 4, 6, 8 ଏବଂ 10 ମିଗ୍ରା/ଲିଟର) ଏବଂ ଜୀବାଣୁନାଶକ ଡିଷ୍ଟିଲଡ୍ ପାଣି ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇଥିଲା। ମାଧ୍ୟମ କଠିନ ହେବା ପରେ, 4 ମିମି ବ୍ୟାସର ସ୍କ୍ଲେରୋଟିନିଆ ସ୍କ୍ଲେରୋଟିଓରମ୍ କଲଚରର ଏକ ସଦ୍ୟ ପ୍ରସ୍ତୁତ ମାଇସେଲିଆଲ୍ ପ୍ଲଗ୍ ପେଟ୍ରି ଡିସ୍ ର କେନ୍ଦ୍ରକୁ ସ୍ଥାନାନ୍ତରିତ କରାଯାଇଥିଲା ଏବଂ 25±2°C ରେ କଲଚର କରାଯାଇଥିଲା ଯେପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ ମାଇସେଲିୟମ୍ ସମଗ୍ର ନିୟନ୍ତ୍ରଣ ପେଟ୍ରି ଡିସ୍ କୁ ଆଚ୍ଛାଦିତ କରି ନ ଥାଏ, ଯାହା ପରେ କବକ ବୃଦ୍ଧି ରେକର୍ଡ କରାଯାଇଥିଲା। ସମୀକରଣ 1 ବ୍ୟବହାର କରି S. sclerotiorum ର ରେଡିଆଲ୍ ବୃଦ୍ଧିର ଶତକଡ଼ା ପ୍ରତିରୋଧ ଗଣନା କରନ୍ତୁ:
ପରୀକ୍ଷଣଟି ଦୁଇଥର ପୁନରାବୃତ୍ତି କରାଯାଇଥିଲା, ପ୍ରତ୍ୟେକ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ/ପରୀକ୍ଷା ଗୋଷ୍ଠୀ ପାଇଁ ଛଅଟି ଜୈବିକ ପ୍ରତିକୃତି ଏବଂ ପ୍ରତ୍ୟେକ ଜୈବିକ ପ୍ରତିକୃତି ପାଇଁ ପାଞ୍ଚଟି ପାତ୍ର (ପ୍ରତି ପାତ୍ର ଦୁଇଟି ଗଛ) ସହିତ। ପରୀକ୍ଷଣ ଫଳାଫଳର ସଠିକତା, ନିର୍ଭରଯୋଗ୍ୟତା ଏବଂ ପୁନଃଉତ୍ପାଦନ ସୁନିଶ୍ଚିତ କରିବା ପାଇଁ ପ୍ରତ୍ୟେକ ଜୈବିକ ପ୍ରତିକୃତିକୁ ଦୁଇଥର (ଦୁଇଟି ବୈଷୟିକ ପ୍ରତିକୃତି) ବିଶ୍ଳେଷଣ କରାଯାଇଥିଲା। ଏହା ସହିତ, ଅର୍ଦ୍ଧ-ସର୍ବାଧିକ ନିରୋଧକ ସାନ୍ଦ୍ରତା (IC50) ଏବଂ IC99 (ପ୍ରେଣ୍ଟିସ୍, 1976) ଗଣନା କରିବା ପାଇଁ ପ୍ରୋବିଟ୍ ରିଗ୍ରେସନ୍ ବିଶ୍ଳେଷଣ ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇଥିଲା।
ଗ୍ରୀନହାଉସ୍ ପରିସ୍ଥିତିରେ L-ଅର୍ନିଥିନର ସମ୍ଭାବନା ମୂଲ୍ୟାଙ୍କନ କରିବା ପାଇଁ, ଦୁଇଟି କ୍ରମାଗତ ପାତ୍ର ପରୀକ୍ଷଣ କରାଯାଇଥିଲା। ସଂକ୍ଷେପରେ, ପାତ୍ରଗୁଡ଼ିକୁ ଜୀବାଣୁମୁକ୍ତ ମାଟି-ବାଲି ମାଟି (3:1) ସହିତ ପୂର୍ଣ୍ଣ କରାଯାଇଥିଲା ଏବଂ S. ସ୍କ୍ଲେରୋଟିଓରମ୍ ର ଏକ ସଦ୍ୟ ପ୍ରସ୍ତୁତ କଲଚର ସହିତ ଟୀକା ଦିଆଯାଇଥିଲା। ପ୍ରଥମେ, S. ସ୍କ୍ଲେରୋଟିଓରମ୍ (ଆଇସୋଲେଟ୍ #3) ର ସବୁଠାରୁ ଆକ୍ରମଣାତ୍ମକ ଆଇସୋଲେଟ୍ କୁ ଗୋଟିଏ ସ୍କ୍ଲେରୋଟିୟମ୍ କୁ ଅଧା କାଟି, PDA ଉପରେ ମୁହଁ ତଳକୁ ରଖି ଏବଂ ମାଇସେଲିଆଲ୍ ବୃଦ୍ଧିକୁ ଉତ୍ତେଜିତ କରିବା ପାଇଁ 25°C ରେ ନିରନ୍ତର ଅନ୍ଧାର (24 ଘଣ୍ଟା) ରେ 4 ଦିନ ପାଇଁ ଇନକ୍ୟୁବେଟ୍ କରି କଲଚର କରାଯାଇଥିଲା। ତା'ପରେ ଚାରୋଟି 5 ମିମି ବ୍ୟାସ ଆଗର ପ୍ଲଗ୍ କୁ ଆଗ ଧାରରୁ ନିଆଯାଇଥିଲା ଏବଂ 100 ଗ୍ରାମ ଗହମ ଏବଂ ଚାଉଳ କ୍ରାନର ଏକ ଜୀବାଣୁମୁକ୍ତ ମିଶ୍ରଣ (1:1, v/v) ସହିତ ଟୀକା ଦିଆଯାଇଥିଲା ଏବଂ ସମସ୍ତ ଫ୍ଲାସ୍କକୁ 5 ଦିନ ପାଇଁ 12 ଘଣ୍ଟା ଆଲୋକ / 12 ଘଣ୍ଟା ଅନ୍ଧାର ଚକ୍ରରେ 25 ± 2 °C ରେ ଟୀକା ଦିଆଯାଇଥିଲା ଯାହା ଦ୍ୱାରା ସ୍କ୍ଲେରୋଟିଆ ଗଠନକୁ ଉତ୍ସାହିତ କରାଯାଇପାରିବ। ମାଟି ଯୋଡିବା ପୂର୍ବରୁ ସମନ୍ୱୟ ସୁନିଶ୍ଚିତ କରିବା ପାଇଁ ସମସ୍ତ ଫ୍ଲାସ୍କର ବିଷୟବସ୍ତୁକୁ ଭଲ ଭାବରେ ମିଶ୍ରିତ କରାଯାଇଥିଲା। ତା'ପରେ, ରୋଗଜୀବାଣୁର ନିରନ୍ତର ସାନ୍ଦ୍ରତା ସୁନିଶ୍ଚିତ କରିବା ପାଇଁ ପ୍ରତ୍ୟେକ ପାତ୍ରରେ 100 ଗ୍ରାମ କଲୋନିଲାଇଜିଂ ବ୍ରାନ ମିଶ୍ରଣ ଯୋଡା ଯାଇଥିଲା। କବକ ବୃଦ୍ଧିକୁ ସକ୍ରିୟ କରିବା ପାଇଁ ଟୀକା ଦିଆଯାଇଥିବା ପାତ୍ରଗୁଡ଼ିକୁ ପାଣି ଦିଆଯାଇଥିଲା ଏବଂ 7 ଦିନ ପାଇଁ ଗ୍ରୀନହାଉସ ପରିସ୍ଥିତିରେ ରଖାଯାଇଥିଲା।
ପ୍ରତ୍ୟେକ ପାତ୍ରରେ ଗିଜା 3 ପ୍ରକାରର ପାଞ୍ଚଟି ବିହନ ବୁଣାଯାଇଥିଲା। L-ornithine ଏବଂ Fungicide Rizolex-T ସହିତ ଚିକିତ୍ସା କରାଯାଇଥିବା ପାତ୍ର ପାଇଁ, ଜୀବାଣୁମୁକ୍ତ ବିହନଗୁଡ଼ିକୁ ପ୍ରଥମେ ଦୁଇଟି ଯୌଗିକର ଜଳୀୟ ଦ୍ରବଣରେ ପ୍ରାୟ 250 mg/L ଏବଂ 50 mg/L ର ଅନ୍ତିମ IC99 ସାନ୍ଦ୍ରତା ସହିତ ଦୁଇ ଘଣ୍ଟା ପାଇଁ ବୁଣାଯାଇଥିଲା, ଏବଂ ତାପରେ ବୁଣା ପୂର୍ବରୁ ଗୋଟିଏ ଘଣ୍ଟା ପାଇଁ ବାୟୁରେ ଶୁଖାଯାଇଥିଲା। ଅନ୍ୟପକ୍ଷରେ, ନକାରାତ୍ମକ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ ଭାବରେ ବିହନଗୁଡ଼ିକୁ ଜୀବାଣୁମୁକ୍ତ ଡିଷ୍ଟିଲେଡ୍ ପାଣିରେ ବୁଣାଯାଇଥିଲା। 10 ଦିନ ପରେ, ପ୍ରଥମ ପାଣି ଦେବା ପୂର୍ବରୁ, ଚାରାଗୁଡ଼ିକୁ ପତଳା କରାଯାଇଥିଲା, ପ୍ରତ୍ୟେକ ପାତ୍ରରେ କେବଳ ଦୁଇଟି ସୁନ୍ଦର ଚାରା ଛାଡି ଦିଆଯାଇଥିଲା। ଏହା ସହିତ, S. sclerotiorum ସହିତ ସଂକ୍ରମଣ ସୁନିଶ୍ଚିତ କରିବା ପାଇଁ, ସମାନ ବିକାଶ ପର୍ଯ୍ୟାୟ (10 ଦିନ) ରେ ବିନ୍ ଗଛର କାଣ୍ଡକୁ ଏକ ଜୀବାଣୁମୁକ୍ତ ସ୍କାଲ୍ପେଲ୍ ବ୍ୟବହାର କରି ଦୁଇଟି ଭିନ୍ନ ସ୍ଥାନରେ କାଟି ଦିଆଯାଇଥିଲା ଏବଂ ପ୍ରତ୍ୟେକ କ୍ଷତରେ ପ୍ରାୟ 0.5 ଗ୍ରାମ କଲୋନିଜିଂ ବ୍ରାନ୍ ମିଶ୍ରଣ ରଖାଯାଇଥିଲା, ତାପରେ ସମସ୍ତ ଟୀକାକୃତ ଗଛରେ ସଂକ୍ରମଣ ଏବଂ ରୋଗ ବିକାଶକୁ ଉତ୍ତେଜିତ କରିବା ପାଇଁ ଉଚ୍ଚ ଆର୍ଦ୍ରତା ଦିଆଯାଇଥିଲା। ନିୟନ୍ତ୍ରଣ ଗଛଗୁଡ଼ିକୁ ସମାନ ଭାବରେ କ୍ଷତ କରାଯାଇଥିଲା ଏବଂ ସମାନ ପରିମାଣର (0.5 ଗ୍ରାମ) ଜୀବାଣୁହୀନ, ଅଣ-କଲୋନାଇଜଡ୍ ବ୍ରାନ୍ ମିଶ୍ରଣକୁ କ୍ଷତରେ ରଖାଯାଇଥିଲା ଏବଂ ରୋଗ ବିକାଶ ପାଇଁ ପରିବେଶକୁ ଅନୁକରଣ କରିବା ଏବଂ ଚିକିତ୍ସା ଗୋଷ୍ଠୀ ମଧ୍ୟରେ ସ୍ଥିରତା ସୁନିଶ୍ଚିତ କରିବା ପାଇଁ ଉଚ୍ଚ ଆର୍ଦ୍ରତାରେ ରଖା ଯାଇଥିଲା।
ଚିକିତ୍ସା ପଦ୍ଧତି: ବିନ୍ ଚାରାଗୁଡ଼ିକୁ 500 ମିଲି ଜଳୀୟ ଦ୍ରବଣ L-ଅର୍ନିଥାଇନ୍ (250 ମିଗ୍ରା/ଲି) କିମ୍ବା କବକନାଶକ Rizolex-T (50 ମିଗ୍ରା/ଲି) ସହିତ ମାଟିରେ ଜଳସେଚନ କରି ପାଣି ଦିଆଯାଇଥିଲା, ତା’ପରେ 10 ଦିନ ବ୍ୟବଧାନରେ ତିନିଥର ଚିକିତ୍ସା ପୁନରାବୃତ୍ତି କରାଯାଇଥିଲା। ପ୍ଲେସିବୋ-ଚିକିତ୍ସା ନିୟନ୍ତ୍ରଣଗୁଡ଼ିକୁ 500 ମିଲି ଜୀବାଣୁମୁକ୍ତ ଡିଷ୍ଟିଲଡ୍ ପାଣି ସହିତ ଜଳସେଚନ କରାଯାଇଥିଲା। ସମସ୍ତ ଚିକିତ୍ସା ସବୁଜଗୃହ ପରିସ୍ଥିତିରେ (25 ± 2°C, 75 ± 1% ଆପେକ୍ଷିକ ଆର୍ଦ୍ରତା, ଏବଂ 8 ଘଣ୍ଟା ଆଲୋକ/16 ଘଣ୍ଟା ଅନ୍ଧାରର ଫଟୋପିରିଅଡ୍) କରାଯାଇଥିଲା। ସମସ୍ତ ପାତ୍ରଗୁଡ଼ିକୁ ପ୍ରତି ଦୁଇ ପାକ୍ଷିକ ପାଣି ଦିଆଯାଇଥିଲା ଏବଂ ପ୍ରତି ମାସରେ ଏକ ସନ୍ତୁଳିତ NPK ସାର (20-20-20, 3.6% ସଲଫର ଏବଂ TE ମାଇକ୍ରୋଏଲିମେଣ୍ଟ ସହିତ; ଜୈନ୍ ସିଡ୍ସ, ଇଜିପ୍ଟ) ସହିତ 3-4 ଗ୍ରାମ/ଲି ସାନ୍ଦ୍ରତାରେ ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ କିସମର ସୁପାରିଶ ଏବଂ ନିର୍ମାତାଙ୍କ ନିର୍ଦ୍ଦେଶ ଅନୁଯାୟୀ ପତ୍ର ସିଞ୍ଚନ ଦ୍ୱାରା ଚିକିତ୍ସା କରାଯାଇଥିଲା। ଅନ୍ୟଥା ଉଲ୍ଲେଖ ନ ଥିଲେ, ସମ୍ପୂର୍ଣ୍ଣ ବିସ୍ତାରିତ ପରିପକ୍ୱ ପତ୍ର (ଉପରରୁ ଦ୍ୱିତୀୟ ଏବଂ ତୃତୀୟ ପତ୍ର) ପ୍ରତ୍ୟେକ ଜୈବିକ ପ୍ରତିକୃତିରୁ 72 ଘଣ୍ଟା ପରବର୍ତ୍ତୀ ଚିକିତ୍ସା (hpt) ରେ ସଂଗ୍ରହ କରାଯାଇଥିଲା, ଏକତ୍ରିତ କରାଯାଇଥିଲା, ପୁଲ୍ କରାଯାଇଥିଲା ଏବଂ -80 °C ରେ ସଂରକ୍ଷଣ କରାଯାଇଥିଲା ଯାହା ମଧ୍ୟରେ ଅକ୍ସିଡେଟିଭ ଚାପ ସୂଚକଗୁଡ଼ିକର ସିଟୁ ହିଷ୍ଟୋକେମିକାଲ୍ ସ୍ଥାନୀୟକରଣ, ଲିପିଡ୍ ପେରୋକ୍ସିଡେସନ୍, ଏଞ୍ଜାଇମାଟିକ୍ ଏବଂ ଅଣ-ଏଞ୍ଜାଇମାଟିକ୍ ଆଣ୍ଟିଅକ୍ସିଡାଣ୍ଟ ଏବଂ ଜିନ୍ ପ୍ରକାଶନ ଅନ୍ତର୍ଭୁକ୍ତ, କିନ୍ତୁ ସୀମିତ ନୁହେଁ।
ଟେରାନ୍ ଏଟ୍ ଅଲ୍ (2006) ଦ୍ୱାରା ପରିବର୍ତ୍ତିତ ପେଟଜୋଲ୍ଟ ଏବଂ ଡିକସନ୍ ସ୍କେଲ୍ (1996) ଉପରେ ଆଧାରିତ 1-9 (ପରିପୂରକ ସାରଣୀ S2) ସ୍କେଲ୍ ବ୍ୟବହାର କରି ସାପ୍ତାହିକ 21 ଦିନ ପରେ ଇନୋକୁଲେସନ୍ (dpi) ମୂଲ୍ୟାଙ୍କନ କରାଯାଇଥିଲା। ସଂକ୍ଷେପରେ, ବିନ୍ ଗଛର କାଣ୍ଡ ଏବଂ ଶାଖାଗୁଡ଼ିକୁ ଇନୋକୁଲେସନ୍ ବିନ୍ଦୁରୁ ଆରମ୍ଭ କରି ଇଣ୍ଟରନୋଡ୍ ଏବଂ ନୋଡ୍ ସହିତ କ୍ଷତର ଅଗ୍ରଗତି ଅନୁସରଣ କରାଯାଇଥିଲା। ତା'ପରେ ଇନୋକୁଲେସନ୍ ବିନ୍ଦୁରୁ କାଣ୍ଡ କିମ୍ବା ଶାଖା ସହିତ ଦୂରତମ ବିନ୍ଦୁ ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ କ୍ଷତର ଦୂରତା ମାପ କରାଯାଇଥିଲା ଏବଂ କ୍ଷତର ସ୍ଥାନ ଉପରେ ଆଧାର କରି 1-9 ସ୍କୋର ଦିଆଯାଇଥିଲା, ଯେଉଁଠାରେ (1) ଇନୋକୁଲେସନ୍ ବିନ୍ଦୁ ନିକଟରେ କୌଣସି ଦୃଶ୍ୟମାନ ସଂକ୍ରମଣ ସୂଚିତ କରିନଥିଲା ଏବଂ (2-9) କ୍ଷତର ଆକାରରେ ଧୀରେ ଧୀରେ ବୃଦ୍ଧି ଏବଂ ନୋଡ୍ / ଇଣ୍ଟରନୋଡ୍ ସହିତ ଅଗ୍ରଗତି ସୂଚାଇଥିଲା (ପରିପୂରକ ସାରଣୀ S2)। ତା'ପରେ ସୂତ୍ର 2 ବ୍ୟବହାର କରି ଧଳା ଛାଞ୍ଚ ସଂକ୍ରମଣ ତୀବ୍ରତାକୁ ପ୍ରତିଶତରେ ରୂପାନ୍ତରିତ କରାଯାଇଥିଲା:
ଏହା ସହିତ, ରୋଗ ପ୍ରଗତି କର୍ଭ (AUDPC) ଅନ୍ତର୍ଗତ କ୍ଷେତ୍ରଫଳ ସୂତ୍ର (ଶାନର ଏବଂ ଫିନି, 1977) ବ୍ୟବହାର କରି ଗଣନା କରାଯାଇଥିଲା, ଯାହାକୁ ସମ୍ପ୍ରତି ସମୀକରଣ 3 ବ୍ୟବହାର କରି ସାଧାରଣ ବିନ୍ ର ଧଳା ପଚା ପାଇଁ ଅନୁକୂଳିତ କରାଯାଇଥିଲା (ଚୌହାନ ଏବଂ ଅନ୍ୟାନ୍ୟ, 2020):
ଯେଉଁଠାରେ Yi = ti ସମୟରେ ରୋଗର ତୀବ୍ରତା, Yi+1 = ପରବର୍ତ୍ତୀ ସମୟରେ ରୋଗର ତୀବ୍ରତା ti+1, ti = ପ୍ରଥମ ମାପର ସମୟ (ଦିନରେ), ti+1 = ପରବର୍ତ୍ତୀ ମାପର ସମୟ (ଦିନରେ), n = ମୋଟ ସମୟ ବିନ୍ଦୁ କିମ୍ବା ପର୍ଯ୍ୟବେକ୍ଷଣ ବିନ୍ଦୁ ସଂଖ୍ୟା। ସମସ୍ତ ଜୈବିକ ପ୍ରତିକୃତିରେ ଗଛର ଉଚ୍ଚତା (ସେମି), ପ୍ରତି ଗଛର ଶାଖା ସଂଖ୍ୟା ଏବଂ ପ୍ରତି ଗଛର ପତ୍ର ସଂଖ୍ୟା ସମେତ ବିନ୍ ଗଛର ବୃଦ୍ଧି ପାରାମିଟରଗୁଡ଼ିକୁ ସପ୍ତାହରେ 21 ଦିନ ପାଇଁ ରେକର୍ଡ କରାଯାଇଥିଲା।
ପ୍ରତ୍ୟେକ ଜୈବିକ ପ୍ରତିକୃତିରେ, ପତ୍ର ନମୁନା (ଉପରରୁ ଦ୍ୱିତୀୟ ଏବଂ ତୃତୀୟ ସମ୍ପୂର୍ଣ୍ଣ ବିକଶିତ ପତ୍ର) ଚିକିତ୍ସା ପରେ 45 ତମ ଦିନରେ (ଶେଷ ଚିକିତ୍ସାର 15 ଦିନ ପରେ) ସଂଗ୍ରହ କରାଯାଇଥିଲା। ପ୍ରତ୍ୟେକ ଜୈବିକ ପ୍ରତିକୃତିରେ ପାଞ୍ଚଟି ପାତ୍ର (ପ୍ରତି ପାତ୍ରରେ ଦୁଇଟି ଗଛ) ଥିଲା। ଅନ୍ଧାରରେ 4 °C ତାପମାତ୍ରାରେ 80% ଆସିଟୋନ ବ୍ୟବହାର କରି ଆଲୋକସଂଶ୍ଳେଷଣାତ୍ମକ ରଙ୍ଗକର୍ମ (କ୍ଲୋରୋଫିଲ୍ a, କ୍ଲୋରୋଫିଲ୍ b ଏବଂ କାରୋଟିନୋଇଡ୍) ନିଷ୍କାସନ ପାଇଁ ପ୍ରାୟ 500 ମିଗ୍ରା ଚୂର୍ଣ୍ଣ ହୋଇଥିବା ଟିସୁ ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇଥିଲା। 24 ଘଣ୍ଟା ପରେ, ନମୁନାଗୁଡ଼ିକୁ ସେଣ୍ଟ୍ରିଫ୍ୟୁଜ୍ କରାଯାଇଥିଲା ଏବଂ ତିନୋଟି ଭିନ୍ନ ତରଙ୍ଗଦୈର୍ଘ୍ୟ (A470, A646 ଏବଂ A663 nm) ରେ ଅବଶୋଷଣ ମାପ କରି (ଲିଚ୍ଟେନ୍ଥାଲର, 1987) ପଦ୍ଧତି ଅନୁଯାୟୀ ଏକ UV-160A ସ୍ପେକ୍ଟ୍ରୋଫୋଟୋମିଟର (ଶିମାଡଜୁ କର୍ପୋରେସନ, ଜାପାନ) ବ୍ୟବହାର କରି ରଙ୍ଗିମେଟ୍ରିକ ଭାବରେ କ୍ଲୋରୋଫିଲ୍ a, କ୍ଲୋରୋଫିଲ୍ b ଏବଂ କାରୋଟିନୋଇଡ୍ ବିଷୟବସ୍ତୁ ନିର୍ଣ୍ଣୟ ପାଇଁ ସୁପରନାଟାଣ୍ଟ ସଂଗ୍ରହ କରାଯାଇଥିଲା। ଶେଷରେ, ଲିଚ୍ଟେନ୍ଥାଲର (1987) ଦ୍ୱାରା ବର୍ଣ୍ଣିତ ନିମ୍ନଲିଖିତ ସୂତ୍ର 4-6 ବ୍ୟବହାର କରି ଆଲୋକସଂଶ୍ଳେଷଣାତ୍ମକ ରଙ୍ଗକର୍ମର ବିଷୟବସ୍ତୁ ଗଣନା କରାଯାଇଥିଲା।
ଚିକିତ୍ସା ପରେ 72 ଘଣ୍ଟା (hpt) ରେ, ହାଇଡ୍ରୋଜେନ ପେରକ୍ସାଇଡ୍ (H2O2) ଏବଂ ସୁପରଅକ୍ସାଇଡ୍ ଆନାୟନ (O2•−) ର ସିଟୁ ହିଷ୍ଟୋକେମିକାଲ୍ ସ୍ଥାନୀୟକରଣ ପାଇଁ ପ୍ରତ୍ୟେକ ଜୈବିକ ପ୍ରତିକୃତିରୁ ପତ୍ର (ଉପରରୁ ଦ୍ୱିତୀୟ ଏବଂ ତୃତୀୟ ସମ୍ପୂର୍ଣ୍ଣ ବିକଶିତ ପତ୍ର) ସଂଗ୍ରହ କରାଯାଇଥିଲା। ପ୍ରତ୍ୟେକ ଜୈବିକ ପ୍ରତିକୃତିରେ ପାଞ୍ଚଟି ପାତ୍ର (ପ୍ରତି ପାତ୍ରରେ ଦୁଇଟି ଗଛ) ଥିଲା। ପଦ୍ଧତିର ସଠିକତା, ନିର୍ଭରଯୋଗ୍ୟତା ଏବଂ ପୁନଃଉତ୍ପାଦନ ସୁନିଶ୍ଚିତ କରିବା ପାଇଁ ପ୍ରତ୍ୟେକ ଜୈବିକ ପ୍ରତିକୃତିକୁ ଡୁପ୍ଲିକେଟ (ଦୁଇଟି ବୈଷୟିକ ପ୍ରତିକୃତି) ରେ ବିଶ୍ଳେଷଣ କରାଯାଇଥିଲା। ରୋମେରୋ-ପୁଏର୍ଟାସ ଏଟ୍ ଅଲ୍ (2004) ଏବଂ ଆଡାମ ଏଟ୍ ଅଲ୍ (1989) ଦ୍ୱାରା ବର୍ଣ୍ଣିତ ପଦ୍ଧତି ଅନୁସରଣ କରି ଯଥାକ୍ରମେ 0.1% 3,3′-ଡାୟାମିନୋବେଞ୍ଜିଡିନ୍ (DAB; ସିଗମା-ଆଲଡ୍ରିଚ୍, ଡାର୍ମଷ୍ଟାଡ୍, ଜର୍ମାନୀ) କିମ୍ବା ନାଇଟ୍ରୋବ୍ଲୁ ଟେଟ୍ରାଜୋଲିୟମ୍ (NBT; ସିଗମା-ଆଲଡ୍ରିଚ୍, ଡାର୍ମଷ୍ଟାଡ୍, ଜର୍ମାନୀ) ବ୍ୟବହାର କରି H2O2 ଏବଂ O2•− ନିର୍ଣ୍ଣୟ କରାଯାଇଥିଲା, ସାମାନ୍ୟ ପରିବର୍ତ୍ତନ ସହିତ। ସିଟୁରେ H2O2 ର ହିଷ୍ଟୋକେମିକାଲ୍ ସ୍ଥାନୀୟକରଣ ପାଇଁ, ଲିଫଲେଟଗୁଡ଼ିକୁ 0.1% DAB ସହିତ 10 mM Tris ବଫର (pH 7.8) ରେ ଭ୍ୟାକ୍ୟୁମ୍ ଇନଫ୍ଲିଟେଡ୍ କରାଯାଇଥିଲା ଏବଂ ତାପରେ ଆଲୋକରେ କୋଠରୀ ତାପମାତ୍ରାରେ 60 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ ଇନଫ୍ଲିଟେଡ୍ କରାଯାଇଥିଲା। ଲିଫଲେଟଗୁଡ଼ିକୁ 0.15% (v/v) TCA ରେ 4:1 (v/v) ଇଥାନଲ୍:କ୍ଲୋରୋଫର୍ମ (ଆଲ୍-ଗୋମହୋରିଆ ଫାର୍ମାସ୍ୟୁଟିକାଲ୍ସ ଆଣ୍ଡ୍ ମେଡିକାଲ୍ ସପ୍ଲାଏଜ୍, କାଇରୋ, ଇଜିପ୍ଟ) ରେ ବ୍ଲିଚ୍ କରାଯାଇଥିଲା ଏବଂ ତାପରେ ସେଗୁଡ଼ିକ ଅନ୍ଧାର ହେବା ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ ଆଲୋକରେ ପ୍ରକାଶିତ କରାଯାଇଥିଲା। ସେହିପରି, ସିଟୁରେ O2•− ର ହିଷ୍ଟୋକେମିକାଲ୍ ସ୍ଥାନୀୟକରଣ ପାଇଁ 0.1 w/v % HBT ଧାରଣ କରୁଥିବା 10 mM ପୋଟାସିୟମ୍ ଫସଫେଟ୍ ବଫର (pH 7.8) ସହିତ ଭାକ୍ୟୁମ୍ ଇନଫ୍ଲିଟେଡ୍ କରାଯାଇଥିଲା। ଲିଫଲେଟଗୁଡ଼ିକୁ କୋଠରୀ ତାପମାତ୍ରାରେ 20 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ ଇନଫ୍ଲିଟେଡ୍ କରାଯାଇଥିଲା, ତାପରେ ଉପରୋକ୍ତ ଭାବରେ ବ୍ଲିଚ୍ କରାଯାଇଥିଲା, ଏବଂ ତାପରେ ଗାଢ଼ ନୀଳ/ବାଇଗଣୀ ଦାଗ ଦେଖାଯିବା ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ ଆଲୋକିତ କରାଯାଇଥିଲା। ଫଳାଫଳରେ ବାଦାମୀ (H2O2 ସୂଚକ ଭାବରେ) କିମ୍ବା ନୀଳ-ବାଇଗଣୀ (O2•− ସୂଚକ ଭାବରେ) ରଙ୍ଗର ତୀବ୍ରତା ପ୍ରତିଛବି ପ୍ରକ୍ରିୟାକରଣ ପ୍ୟାକେଜ୍ ImageJ (http://fiji.sc; ୭ ମାର୍ଚ୍ଚ ୨୦୨୪ରେ ପ୍ରବେଶ କରାଯାଇଛି) ର ଫିଜି ସଂସ୍କରଣ ବ୍ୟବହାର କରି ମୂଲ୍ୟାଙ୍କନ କରାଯାଇଥିଲା।
ମାଲୋଣ୍ଡିଆଲଡିହାଇଡ୍ (MDA; ଲିପିଡ୍ ପେରୋକ୍ସିଡେସନ୍‌ର ଏକ ମାର୍କର ଭାବରେ) ସାମାନ୍ୟ ପରିବର୍ତ୍ତନ ସହିତ Du ଏବଂ Bramlage (1992) ପଦ୍ଧତି ଅନୁଯାୟୀ ନିର୍ଣ୍ଣୟ କରାଯାଇଥିଲା। ପ୍ରତ୍ୟେକ ଜୈବିକ ପ୍ରତିକୃତି (ଉପରରୁ ଦ୍ୱିତୀୟ ଏବଂ ତୃତୀୟ ସମ୍ପୂର୍ଣ୍ଣ ବିକଶିତ ପତ୍ର) ରୁ ପତ୍ର ଚିକିତ୍ସା ପରେ 72 ଘଣ୍ଟା (hpt) ସଂଗ୍ରହ କରାଯାଇଥିଲା। ପ୍ରତ୍ୟେକ ଜୈବିକ ପ୍ରତିକୃତିରେ ପାଞ୍ଚଟି ପାତ୍ର (ପ୍ରତି ପାତ୍ରରେ ଦୁଇଟି ଗଛ) ଅନ୍ତର୍ଭୁକ୍ତ ଥିଲା। ପଦ୍ଧତିର ସଠିକତା, ନିର୍ଭରଯୋଗ୍ୟତା ଏବଂ ପୁନଃଉତ୍ପାଦନ ନିଶ୍ଚିତ କରିବା ପାଇଁ ପ୍ରତ୍ୟେକ ଜୈବିକ ପ୍ରତିକୃତିକୁ ଡୁପ୍ଲିକେଟ (ଦୁଇଟି ବୈଷୟିକ ପ୍ରତିକୃତି) ଭାବରେ ବିଶ୍ଳେଷଣ କରାଯାଇଥିଲା। ସଂକ୍ଷେପରେ, 0.01% ବ୍ୟୁଟାଇଲେଟେଡ୍ ହାଇଡ୍ରୋକ୍ସିଟୋଲୁଏନ୍ (BHT; ସିଗମା-ଆଲଡ୍ରିଚ୍, ସେଣ୍ଟ ଲୁଇସ୍, MO, USA) ସହିତ MDA ନିଷ୍କାସନ ପାଇଁ 0.5 ଗ୍ରାମ ଭୂମି ପତ୍ର ଟିସୁ ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇଥିଲା। ତା'ପରେ ଏକ UV-160A ସ୍ପେକ୍ଟ୍ରୋଫୋଟୋମିଟର (ଶିମାଡଜୁ କର୍ପୋରେସନ, ଜାପାନ) ବ୍ୟବହାର କରି 532 ଏବଂ 600 nm ରେ ଅବଶୋଷଣ ମାପ କରି ସୁପରନାଟାଣ୍ଟରେ MDA ବିଷୟବସ୍ତୁକୁ ରଙ୍ଗମିତ୍ରିକ ଭାବରେ ନିର୍ଣ୍ଣୟ କରାଯାଇଥିଲା ଏବଂ ତା'ପରେ nmol g−1 FW ଭାବରେ ପ୍ରକାଶ କରାଯାଇଥିଲା।
ଅଣ-ଏନଜାଇମାଟିକ୍ ଏବଂ ଏନଜାଇମାଟିକ୍ ଆଣ୍ଟିଅକ୍ସିଡାଣ୍ଟର ମୂଲ୍ୟାଙ୍କନ ପାଇଁ, ପ୍ରତ୍ୟେକ ଜୈବିକ ପ୍ରତିକୃତିରୁ ପତ୍ର (ଉପରରୁ ଦ୍ୱିତୀୟ ଏବଂ ତୃତୀୟ ସମ୍ପୂର୍ଣ୍ଣ ବିକଶିତ ପତ୍ର) 72 ଘଣ୍ଟା ପରେ ଚିକିତ୍ସା (hpt) ରେ ସଂଗ୍ରହ କରାଯାଇଥିଲା। ପ୍ରତ୍ୟେକ ଜୈବିକ ପ୍ରତିକୃତିରେ ପାଞ୍ଚଟି ପାତ୍ର (ପ୍ରତି ପାତ୍ରରେ ଦୁଇଟି ଗଛ) ଥିଲା। ପ୍ରତ୍ୟେକ ଜୈବିକ ନମୁନାକୁ ଡୁପ୍ଲିକେଟରେ ବିଶ୍ଳେଷଣ କରାଯାଇଥିଲା (ଦୁଇଟି ବୈଷୟିକ ନମୁନା)। ଦୁଇଟି ପତ୍ରକୁ ତରଳ ନାଇଟ୍ରୋଜେନ୍ ସହିତ ଗୁଣ୍ଡ କରାଯାଇଥିଲା ଏବଂ ଏଞ୍ଜାଇମାଟିକ୍ ଏବଂ ଅଣ-ଏନଜାଇମାଟିକ୍ ଆଣ୍ଟିଅକ୍ସିଡାଣ୍ଟ, ମୋଟ ଆମିନୋ ଏସିଡ୍, ପ୍ରୋଲାଇନ୍ ବିଷୟବସ୍ତୁ, ଜିନ୍ ପ୍ରକାଶନ ଏବଂ ଅକ୍ସାଲେଟ୍ ପରିମାଣ ନିର୍ଣ୍ଣୟ ପାଇଁ ସିଧାସଳଖ ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇଥିଲା।
କାହକୋନେନ୍ ଏଟ୍ ଅଲ୍ (୧୯୯୯) ଦ୍ୱାରା ବର୍ଣ୍ଣିତ ପଦ୍ଧତିର ସାମାନ୍ୟ ପରିବର୍ତ୍ତନ ସହିତ ଫଲିନ୍-ସିଓକାଲ୍ଟେଉ ରିଏଜେଣ୍ଟ (ସିଗ୍ମା-ଆଲଡ୍ରିଚ୍, ସେଣ୍ଟ ଲୁଇସ୍, MO, USA) ବ୍ୟବହାର କରି ମୋଟ ଦ୍ରବଣୀୟ ଫେନୋଲିକ୍ସ ନିର୍ଣ୍ଣୟ କରାଯାଇଥିଲା। ସଂକ୍ଷେପରେ, ପ୍ରାୟ ୦.୧ ଗ୍ରାମ ସମଜାତ ପତ୍ର ଟିସୁକୁ ୨୦ ମିଲି ୮୦% ମିଥାନଲ୍ ସହିତ ୨୪ ଘଣ୍ଟା ପାଇଁ ଅନ୍ଧାରରେ ବାହାର କରାଯାଇଥିଲା ଏବଂ ସେଣ୍ଟ୍ରିଫ୍ୟୁଗେସନ୍ ପରେ ସୁପରନାଟାଣ୍ଟ ସଂଗ୍ରହ କରାଯାଇଥିଲା। ନମୁନା ନିର୍ଗମର ୦.୧ ମିଲି ୦.୫ ମିଲି ଫଲିନ୍-ସିଓକାଲ୍ଟେଉ ରିଏଜେଣ୍ଟ (୧୦%) ସହିତ ମିଶ୍ରିତ କରାଯାଇଥିଲା, ୩୦ ସେକେଣ୍ଡ ପାଇଁ ହଲାଇ ୫ ମିନିଟ୍ ପାଇଁ ଅନ୍ଧାରରେ ଛାଡି ଦିଆଯାଇଥିଲା। ତା’ପରେ ପ୍ରତ୍ୟେକ ଟ୍ୟୁବରେ ୦.୫ ମିଲି ୨୦% ସୋଡିୟମ୍ କାର୍ବୋନେଟ୍ ଦ୍ରବଣ (Na2CO3; ଆଲ୍-ଗୋମହୋରିଆ ଫାର୍ମାସ୍ୟୁଟିକାଲ୍ସ ଆଣ୍ଡ୍ ମେଡିକାଲ୍ ସପ୍ଲାଏଜ୍ କମ୍ପାନୀ, କାଇରୋ, ଇଜିପ୍ଟ) ଯୋଡା ଯାଇଥିଲା, ଭଲ ଭାବରେ ମିଶ୍ରିତ ହୋଇଥିଲା ଏବଂ ଅନ୍ଧାରରେ କୋଠରୀ ତାପମାତ୍ରାରେ ୧ ଘଣ୍ଟା ପାଇଁ ଇନକ୍ୟୁବେଟେଡ୍ କରାଯାଇଥିଲା। ଇନକ୍ୟୁବେସନ୍ ପରେ, ଏକ UV-160A ସ୍ପେକ୍ଟ୍ରୋଫୋଟୋମିଟର (ଶିମାଡଜୁ କର୍ପୋରେସନ, ଜାପାନ) ବ୍ୟବହାର କରି ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ମିଶ୍ରଣର ଶୋଷଣ 765 nm ରେ ମାପ କରାଯାଇଥିଲା। ନମୁନା ନିର୍ଗମନରେ ମୋଟ ଦ୍ରବଣୀୟ ଫିନୋଲର ସାନ୍ଦ୍ରତା ଏକ ଗାଲିକ୍ ଏସିଡ୍ କାଲିବ୍ରେସନ୍ କର୍ଭ (ଫିସର ସାଇଣ୍ଟିଫିକ୍, ହାମ୍ପଟନ୍, NH, USA) ବ୍ୟବହାର କରି ନିର୍ଣ୍ଣୟ କରାଯାଇଥିଲା ଏବଂ ପ୍ରତି ଗ୍ରାମ ତାଜା ଓଜନ (mg GAE g-1 ତାଜା ଓଜନ) ପାଇଁ ମିଲିଗ୍ରାମ ଗାଲିକ୍ ଏସିଡ୍ ସମତୁଲ୍ୟ ଭାବରେ ପ୍ରକାଶ କରାଯାଇଥିଲା।
ମୋଟ ଦ୍ରବଣୀୟ ଫ୍ଲାଭୋନଏଡ୍ ପରିମାଣ ଡିଜେରିଡାନ୍ ଏଟ୍ ଅଲ୍ (2006)ଙ୍କ ପଦ୍ଧତି ଅନୁସାରେ ସାମାନ୍ୟ ପରିବର୍ତ୍ତନ ସହିତ ନିର୍ଣ୍ଣୟ କରାଯାଇଥିଲା। ସଂକ୍ଷେପରେ, ଉପରୋକ୍ତ ମିଥାନଲ୍ ନିର୍ଗମର 0.3 ମିଲି 5% ଆଲୁମିନିୟମ୍ କ୍ଲୋରାଇଡ୍ ଦ୍ରବଣ (AlCl3; ଫିସର ସାଇଣ୍ଟିଫିକ୍, ହାମ୍ପଟନ୍, NH, USA) ସହିତ ମିଶ୍ରିତ ହୋଇଥିଲା, ଜୋରଦାର ଘାଣ୍ଟାଇ ଦିଆଯାଇଥିଲା ଏବଂ ତାପରେ 5 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ କୋଠରୀ ତାପମାତ୍ରାରେ ଇନ୍କ୍ୟୁବେଟ୍ କରାଯାଇଥିଲା, ତାପରେ 0.3 ମିଲି 10% ପୋଟାସିୟମ୍ ଆସେଟେଟ୍ ଦ୍ରବଣ (Al-Gomhoria Pharmaceuticals and Medical Supplies, Cairo, Egypt) ଯୋଡା ଯାଇଥିଲା, ଭଲ ଭାବରେ ମିଶ୍ରିତ ହୋଇଥିଲା ଏବଂ ଅନ୍ଧାରରେ 30 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ କୋଠରୀ ତାପମାତ୍ରାରେ ଇନ୍କ୍ୟୁବେଟ୍ କରାଯାଇଥିଲା। ଇନକ୍ୟୁବେସନ୍ ପରେ, ଏକ UV-160A ସ୍ପେକ୍ଟ୍ରୋଫୋଟୋମିଟର୍ (Shimadzu Corporation, Japan) ବ୍ୟବହାର କରି ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ମିଶ୍ରଣର ଅବଶୋଷଣ 430 nm ରେ ମାପ କରାଯାଇଥିଲା। ନମୁନା ନିର୍ଗମରେ ମୋଟ ଦ୍ରବଣୀୟ ଫ୍ଲାଭୋନଏଡ୍‌ର ସାନ୍ଦ୍ରତା ଏକ ରୁଟିନ୍ କାଲିବ୍ରେସନ୍ କର୍ଭ (TCI ଆମେରିକା, ପୋର୍ଟଲ୍ୟାଣ୍ଡ, OR, USA) ବ୍ୟବହାର କରି ନିର୍ଣ୍ଣୟ କରାଯାଇଥିଲା ଏବଂ ତାପରେ ପ୍ରତି ଗ୍ରାମ ତାଜା ଓଜନ (mg RE g-1 ତାଜା ଓଜନ) ର ମିଲିଗ୍ରାମ ରୁଟିନ୍ ସମତୁଲ୍ୟ ଭାବରେ ପ୍ରକାଶ କରାଯାଇଥିଲା।
ୟୋକୋୟାମା ଏବଂ ହିରାମାତ୍ସୁ (2003) ଦ୍ୱାରା ପ୍ରସ୍ତାବିତ ଏବଂ ସନ୍ ଏଟ୍ ଅଲ୍ (2006) ଦ୍ୱାରା ପରିବର୍ତ୍ତିତ ପଦ୍ଧତି ଉପରେ ଆଧାରିତ ଏକ ପରିବର୍ତ୍ତିତ ନିନହାଇଡ୍ରିନ୍ ରିଏଜେଣ୍ଟ (ଥର୍ମୋ ସାଇଣ୍ଟିଫିକ୍ କେମିକାଲ୍ସ, ୱାଲଥାମ୍, ଏମଏ, ୟୁଏସଏ) ବ୍ୟବହାର କରି ବିନ୍ ପତ୍ରର ମୋଟ ମୁକ୍ତ ଆମିନୋ ଏସିଡ୍ ପରିମାଣ ନିର୍ଣ୍ଣୟ କରାଯାଇଥିଲା। ସଂକ୍ଷେପରେ, 0.1 ଗ୍ରାମ ଭୂମି ଟିସୁକୁ pH 5.4 ବଫର ସହିତ ବାହାର କରାଯାଇଥିଲା, ଏବଂ 200 μL ସୁପରନାଟାଣ୍ଟକୁ 200 μL ନିନହାଇଡ୍ରିନ୍ (2%) ଏବଂ 200 μL ପାଇରିଡିନ୍ (10%; ସ୍ପେକ୍ଟ୍ରମ୍ କେମିକାଲ୍, ନ୍ୟୁ ବ୍ରୁନ୍ସୱିକ୍, ନ୍ୟୁ ଜର୍ମାନୀ, ୟୁଏସଏ) ସହିତ ପ୍ରତିକ୍ରିୟା କରାଯାଇଥିଲା, 30 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ ଏକ ଫୁଟନ୍ତା ପାଣି ସ୍ନାନରେ ଇନକ୍ୟୁବେଟ୍ କରାଯାଇଥିଲା, ତା’ପରେ ଥଣ୍ଡା କରାଯାଇଥିଲା ଏବଂ ଏକ UV-160A ସ୍ପେକ୍ଟ୍ରୋଫୋଟୋମିଟର୍ (ଶିମାଡଜୁ କର୍ପୋରେସନ୍, ଜାପାନ) ବ୍ୟବହାର କରି 580 nm ରେ ମାପ କରାଯାଇଥିଲା। ଅନ୍ୟପକ୍ଷରେ, ବେଟ୍ସ ପଦ୍ଧତି ଦ୍ୱାରା ପ୍ରୋଲାଇନ୍ ନିର୍ଣ୍ଣୟ କରାଯାଇଥିଲା (ବେଟ୍ସ ଏଟ୍ ଅଲ୍, 1973)। ପ୍ରୋଲାଇନ୍ କୁ 3% ସଲଫୋସାଲିସିଲିକ୍ ଏସିଡ୍ (ଥର୍ମୋ ସାଇଣ୍ଟିଫିକ୍ କେମିକାଲ୍ସ, ୱାଲଥାମ୍, ଏମଏ, ୟୁଏସ୍ଏ) ସହିତ ବାହାର କରାଯାଇଥିଲା ଏବଂ ସେଣ୍ଟ୍ରିଫ୍ୟୁଗେସନ୍ ପରେ, 0.5 ମିଲି ସୁପରନାଟାଣ୍ଟକୁ 1 ମିଲି ଗ୍ଲେସିଆଲ୍ ଆସେଟିକ୍ ଏସିଡ୍ (ଫିସର ସାଇଣ୍ଟିଫିକ୍, ହାମ୍ପଟନ୍, NH, ୟୁଏସ୍ଏ) ଏବଂ ନିନହାଇଡ୍ରିନ୍ ରିଏଜେଣ୍ଟ ସହିତ ମିଶ୍ରିତ କରାଯାଇଥିଲା, 90°C ରେ 45 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ ଇନକ୍ୟୁବେଟେଡ୍ କରାଯାଇଥିଲା, ଥଣ୍ଡା କରାଯାଇଥିଲା ଏବଂ ଉପରୋକ୍ତ ସମାନ ସ୍ପେକ୍ଟ୍ରୋଫୋଟୋମିଟର ବ୍ୟବହାର କରି 520 nm ରେ ମାପ କରାଯାଇଥିଲା। ପତ୍ର ନିର୍ଗମରେ ମୋଟ ମୁକ୍ତ ଆମିନୋ ଏସିଡ୍ ଏବଂ ପ୍ରୋଲାଇନ୍ ଯଥାକ୍ରମେ ଗ୍ଲାଇସିନ୍ ଏବଂ ପ୍ରୋଲାଇନ୍ କାଲିବ୍ରେସନ୍ କର୍ଭ (ସିଗ୍ମା-ଆଲଡ୍ରିଚ୍, ସେଣ୍ଟ ଲୁଇସ୍, ଏମଏ, ୟୁଏସ୍ଏ) ବ୍ୟବହାର କରି ନିର୍ଣ୍ଣୟ କରାଯାଇଥିଲା ଏବଂ ମିଗ୍ରା/ଗ୍ରାମ ତାଜା ଓଜନ ଭାବରେ ପ୍ରକାଶ କରାଯାଇଥିଲା।
ଆଣ୍ଟିଅକ୍ସିଡାଣ୍ଟ ଏନଜାଇମର ଏନଜାଇମାଟିକ୍ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ନିର୍ଣ୍ଣୟ କରିବା ପାଇଁ, ପ୍ରାୟ 50 ମିଲିଗ୍ରାମ ସମଜାତୀୟ ଟିସୁ 3 ମିଲି 50 ମିଲିମିଟର ଟ୍ରିସ୍ ବଫର (pH 7.8) ସହିତ ବାହାର କରାଯାଇଥିଲା ଯେଉଁଥିରେ 1 ମିଲିମିଟର EDTA-Na2 (ସିଗମା-ଆଲଡ୍ରିଚ୍, ସେଣ୍ଟ ଲୁଇସ୍, MO, USA) ଏବଂ 7.5% ପଲିଭିନାଇଲପାଇରୋଲିଡୋନ୍ (PVP; ସିଗମା-ଆଲଡ୍ରିଚ୍, ସେଣ୍ଟ ଲୁଇସ୍, MO, USA) ଥାଏ, ଏହାକୁ ରେଫ୍ରିଜରେସନ (4 °C) ତଳେ 20 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ 10,000 × g ରେ ସେଣ୍ଟ୍ରିଫ୍ୟୁଗ୍ କରାଯାଇଥିଲା, ଏବଂ ସୁପରନାଟାଣ୍ଟ (ଅଶୋଧିତ ଏନଜାଇମ ନିଷ୍କ୍ରିୟ) ସଂଗ୍ରହ କରାଯାଇଥିଲା (ଏଲ-ନାଗର ଏଟ ଆଲ., 2023; ଓସମାନ ଏଟ ଆଲ., 2023)। ତା’ପରେ Catalase (CAT) କୁ 0.1 M ସୋଡିୟମ ଫସଫେଟ୍ ବଫରର 2 ml (pH 6.5; Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) ଏବଂ 100 μl 269 mM H2O2 ଦ୍ରବଣ ସହିତ ପ୍ରତିକ୍ରିୟା କରାଯାଇଥିଲା ଯାହା ଦ୍ୱାରା ଏହାର ଏନଜାଇମାଟିକ୍ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ Aebi (1984) ପଦ୍ଧତି ଅନୁଯାୟୀ ସାମାନ୍ୟ ପରିବର୍ତ୍ତନ ସହିତ ନିର୍ଣ୍ଣୟ କରାଯାଇଥିଲା (El-Nagar et al., 2023; Osman et al., 2023)। Harrach et al. (2009) ପଦ୍ଧତି ବ୍ୟବହାର କରି ଗୁଆଇକୋଲ-ନିର୍ଭରଶୀଳ ପେରୋକ୍ସିଡେଜ୍ (POX) ଏନଜାଇମାଟିକ୍ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ନିର୍ଣ୍ଣୟ କରାଯାଇଥିଲା। (୨୦୦୮) ସାମାନ୍ୟ ପରିବର୍ତ୍ତନ ସହିତ (ଏଲ୍-ନାଗର ଏଟ୍ ଅଲ୍., ୨୦୨୩; ଓସମାନ ଏଟ୍ ଅଲ୍., ୨୦୨୩) ଏବଂ ପଲିଫେନୋଲ୍ ଅକ୍ସିଡେଜ୍ (PPO) ର ଏନଜାଇମାଟିକ୍ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ୧୦୦ ମିଲି ସୋଡିୟମ୍ ଫସଫେଟ୍ ବଫର (pH 6.0), ୧୦୦ μl ଗୁଆଇକୋଲ୍ (TCI ରାସାୟନିକ ପଦାର୍ଥ, ପୋର୍ଟଲ୍ୟାଣ୍ଡ, OR, USA) ଏବଂ ୧୨ ମିଲି H2O2 ର ୧୦୦ μl ସହିତ ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ପରେ ନିର୍ଣ୍ଣୟ କରାଯାଇଥିଲା। ପଦ୍ଧତିଟି (ଏଲ୍-ନାଗର ଏଟ୍ ଅଲ୍., ୨୦୨୩; ଓସମାନ ଏଟ୍ ଅଲ୍., ୨୦୨୩) ରୁ ସାମାନ୍ୟ ପରିବର୍ତ୍ତନ କରାଯାଇଥିଲା। ୦.୧ ମିଲି ଫସଫେଟ୍ ବଫର (pH 6.0) ରେ ସଦ୍ୟ ପ୍ରସ୍ତୁତ ୩ ମିଲି କ୍ୟାଟେକୋଲ୍ ଦ୍ରବଣ (ଥର୍ମୋ ସାଇଣ୍ଟିଫିକ୍ କେମିକାଲ୍ସ, ୱାଲଥାମ୍, MA, USA) (୦.୦୧ ମିଲି) ସହିତ ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ପରେ ପରୀକ୍ଷା କରାଯାଇଥିଲା। 240 nm (A240) ରେ H2O2 ର ବିଘଟନ ନିରୀକ୍ଷଣ କରି CAT କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ମାପ କରାଯାଇଥିଲା, 436 nm (A436) ରେ ଶୋଷଣ ବୃଦ୍ଧି ନିରୀକ୍ଷଣ କରି POX କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ମାପ କରାଯାଇଥିଲା, ଏବଂ UV-160A ସ୍ପେକ୍ଟ୍ରୋଫୋଟୋମିଟର (ଶିମାଡଜୁ, ଜାପାନ) ବ୍ୟବହାର କରି ପ୍ରତି 30 ସେକେଣ୍ଡରେ 495 nm (A495) ରେ ଶୋଷଣ ହ୍ରାସ ରେକର୍ଡ କରି PPO କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ମାପ କରାଯାଇଥିଲା।
ଶେଷ ଚିକିତ୍ସାର 72 ଘଣ୍ଟା ପରେ ବିନ୍ ପତ୍ରରେ (ଉପରରୁ ଦ୍ୱିତୀୟ ଏବଂ ତୃତୀୟ ସମ୍ପୂର୍ଣ୍ଣ ବିକଶିତ ପତ୍ର) ପେରୋକ୍ସିସୋମାଲ କାଟାଲେଜ୍ (PvCAT1; GenBank Accession No. KF033307.1), ସୁପରଅକ୍ସାଇଡ୍ ଡିସମ୍ୟୁଟେଜ୍ (PvSOD; GenBank Accession No. XM_068639556.1), ଏବଂ ଗ୍ଲୁଟାଥିଓନ୍ ରିଡକ୍ଟେଜ୍ (PvGR; GenBank Accession No. KY195009.1) ସମେତ ତିନୋଟି ଆଣ୍ଟିଅକ୍ସିଡାଣ୍ଟ-ସମ୍ବନ୍ଧୀୟ ଜିନ୍‌ର ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପ୍ଟ ସ୍ତର ଚିହ୍ନଟ କରିବା ପାଇଁ ରିଅଲ୍-ଟାଇମ୍ RT-PCR ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇଥିଲା। ସଂକ୍ଷେପରେ, ନିର୍ମାତାଙ୍କ ପ୍ରୋଟୋକଲ୍ ଅନୁସାରେ ସିମ୍ପଲି P ଟୋଟାଲ୍ RNA ଏକ୍ସଟ୍ରାକ୍ସନ୍ କିଟ୍ (କ୍ୟାଟ୍ ନଂ. BSC52S1; ବାୟୋଫ୍ଲକ୍ସ, ବାୟୋରି ଟେକ୍ନୋଲୋଜି, ଚୀନ୍) ବ୍ୟବହାର କରି RNAକୁ ପୃଥକ କରାଯାଇଥିଲା। ତା'ପରେ, ନିର୍ମାତାଙ୍କ ନିର୍ଦ୍ଦେଶ ଅନୁଯାୟୀ TOP ସ୍କ୍ରିପ୍ଟ™ cDNA ସିନ୍ଥେସିସ୍ କିଟ୍ ବ୍ୟବହାର କରି cDNAକୁ ସଂଶ୍ଳେଷଣ କରାଯାଇଥିଲା। ଉପରୋକ୍ତ ତିନୋଟି ଜିନ୍‌ର ପ୍ରାଇମର କ୍ରମଗୁଡ଼ିକ ସପ୍ଲିମେଣ୍ଟାରୀ ଟେବୁଲ S3 ରେ ତାଲିକାଭୁକ୍ତ କରାଯାଇଛି। PvActin-3 (GenBank ଆକ୍ସେସନ୍ ନମ୍ବର: XM_068616709.1) କୁ ହାଉସକିପିଂ ଜିନ୍ ଭାବରେ ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇଥିଲା ଏବଂ 2-ΔΔCT ପଦ୍ଧତି (Livak and Schmittgen, 2001) ବ୍ୟବହାର କରି ଆପେକ୍ଷିକ ଜିନ୍ ପ୍ରକାଶନ ଗଣନା କରାଯାଇଥିଲା। ଜୈବିକ ଚାପ (ସାଧାରଣ ଶିମ୍ବ ଏବଂ ଆନ୍ଥ୍ରାକନୋଜ୍ କବକ Colletotrichum lindemuthianum ମଧ୍ୟରେ ଅସଙ୍ଗତ ପାରସ୍ପରିକ କ୍ରିୟା) ଏବଂ ଅଜୈବିକ ଚାପ (ମରୁଡ଼ି, ଲବଣାକ୍ତତା, ନିମ୍ନ ତାପମାତ୍ରା) ଅଧୀନରେ ଆକ୍ଟିନ୍ ସ୍ଥିରତା ପ୍ରଦର୍ଶନ କରାଯାଇଥିଲା (Borges et al., 2012)।
ଆମେ ପ୍ରାରମ୍ଭରେ ପ୍ରୋଟିନ୍-ପ୍ରୋଟିନ୍ BLAST ଉପକରଣ (BLASTp 2.15.0+) (Altschul et al., 1997, 2005) ବ୍ୟବହାର କରି S. sclerotiorum ରେ oxaloacetate acetylhydrolase (OAH) ପ୍ରୋଟିନ୍ ର ଏକ ଜିନୋମ୍-ୱାଇଡ୍ ସିଲିକୋ ବିଶ୍ଳେଷଣ କରିଥିଲୁ। ସଂକ୍ଷେପରେ, ଆମେ S. sclerotiorum (taxide: 5180) ରେ ହୋମୋଲୋଗସ୍ ପ୍ରୋଟିନ୍ ମ୍ୟାପ୍ କରିବା ପାଇଁ କ୍ୱେରୀ କ୍ରମ ଭାବରେ Aspergillus fijiensis CBS 313.89 (AfOAH; taxide: 1191702; GenBank ଆକ୍ସେସନ୍ ନମ୍ବର XP_040799428.1; 342 ଆମିନୋ ଏସିଡ୍) ଏବଂ Penicillium lagena (PlOAH; taxide: 94218; GenBank ଆକ୍ସେସନ୍ ନମ୍ବର XP_056833920.1; 316 ଆମିନୋ ଏସିଡ୍) ରୁ OAH ବ୍ୟବହାର କରିଥିଲୁ। ନ୍ୟାସନାଲ ସେଣ୍ଟର ଫର୍ ବାୟୋଟେକ୍ନୋଲୋଜି ଇନଫର୍ମେସନ୍ (NCBI) ୱେବସାଇଟ୍, http://www.ncbi.nlm.nih.gov/gene/ ରେ GenBank ରେ ସଦ୍ୟତମ ଉପଲବ୍ଧ S. sclerotiorum ଜିନୋମ୍ ତଥ୍ୟ ବିରୁଦ୍ଧରେ BLASTp କରାଯାଇଥିଲା।
ଏହା ସହିତ, S. sclerotiorum (SsOAH) ରୁ ପୂର୍ବାନୁମାନିତ OAH ଜିନ୍ ଏବଂ A. fijiensis CBS 313.89 ଏବଂ P. lagena ରୁ PlOAH ର AfOAH ର ବିବର୍ତ୍ତନମୂଳକ ବିଶ୍ଳେଷଣ ଏବଂ ଫାଇଲୋଜେନେଟିକ୍ ଗଛକୁ MEGA11 (Tamura et al., 2021) ଏବଂ JTT ମାଟ୍ରିକ୍ସ-ଆଧାରିତ ମଡେଲ (Jones et al., 1992) ରେ ସର୍ବାଧିକ ସମ୍ଭାବନା ପଦ୍ଧତି ବ୍ୟବହାର କରି ଅନୁମାନ କରାଯାଇଥିଲା। ଫାଇଲୋଜେନେଟିକ୍ ଗଛକୁ S. sclerotiorum ରୁ ସମସ୍ତ ପୂର୍ବାନୁମାନିତ OAH ଜିନ୍ (SsOAH) ର ପ୍ରୋଟିନ୍ କ୍ରମର ବହୁବିକ ଆଲାଇନ୍ମେଣ୍ଟ ବିଶ୍ଳେଷଣ ଏବଂ କନଷ୍ଟ୍ରେଣ୍ଟ-ଆଧାରିତ ଆଲାଇନ୍ମେଣ୍ଟ ଟୁଲ୍ (COBALT; https://www.ncbi.nlm.nih.gov/tools/cobalt/re_cobalt.cgi) (Papadopoulos and Agarwala, 2007) ବ୍ୟବହାର କରି ସଂଯୁକ୍ତ କରାଯାଇଥିଲା। ଏହା ସହିତ, S. sclerotiorum ରୁ SsOAH ର ସର୍ବୋତ୍ତମ ମେଳ ଖାଉଥିବା ଆମିନୋ ଏସିଡ୍ କ୍ରମଗୁଡ଼ିକୁ ClustalW (http://www.genome.jp/tools-bin/clustalw) ବ୍ୟବହାର କରି କ୍ୱେରୀ କ୍ରମଗୁଡ଼ିକ (AfOAH ଏବଂ PlOAH) (Larkin et al., 2007) ସହିତ ସଂରକ୍ଷିତ କରାଯାଇଥିଲା, ଏବଂ ସଂରକ୍ଷିତ ଅଞ୍ଚଳରେ ESPript ଉପକରଣ (ସଂସ୍କରଣ 3.0; https://espript.ibcp.fr/ESPript/ESPript/index.php) ବ୍ୟବହାର କରି ଦୃଶ୍ୟମାନ କରାଯାଇଥିଲା।
ଅଧିକନ୍ତୁ, S. sclerotiorum SsOAH ର ପୂର୍ବାନୁମାନିତ କାର୍ଯ୍ୟକ୍ଷମ ପ୍ରତିନିଧି ଡୋମେନ୍ ଏବଂ ସଂରକ୍ଷିତ ସ୍ଥାନଗୁଡ଼ିକୁ InterPro ଉପକରଣ (https://www.ebi.ac.uk/interpro/) (Blum et al., 2021) ବ୍ୟବହାର କରି ବିଭିନ୍ନ ପରିବାରରେ ପାରସ୍ପରିକ ଭାବରେ ବର୍ଗୀକୃତ କରାଯାଇଥିଲା। ଶେଷରେ, ପ୍ରୋଟିନ୍ ହୋମୋଲୋଜି/ଆନାଲୋଜି ଚିହ୍ନଟ ଇଞ୍ଜିନ୍ (Phyre2 ସର୍ଭର ସଂସ୍କରଣ 2.0; http://www.sbg.bio.ic.ac.uk/~phyre2/html/page.cgi?id=index) (Kelley et al., 2015) ବ୍ୟବହାର କରି ପୂର୍ବାନୁମାନିତ S. sclerotiorum SsOAH ର ତ୍ରି-ପରିମାଣୀୟ (3D) ଗଠନ ମଡେଲିଂ କରାଯାଇଥିଲା ଏବଂ SWISS-MODEL ସର୍ଭର (https://swissmodel.expasy.org/) (Biasini et al., 2014) ବ୍ୟବହାର କରି ବୈଧ କରାଯାଇଥିଲା। ପୂର୍ବାନୁମାନ କରାଯାଇଥିବା ତ୍ରି-ପରିମାଣୀୟ ଗଠନ (PDB ଫର୍ମାଟ୍) UCSF-Chimera ପ୍ୟାକେଜ୍ (ସଂସ୍କରଣ 1.15; https://www.cgl.ucsf.edu/chimera/) (ପେଟରସେନ୍ ଏବଂ ଅନ୍ୟାନ୍ୟ, 2004) ବ୍ୟବହାର କରି ପାରସ୍ପରିକ ଭାବରେ ଦୃଶ୍ୟମାନ କରାଯାଇଥିଲା।
ସ୍କ୍ଲେରୋଟିନିଆ ସ୍କ୍ଲେରୋଟିଓରମ୍‌ର ମାଇସେଲିଆରେ ଅକ୍ସାଲୋଏସେଟେଟ୍ ଏସିଟାଇଲହାଇଡ୍ରୋଲେଜ୍ (SsOAH; GenBank ଆକ୍ସେସନ୍ ନମ୍ବର: XM_001590428.1)ର ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନାଲ୍ ସ୍ତର ନିର୍ଣ୍ଣୟ କରିବା ପାଇଁ ପରିମାଣାତ୍ମକ ପ୍ରକୃତ-ସମୟ ଫ୍ଲୋରୋସେନ୍ସ PCR ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇଥିଲା। ସଂକ୍ଷେପରେ, S. ସ୍କ୍ଲେରୋଟିଓରମ୍‌କୁ PDB ଧାରଣ କରିଥିବା ଏକ ଫ୍ଲାସ୍କରେ ଟୀକାକରଣ କରାଯାଇଥିଲା ଏବଂ ଏକ ଥରୁଥିବା ଇନକ୍ୟୁବେଟର (ମଡେଲ୍: I2400, ନ୍ୟୁ ବ୍ରୁନ୍ସୱିକ୍ ସାଇଣ୍ଟିଫିକ୍ କୋ., ଏଡିସନ୍, NJ, USA) ରେ 25 ± 2 °C ରେ 150 rpm ରେ 24 ଘଣ୍ଟା ପାଇଁ ଏବଂ ନିରନ୍ତର ଅନ୍ଧାରରେ (24 ଘଣ୍ଟା) ରଖାଯାଇଥିଲା ଯାହା ଦ୍ୱାରା ମାଇସେଲିଆଲ୍ ବୃଦ୍ଧିକୁ ଉତ୍ତେଜିତ କରାଯାଇଥିଲା। ଏହା ପରେ, କୋଷଗୁଡ଼ିକୁ L-ଅର୍ନିଥିନ୍ ଏବଂ ଫଙ୍ଗସାଇଡ୍ ରିଜୋଲେକ୍ସ-ଟି ସହିତ ଅନ୍ତିମ IC50 ସାନ୍ଦ୍ରତାରେ (ପ୍ରାୟ 40 ଏବଂ 3.2 mg/L, ଯଥାକ୍ରମେ) ଚିକିତ୍ସା କରାଯାଇଥିଲା ଏବଂ ତା’ପରେ ସମାନ ପରିସ୍ଥିତିରେ ଆଉ 24 ଘଣ୍ଟା ପାଇଁ କଲଚର୍ କରାଯାଇଥିଲା। ଇନକ୍ୟୁବେସନ୍ ପରେ, କଲଚରଗୁଡ଼ିକୁ 5 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ 2500 rpm ରେ ସେଣ୍ଟ୍ରିଫ୍ୟୁଜ୍ କରାଯାଇଥିଲା ଏବଂ ଜିନ୍ ପ୍ରକାଶନ ବିଶ୍ଳେଷଣ ପାଇଁ ସୁପରନାଟାଣ୍ଟ (କବକ ମାଇସେଲିୟମ୍) ସଂଗ୍ରହ କରାଯାଇଥିଲା। ସେହିପରି, ସଂକ୍ରମିତ ଟିସୁଗୁଡ଼ିକର ପୃଷ୍ଠରେ ଧଳା ଛାଞ୍ଚ ଏବଂ କପା ମାଇସେଲିୟମ୍ ଗଠନ କରିଥିବା ସଂକ୍ରମିତ ଉଦ୍ଭିଦଗୁଡ଼ିକରୁ 0, 24, 48, 72, 96 ଏବଂ 120 ଘଣ୍ଟା ପରେ ଫଙ୍ଗଲ୍ ମାଇସେଲିୟମ୍ ସଂଗ୍ରହ କରାଯାଇଥିଲା। ଫଙ୍ଗଲ୍ ମାଇସେଲିୟମ୍ ରୁ RNA ବାହାର କରାଯାଇଥିଲା ଏବଂ ତା’ପରେ ଉପରେ ବର୍ଣ୍ଣିତ ଭାବରେ cDNA ସଂଶ୍ଳେଷଣ କରାଯାଇଥିଲା। SsOAH ପାଇଁ ପ୍ରାଇମର କ୍ରମଗୁଡ଼ିକ ପରିପୂରକ ସାରଣୀ S3 ରେ ତାଲିକାଭୁକ୍ତ କରାଯାଇଛି। SsActin (GenBank ଆକ୍ସେସନ୍ ନମ୍ବର: XM_001589919.1) କୁ ହାଉସକିପିଂ ଜିନ୍ ଭାବରେ ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇଥିଲା, ଏବଂ ଆପେକ୍ଷିକ ଜିନ୍ ପ୍ରକାଶନକୁ 2-ΔΔCT ପଦ୍ଧତି (Livak ଏବଂ Schmittgen, 2001) ବ୍ୟବହାର କରି ଗଣନା କରାଯାଇଥିଲା।
ଜୁ ଏବଂ ଝାଙ୍ଗ (୨୦୦୦) ପଦ୍ଧତି ଅନୁଯାୟୀ ଆଳୁ ଡେକ୍ସଟ୍ରୋଜ୍ ବ୍ରୋଥ୍ (PDB) ଏବଂ ଫଙ୍ଗଲ୍ କାରକ ସ୍କ୍ଲେରୋଟିନିଆ ସ୍କ୍ଲେରୋଟିଓରମ୍ ଥିବା ଉଦ୍ଭିଦ ନମୁନାରେ ଅକ୍ସାଲିକ୍ ଏସିଡ୍ ନିର୍ଣ୍ଣୟ କରାଯାଇଥିଲା ଯାହା ସାମାନ୍ୟ ପରିବର୍ତ୍ତନ ସହିତ କରାଯାଇଥିଲା। ସଂକ୍ଷେପରେ, S. ସ୍କ୍ଲେରୋଟିଓରମ୍ ଆଇସୋଲେଟ୍‌ଗୁଡ଼ିକୁ PDB ଥିବା ଫ୍ଲାସ୍କରେ ଟୀକା ଦିଆଯାଇଥିଲା ଏବଂ ତା’ପରେ ଏକ ଥରୁଥିବା ଇନକ୍ୟୁବେଟର (ମଡେଲ୍ I2400, ନ୍ୟୁ ବ୍ରୁନ୍ସୱିକ୍ ସାଇଣ୍ଟିଫିକ୍ କୋ., ଏଡିସନ୍, NJ, USA) ରେ 150 rpm ରେ 25 ± 2 °C ରେ 3-5 ଦିନ ପାଇଁ ନିରନ୍ତର ଅନ୍ଧାରରେ (24 ଘଣ୍ଟା) କଲଚର କରାଯାଇଥିଲା ଯାହା ଦ୍ୱାରା ମାଇସେଲିଆଲ୍ ବୃଦ୍ଧିକୁ ଉତ୍ତେଜିତ କରାଯାଇଥିଲା। ଇନକ୍ୟୁବେସନ୍ ପରେ, ଫଙ୍ଗଲ୍ କଲଚରକୁ ପ୍ରଥମେ ହ୍ୱାଟ୍‌ମ୍ୟାନ୍ #1 ଫିଲ୍ଟର ପେପର ମାଧ୍ୟମରେ ଫିଲ୍ଟର କରାଯାଇଥିଲା ଏବଂ ତା’ପରେ ଅବଶିଷ୍ଟ ମାଇସେଲିୟମ୍ ବାହାର କରିବା ପାଇଁ 5 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ 2500 rpm ରେ ସେଣ୍ଟ୍ରିଫ୍ୟୁଗ୍ କରାଯାଇଥିଲା। ଅକ୍ସାଲେଟର ଅଧିକ ପରିମାଣାତ୍ମକ ନିର୍ଣ୍ଣୟ ପାଇଁ ସୁପରନାଟାଣ୍ଟକୁ 4°C ରେ ସଂଗ୍ରହ ଏବଂ ସଂରକ୍ଷଣ କରାଯାଇଥିଲା। ଉଦ୍ଭିଦ ନମୁନା ପ୍ରସ୍ତୁତି ପାଇଁ, ପ୍ରାୟ 0.1 ଗ୍ରାମ ଉଦ୍ଭିଦ ଟିସୁ ଖଣ୍ଡଗୁଡ଼ିକୁ ଡିଷ୍ଟିଲେଡ୍ ପାଣି (ପ୍ରତିଥର 2 ମିଲି) ସହିତ ତିନିଥର ବାହାର କରାଯାଇଥିଲା। ତା'ପରେ ନମୁନାଗୁଡ଼ିକୁ 5 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ 2500 rpm ରେ ସେଣ୍ଟ୍ରିଫ୍ୟୁଗ୍ କରାଯାଇଥିଲା, ସୁପରନାଟାଣ୍ଟକୁ ହ୍ୱାଟମ୍ୟାନ୍ ନମ୍ବର 1 ଫିଲ୍ଟର ପେପର ମାଧ୍ୟମରେ ଶୁଖିଲା ଫିଲ୍ଟର କରାଯାଇଥିଲା ଏବଂ ଅଧିକ ବିଶ୍ଳେଷଣ ପାଇଁ ସଂଗ୍ରହ କରାଯାଇଥିଲା।
ଅକ୍ସାଲିକ୍ ଏସିଡର ପରିମାଣାତ୍ମକ ବିଶ୍ଳେଷଣ ପାଇଁ, ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ମିଶ୍ରଣକୁ ଏକ ଗ୍ଲାସ୍ ଷ୍ଟପର୍ ଟ୍ୟୁବ୍‌ରେ ନିମ୍ନଲିଖିତ କ୍ରମରେ ପ୍ରସ୍ତୁତ କରାଯାଇଥିଲା: 0.2 ମିଲି ନମୁନା (କିମ୍ବା PDB କଲଚର୍ ଫିଲ୍ଟ୍ରେଟ୍ କିମ୍ବା ଅକ୍ସାଲିକ୍ ଏସିଡ୍ ମାନକ ଦ୍ରବଣ), 0.11 ମିଲି ବ୍ରୋମୋଫେନୋଲ୍ ନୀଳ (BPB, 1 mM; ଫିସର କେମିକାଲ୍, ପିଟ୍ସବର୍ଗ, PA, USA), 0.198 ମିଲି 1 M ସଲଫ୍ୟୁରିକ୍ ଏସିଡ୍ (H2SO4; ଆଲ୍-ଗୋମହୋରିଆ ଫାର୍ମାସ୍ୟୁଟିକାଲ୍ସ ଆଣ୍ଡ୍ ମେଡିକାଲ୍ ସପ୍ଲାଏଜ୍, କାଇରୋ, ଇଜିପ୍ଟ) ଏବଂ 0.176 ମିଲି 100 mM ପୋଟାସିୟମ୍ ଡାଇକ୍ରୋମେଟ୍ (K2Cr2O7; TCI କେମିକାଲ୍ସ, ପୋର୍ଟଲ୍ୟାଣ୍ଡ, OR, USA), ଏବଂ ତା’ପରେ ଦ୍ରବଣକୁ 4.8 ମିଲି ଡିଷ୍ଟିଲ୍ ପାଣି ସହିତ ମିଶାଯାଇଥିଲା, ଜୋରରେ ମିଶାଯାଇଥିଲା ଏବଂ ତୁରନ୍ତ 60 °C ଜଳ ସ୍ନାନରେ ରଖାଯାଇଥିଲା। 10 ମିନିଟ୍ ପରେ, 0.5 ମିଲି ସୋଡିୟମ୍ ହାଇଡ୍ରୋକ୍ସାଇଡ୍ ଦ୍ରବଣ (NaOH; 0.75 M) ମିଶାଇ ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ବନ୍ଦ କରାଯାଇଥିଲା। ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ମିଶ୍ରଣର ଅବଶୋଷଣ (A600) ଏକ UV-160 ସ୍ପେକ୍ଟ୍ରୋଫୋଟୋମିଟର (ଶିମାଡଜୁ କର୍ପୋରେସନ, ଜାପାନ) ବ୍ୟବହାର କରି 600 nm ରେ ମାପ କରାଯାଇଥିଲା। କଲଚର ଫିଲ୍ଟ୍ରେଟ୍ ଏବଂ ଉଦ୍ଭିଦ ନମୁନାର ପରିମାଣ ନିର୍ଣ୍ଣୟ ପାଇଁ PDB ଏବଂ ଡିଷ୍ଟିଲ୍ଡ ପାଣିକୁ ଯଥାକ୍ରମେ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ ଭାବରେ ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇଥିଲା। କଲଚର ଫିଲ୍ଟ୍ରେଟ୍ ରେ ଅକ୍ସାଲିକ୍ ଏସିଡ୍ ସାନ୍ଦ୍ରତା, PDB ମାଧ୍ୟମ (μg.mL−1) ର ପ୍ରତି ମିଲିଲିଟରରେ ମାଇକ୍ରୋଗ୍ରାମ ଅକ୍ସାଲିକ୍ ଏସିଡ୍ ଭାବରେ ପ୍ରକାଶିତ, ଏବଂ ପତ୍ର ନିଷ୍କାସନରେ, ପ୍ରତି ଗ୍ରାମ ତାଜା ଓଜନ (μg.g−1 FW) ର ମାଇକ୍ରୋଗ୍ରାମ ଅକ୍ସାଲିକ୍ ଏସିଡ୍ ଭାବରେ ପ୍ରକାଶିତ, ଏକ ଅକ୍ସାଲିକ୍ ଏସିଡ୍ କ୍ୟାଲିବ୍ରେସନ୍ କର୍ଭ (ଥର୍ମୋ ଫିସର ସାଇଣ୍ଟିଫିକ୍ କେମିକାଲ୍ସ, ୱାଲଥାମ, MA, USA) ବ୍ୟବହାର କରି ନିର୍ଣ୍ଣୟ କରାଯାଇଥିଲା।
ଅଧ୍ୟୟନ ସମୟରେ, ସମସ୍ତ ପରୀକ୍ଷଣ ଏକ ସମ୍ପୂର୍ଣ୍ଣ ଅନିୟମିତ ଡିଜାଇନ୍ (CRD) ରେ ଡିଜାଇନ୍ କରାଯାଇଥିଲା ଯେଉଁଥିରେ ପ୍ରତି ଚିକିତ୍ସା ପାଇଁ ଛଅଟି ଜୈବିକ ପ୍ରତିକୃତି ଏବଂ ପ୍ରତି ଜୈବିକ ପ୍ରତିକୃତି (ପ୍ରତି ପାତ୍ର ପାଇଁ ଦୁଇଟି ଗଛ) ପାଞ୍ଚଟି ପାତ୍ର ଥିଲା। ଜୈବିକ ପ୍ରତିକୃତିକୁ ଡୁପ୍ଲିକେଟରେ ବିଶ୍ଳେଷଣ କରାଯାଇଥିଲା (ଦୁଇଟି ଯାନ୍ତ୍ରିକ ପ୍ରତିକୃତି)। ସମାନ ପରୀକ୍ଷଣର ପୁନଃଉତ୍ପାଦନଶୀଳତା ଯାଞ୍ଚ କରିବା ପାଇଁ ବୈଷୟିକ ପ୍ରତିକୃତି ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇଥିଲା କିନ୍ତୁ ନକଲି ପ୍ରତିକୃତିକୁ ଏଡାଇବା ପାଇଁ ପରିସଂଖ୍ୟାନ ବିଶ୍ଳେଷଣରେ ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇ ନଥିଲା। ଟୁକେ-କ୍ରାମର ସଚ୍ଚୋଟ ଭାବରେ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ପାର୍ଥକ୍ୟ (HSD) ପରୀକ୍ଷା (p ≤ 0.05) ପରେ ଭିନ୍ନତାର ବିଶ୍ଳେଷଣ (ANOVA) ବ୍ୟବହାର କରି ତଥ୍ୟକୁ ପରିସଂଖ୍ୟାନଗତ ଭାବରେ ବିଶ୍ଳେଷଣ କରାଯାଇଥିଲା। ଇନ୍ ଭିଟ୍ରୋ ପରୀକ୍ଷଣ ପାଇଁ, ପ୍ରୋବିଟ୍ ମଡେଲ୍ ବ୍ୟବହାର କରି IC50 ଏବଂ IC99 ମୂଲ୍ୟ ଗଣନା କରାଯାଇଥିଲା ଏବଂ 95% ବିଶ୍ୱାସ ବ୍ୟବଧାନ ଗଣନା କରାଯାଇଥିଲା।
ମିଶରର ଏଲ୍ ଘାବିୟା ଗଭର୍ଣ୍ଣୋରେଟ୍‌ରେ ବିଭିନ୍ନ ସୋୟାବିନ୍ କ୍ଷେତରୁ ମୋଟ ଚାରୋଟି ଆଇସୋଲେଟ୍ ସଂଗ୍ରହ କରାଯାଇଥିଲା। PDA ମାଧ୍ୟମରେ, ସମସ୍ତ ଆଇସୋଲେଟ୍‌ଗୁଡ଼ିକ କ୍ରିମି ଧଳା ମାଇସେଲିୟମ୍ ଉତ୍ପାଦନ କରିଥିଲେ ଯାହା ଶୀଘ୍ର କପା ଭଳି ଧଳା ହୋଇଗଲା (ଚିତ୍ର 1A) ଏବଂ ତାପରେ ସ୍କ୍ଲେରୋଟିୟମ୍ ପର୍ଯ୍ୟାୟରେ ବେଜ୍ କିମ୍ବା ମାଟିଆ। ସ୍କ୍ଲେରୋଟିଆ ସାଧାରଣତଃ ଘନ, କଳା, ଗୋଲାକାର କିମ୍ବା ଅନିୟମିତ ଆକାରର, 5.2 ରୁ 7.7 ମିମି ଲମ୍ବା ଏବଂ 3.4 ରୁ 5.3 ମିମି ବ୍ୟାସ (ଚିତ୍ର 1B)। ଯଦିଓ ଚାରୋଟି ଆଇସୋଲେଟ୍ 25 ± 2 °C (ଚିତ୍ର 1A) ରେ 10-12 ଦିନର ଇନକ୍ୟୁବେସନ୍ ପରେ କଲଚର ମାଧ୍ୟମର ଧାରରେ ସ୍କ୍ଲେରୋଟିଆର ଏକ ସୀମାନ୍ତ ଢାଞ୍ଚା ବିକଶିତ କରିଥିଲେ, ପ୍ରତି ପ୍ଲେଟ୍‌ରେ ସ୍କ୍ଲେରୋଟିଆର ସଂଖ୍ୟା ସେମାନଙ୍କ ମଧ୍ୟରେ ଯଥେଷ୍ଟ ଭିନ୍ନ ଥିଲା (P < 0.001), ଆଇସୋଲେଟ୍ 3 ରେ ସର୍ବାଧିକ ସ୍କ୍ଲେରୋଟିଆର ସଂଖ୍ୟା ଥିଲା (ପ୍ରତି ପ୍ଲେଟ୍‌ରେ 32.33 ± 1.53 ସ୍କ୍ଲେରୋଟିଆ; ଚିତ୍ର 1C)। ସେହିପରି, ଆଇସୋଲେଟ୍ #3 ଅନ୍ୟ ଆଇସୋଲେଟ୍ ଅପେକ୍ଷା PDB ରେ ଅଧିକ ଅକ୍ସାଲିକ୍ ଏସିଡ୍ ଉତ୍ପାଦନ କରିଥିଲା ​​(3.33 ± 0.49 μg.mL−1; ଚିତ୍ର 1D)। ଆଇସୋଲେଟ୍ #3 ଫାଇଟୋପାଥୋଜେନିକ୍ ଫଙ୍ଗସ୍ ସ୍କ୍ଲେରୋଟିନିଆ ସ୍କ୍ଲେରୋଟିଓରମ୍ ର ସାଧାରଣ ଆକୃତି ଏବଂ ଅଣୁବୀକ୍ଷଣିକ ବୈଶିଷ୍ଟ୍ୟଗୁଡ଼ିକୁ ଦେଖାଇଥିଲା। ଉଦାହରଣ ସ୍ୱରୂପ, PDA ରେ, ଆଇସୋଲେଟ୍ #3 ର କଲୋନୀଗୁଡ଼ିକ ଦ୍ରୁତ ଗତିରେ ବୃଦ୍ଧି ପାଇଥିଲା, କ୍ରିମି ଧଳା ଥିଲା (ଚିତ୍ର 1A), ବିପରୀତ ବେଜ୍ କିମ୍ବା ହାଲୁକା ସାଲମନ ହଳଦିଆ-ବାଦାମୀ, ଏବଂ 9 ସେମି ବ୍ୟାସର ପ୍ଲେଟର ପୃଷ୍ଠକୁ ସମ୍ପୂର୍ଣ୍ଣ ଭାବରେ ଆଚ୍ଛାଦିତ କରିବା ପାଇଁ 25 ± 2°C ରେ 6-7 ଦିନ ଆବଶ୍ୟକ କରିଥିଲା। ଉପରୋକ୍ତ ଆକୃତି ଏବଂ ଅଣୁବୀକ୍ଷଣିକ ବୈଶିଷ୍ଟ୍ୟଗୁଡ଼ିକ ଉପରେ ଆଧାର କରି, ଆଇସୋଲେଟ୍ #3 କୁ ସ୍କ୍ଲେରୋଟିନିଆ ସ୍କ୍ଲେରୋଟିଓରମ୍ ଭାବରେ ଚିହ୍ନଟ କରାଯାଇଥିଲା।
ଚିତ୍ର 1. ସାଧାରଣ ଶିମ୍ବ ଫସଲରୁ S. ସ୍କ୍ଲେରୋଟିଓରମ୍ ଆଇସୋଲେଟ୍‌ର ବୈଶିଷ୍ଟ୍ୟ ଏବଂ ରୋଗଜନିତତା। (A) PDA ମାଧ୍ୟମରେ ଚାରୋଟି S. ସ୍କ୍ଲେରୋଟିଓରମ୍ ଆଇସୋଲେଟ୍‌ର ମାଇସେଲିଆଲ୍ ବୃଦ୍ଧି, (B) ଚାରୋଟି S. ସ୍କ୍ଲେରୋଟିଓରମ୍ ଆଇସୋଲେଟ୍‌ର ସ୍କ୍ଲେରୋଟିଆ, (C) ପ୍ରତି ପ୍ଲେଟ୍‌ରେ ସ୍କ୍ଲେରୋଟିଆ ସଂଖ୍ୟା (ପ୍ରତି ପ୍ଲେଟ୍‌), (D) PDB ମାଧ୍ୟମରେ ଅକ୍ସାଲିକ୍ ଏସିଡ୍ କ୍ଷରଣ (μg.mL−1), ଏବଂ (E) ସବୁଜଗୃହ ପରିସ୍ଥିତିରେ ସମ୍ବେଦନଶୀଳ ବାଣିଜ୍ୟିକ ଶିମ୍ବ ଚାଷ ଗିଜା 3 ଉପରେ ଚାରୋଟି S. ସ୍କ୍ଲେରୋଟିଓରମ୍ ଆଇସୋଲେଟ୍‌ର ରୋଗ ଗମ୍ଭୀରତା (%)। ମୂଲ୍ୟଗୁଡ଼ିକ ପାଞ୍ଚଟି ଜୈବିକ ପ୍ରତିକୃତିର ହାରାହାରି ± SD (n = 5) ପ୍ରତିନିଧିତ୍ୱ କରେ। ବିଭିନ୍ନ ଅକ୍ଷର ଚିକିତ୍ସା ମଧ୍ୟରେ ପରିସଂଖ୍ୟାନଗତ ଭାବରେ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ପାର୍ଥକ୍ୟ ସୂଚିତ କରେ (p < 0.05)। (F–H) ଆଇସୋଲେଟ୍ #3 (dpi) ସହିତ ଟୀକାକରଣ ପରେ 10 ଦିନ ପରେ ଯଥାକ୍ରମେ ଭୂପୃଷ୍ଠ କାଣ୍ଡ ଏବଂ ସିଲିକ୍‌ରେ ସାଧାରଣ ଧଳା ଛାଞ୍ଚର ଲକ୍ଷଣ ଦେଖାଦେଇଥିଲା। (I) S. sclerotiorum isolate #3 ର ଆଭ୍ୟନ୍ତରୀଣ ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିବ୍ଡ ସ୍ପେସର୍ (ITS) କ୍ଷେତ୍ରର ବିବର୍ତ୍ତନମୂଳକ ବିଶ୍ଳେଷଣ ସର୍ବାଧିକ ସମ୍ଭାବନା ପଦ୍ଧତି ବ୍ୟବହାର କରି କରାଯାଇଥିଲା ଏବଂ ନ୍ୟାସନାଲ୍ ସେଣ୍ଟର ଫର୍ ବାୟୋଟେକ୍ନୋଲୋଜି ଇନଫର୍ମେସନ୍ (NCBI) ଡାଟାବେସ୍ (https://www.ncbi.nlm.nih.gov/) ରୁ ପ୍ରାପ୍ତ 20 ଟି ରେଫରେନ୍ସ ଆଇସୋଲେଟ୍ / ଷ୍ଟ୍ରେନ୍ ସହିତ ତୁଳନା କରାଯାଇଥିଲା। କ୍ଲଷ୍ଟରିଂ ରେଖା ଉପରେ ଥିବା ସଂଖ୍ୟାଗୁଡ଼ିକ କ୍ଷେତ୍ର କଭରେଜ୍ (%) ସୂଚାଇଥାଏ, ଏବଂ କ୍ଲଷ୍ଟରିଂ ରେଖା ତଳେ ଥିବା ସଂଖ୍ୟାଗୁଡ଼ିକ ଶାଖା ଲମ୍ବ ସୂଚାଇଥାଏ।
ଅଧିକନ୍ତୁ, ରୋଗ ସୃଷ୍ଟିକାରୀତା ନିଶ୍ଚିତ କରିବା ପାଇଁ, ପ୍ରାପ୍ତ ହୋଇଥିବା ଚାରୋଟି S. sclerotiorum ଆଇସୋଲେଟ୍ ଗ୍ରୀନହାଉସ୍ ପରିସ୍ଥିତିରେ ସମ୍ବେଦନଶୀଳ ବାଣିଜ୍ୟିକ ବିନ୍ ଚାଷ ​​Giza 3 କୁ ଟୀକାକରଣ କରିବା ପାଇଁ ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇଥିଲା, ଯାହା Koch's postulates (ଚିତ୍ର 1E) ସହିତ ସୁସଙ୍ଗତ। ଯଦିଓ ସମସ୍ତ ପ୍ରାପ୍ତ କବକ ଆଇସୋଲେଟ୍ ରୋଗଜନକ ଥିଲା ଏବଂ ସବୁଜ ବିନ୍ (cv. Giza 3) କୁ ସଂକ୍ରମିତ କରିପାରେ, ଯାହା ଫଳରେ ସମସ୍ତ ଉପର ଅଂଶ (ଚିତ୍ର 1F), ବିଶେଷକରି କାଣ୍ଡ (ଚିତ୍ର 1G) ଏବଂ ଫଳ (ଚିତ୍ର 1H) ରେ 10 ଦିନ ପରେ ଇନୋକୁଲେସନ୍ (dpi) ରେ ସାଧାରଣ ଧଳା ଛାଞ୍ଚ ଲକ୍ଷଣ ସୃଷ୍ଟି କରେ, ଦୁଇଟି ସ୍ୱାଧୀନ ପରୀକ୍ଷଣରେ ଆଇସୋଲେଟ୍ 3 ସବୁଠାରୁ ଆକ୍ରମଣାତ୍ମକ ଆଇସୋଲେଟ୍ ଥିଲା। ବିନ୍ ଗଛରେ ଆଇସୋଲେଟ୍ 3 ସର୍ବାଧିକ ରୋଗ ତୀବ୍ରତା (%) ଥିଲା (24.0 ± 4.0, 58.0 ± 2.0, ଏବଂ 76.7 ± 3.1 ସଂକ୍ରମଣ ପରେ ଯଥାକ୍ରମେ 7, 14 ଏବଂ 21 ଦିନ; ଚିତ୍ର 1F)।
ଆଭ୍ୟନ୍ତରୀଣ ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିବ୍ଡ୍ ସ୍ପେସର୍ (ITS) ସିକୋଇନ୍ସିଂ (ଚିତ୍ର 1I) ଆଧାରରେ ସବୁଠାରୁ ଆକ୍ରମଣାତ୍ମକ S. ସ୍କ୍ଲେରୋଟିଓରମ୍ ଆଇସୋଲେଟ୍ #3 ର ଚିହ୍ନଟ ଆହୁରି ନିଶ୍ଚିତ କରାଯାଇଥିଲା। ଆଇସୋଲେଟ୍ #3 ଏବଂ 20 ରେଫରେନ୍ସ ଆଇସୋଲେଟ୍ / ଷ୍ଟ୍ରେନ୍ ମଧ୍ୟରେ ଫାଇଲୋଜେନେଟିକ୍ ବିଶ୍ଳେଷଣ ସେମାନଙ୍କ ମଧ୍ୟରେ ଉଚ୍ଚ ସମାନତା (>99%) ଦେଖାଇଥିଲା। ଏହା ଉଲ୍ଲେଖନୀୟ ଯେ S. ସ୍କ୍ଲେରୋଟିଓରମ୍ ଆଇସୋଲେଟ୍ #3 (533 bp) ଶୁଖିଲା ମଟର ବିହନରୁ ପୃଥକ ଆମେରିକୀୟ S. ସ୍କ୍ଲେରୋଟିଓରମ୍ ଆଇସୋଲେଟ୍ LPM36 (GenBank ଆସେସନ୍ ନମ୍ବର MK896659.1; 540 bp) ଏବଂ ଚାଇନିଜ୍ S. ସ୍କ୍ଲେରୋଟିଓରମ୍ ଆଇସୋଲେଟ୍ YKY211 (GenBank ଆସେସନ୍ ନମ୍ବର OR206374.1; 548 bp) ସହିତ ଉଚ୍ଚ ସମାନତା ରଖିଛି, ଯାହା ଭାଓଲେଟ୍ (ମାଥିଓଲା ଇନକାନା) କାଣ୍ଡ ପଚାରେ, ସମସ୍ତ ଡେଣ୍ଡ୍ରୋଗ୍ରାମର ଶୀର୍ଷରେ ପୃଥକ ଭାବରେ ଗୋଷ୍ଠୀଭୁକ୍ତ (ଚିତ୍ର 1I)। ନୂତନ କ୍ରମକୁ NCBI ଡାଟାବେସରେ ଜମା କରାଯାଇଛି ଏବଂ ଏହାକୁ "Sclerotinia sclerotiorum - isolate YN-25" (GenBank ଆକ୍ସେସନ ନମ୍ବର PV202792) ନାମ ଦିଆଯାଇଛି। ଏହା ଦେଖାଯାଇପାରେ ଯେ isolate 3 ହେଉଛି ସବୁଠାରୁ ଆକ୍ରମଣକାରୀ isolate; ତେଣୁ, ପରବର୍ତ୍ତୀ ସମସ୍ତ ପରୀକ୍ଷଣରେ ଏହି isolate କୁ ଅଧ୍ୟୟନ ପାଇଁ ବାଛି ଦିଆଯାଇଥିଲା।
S. sclerotiorum isolate 3 ବିରୁଦ୍ଧରେ ବିଭିନ୍ନ ସାନ୍ଦ୍ରତା (12.5, 25, 50, 75, 100 ଏବଂ 125 mg/L) ରେ ଡାଇମାଇନ୍ L-ornithine (Sigma-Aldrich, Darmstadt, Jermany) ର ଆଣ୍ଟିବ୍ୟାକ୍ଟେରିଆଲ୍ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ଇନ ଭିଟ୍ରୋରେ ଅନୁସନ୍ଧାନ କରାଯାଇଥିଲା। ଏହା ଉଲ୍ଲେଖନୀୟ ଯେ L-ornithine ଏକ ଆଣ୍ଟିବ୍ୟାକ୍ଟେରିଆଲ୍ ପ୍ରଭାବ ପ୍ରୟୋଗ କରିଥିଲା ​​ଏବଂ ଧୀରେ ଧୀରେ S. sclerotiorum hyphae ର ରାଡିଆଲ୍ ବୃଦ୍ଧିକୁ ଡୋଜ୍-ନିର୍ଭରଶୀଳ ଭାବରେ ବାଧା ଦେଇଥିଲା (ଚିତ୍ର 2A, B)। ପରୀକ୍ଷିତ ସର୍ବାଧିକ ସାନ୍ଦ୍ରତା (125 mg/L) ରେ, L-ornithine ସର୍ବାଧିକ ମାଇସେଲିଆଲ୍ ବୃଦ୍ଧି ନିବାରଣ ହାର (99.62 ± 0.27%; ଚିତ୍ର 2B) ପ୍ରଦର୍ଶନ କରିଥିଲା, ଯାହା ପରୀକ୍ଷିତ ସର୍ବାଧିକ ସାନ୍ଦ୍ରତା (10 mg/L) ରେ ବାଣିଜ୍ୟିକ ଫଙ୍ଗସାଇଡ୍ Rizolex-T (ନିବାରଣ ହାର 99.45 ± 0.39%; ଚିତ୍ର 2C) ସହିତ ସମାନ ଥିଲା, ଯାହା ସମାନ ପ୍ରଭାବଶାଳୀତା ସୂଚାଇଥାଏ।
ଚିତ୍ର 2. ସ୍କ୍ଲେରୋଟିନିଆ ସ୍କ୍ଲେରୋଟିଓରମ୍ ବିରୁଦ୍ଧରେ L-ଅର୍ନିଥିନର ଇନ ଭିଟ୍ରୋ ଆଣ୍ଟିବ୍ୟାକ୍ଟେରିଆଲ୍ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ। (A) ବାଣିଜ୍ୟିକ କବକନାଶକ ରିଜୋଲେକ୍ସ-ଟି (10 ମିଗ୍ରା/ଲିଟର) ସହିତ S. ସ୍କ୍ଲେରୋଟିଓରମ୍ ବିରୁଦ୍ଧରେ L-ଅର୍ନିଥିନର ବିଭିନ୍ନ ସାନ୍ଦ୍ରତାର ଆଣ୍ଟିବ୍ୟାକ୍ଟେରିଆଲ୍ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପର ତୁଳନା। (B, C) ଯଥାକ୍ରମେ L-ଅର୍ନିଥିନ୍ (12.5, 25, 50, 75, 100 ଏବଂ 125 ମିଗ୍ରା/ଲିଟର) କିମ୍ବା ରିଜୋଲେକ୍ସ-ଟି (2, 4, 6, 8 ଏବଂ 10 ମିଗ୍ରା/ଲିଟର) ର ବିଭିନ୍ନ ସାନ୍ଦ୍ରତା ସହିତ ଚିକିତ୍ସା ପରେ S. ସ୍କ୍ଲେରୋଟିଓରମ୍ ମାଇସେଲିଆଲ୍ ବୃଦ୍ଧିର ନିରୋଧ ହାର (%)। ମୂଲ୍ୟଗୁଡ଼ିକ ପାଞ୍ଚଟି ଜୈବିକ ପ୍ରତିକୃତିର ହାରାହାରି ± SD (n = 5) ପ୍ରତିନିଧିତ୍ୱ କରେ। ବିଭିନ୍ନ ଅକ୍ଷର ଚିକିତ୍ସା ମଧ୍ୟରେ ପରିସଂଖ୍ୟାନଗତ ପାର୍ଥକ୍ୟକୁ ସୂଚିତ କରେ (p < 0.05)। (D, E) ଯଥାକ୍ରମେ L-ଅର୍ନିଥିନ୍ ଏବଂ ବାଣିଜ୍ୟିକ କବକନାଶକ ରିଜୋଲେକ୍ସ-ଟିର ପ୍ରୋବିଟ୍ ମଡେଲ୍ ରିଗ୍ରେସନ୍ ବିଶ୍ଳେଷଣ। ପ୍ରୋବିଟ୍ ମଡେଲ୍ ରିଗ୍ରେସନ୍ ରେଖାକୁ ଏକ କଠିନ ନୀଳ ରେଖା ଭାବରେ ଦର୍ଶାଯାଇଛି, ଏବଂ ଆତ୍ମବିଶ୍ୱାସ ବ୍ୟବଧାନ (95%) ଏକ ଡ୍ୟାସ୍ ହୋଇଥିବା ଲାଲ ରେଖା ଭାବରେ ଦର୍ଶାଯାଇଛି।
ଏହା ସହିତ, ପ୍ରୋବିଟ୍ ରିଗ୍ରେସନ୍ ବିଶ୍ଳେଷଣ କରାଯାଇଥିଲା ଏବଂ ସମ୍ପୃକ୍ତ ପ୍ଲଟ୍‌ଗୁଡ଼ିକୁ ସାରଣୀ 1 ଏବଂ ଚିତ୍ର 2D,E ରେ ଦର୍ଶାଯାଇଛି। ସଂକ୍ଷେପରେ, L-ornithine ର ଗ୍ରହଣୀୟ ସ୍ଲୋପ୍ ମୂଲ୍ୟ (y = 2.92x − 4.67) ଏବଂ ସମ୍ପୃକ୍ତ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ପରିସଂଖ୍ୟାନ (Cox & Snell R2 = 0.3709, Nagelkerke R2 = 0.4998 ଏବଂ p < 0.0001; ଚିତ୍ର 2D) ବାଣିଜ୍ୟିକ ଫଙ୍ଗସିନାଶକ Rizolex-T (y = 1.96x − 0.99, Cox & Snell R2 = 0.1242, Nagelkerke R2 = 0.1708 ଏବଂ p < 0.0001) ତୁଳନାରେ S. sclerotiorum ବିରୁଦ୍ଧରେ ଏକ ବର୍ଦ୍ଧିତ ଆଣ୍ଟିଫଙ୍ଗାଲ୍ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ସୂଚିତ କରିଥିଲା ​​(ସାରଣୀ 1)।
ସାରଣୀ 1. S. sclerotiorum ବିରୁଦ୍ଧରେ L-ornithine ଏବଂ ବାଣିଜ୍ୟିକ କବକନାଶକ "Rizolex-T" ର ଅଧା-ସର୍ବାଧିକ ନିରୋଧକ ସାନ୍ଦ୍ରତା (IC50) ଏବଂ IC99 (mg/l) ର ମୂଲ୍ୟ।
ସାମଗ୍ରିକ ଭାବରେ, ଚିକିତ୍ସା ନକରିଥିବା S. ସ୍କ୍ଲେରୋଟିଓରମ୍-ସଂକ୍ରମିତ ଗଛ ତୁଳନାରେ ଚିକିତ୍ସା କରାଯାଇଥିବା ସାଧାରଣ ବିନ୍ ଗଛରେ L-ଅର୍ନିଥିନ୍ (250 mg/L) ଧଳା ଛାଞ୍ଚର ବିକାଶ ଏବଂ ତୀବ୍ରତାକୁ ଯଥେଷ୍ଟ ହ୍ରାସ କରିଛି (ନିୟନ୍ତ୍ରଣ; ଚିତ୍ର 3A)। ସଂକ୍ଷେପରେ, ଯଦିଓ ଚିକିତ୍ସା ନକରିଥିବା ସଂକ୍ରମିତ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ ଗଛର ରୋଗ ତୀବ୍ରତା ଧୀରେ ଧୀରେ ବୃଦ୍ଧି ପାଇଛି (52.67 ± 1.53, 83.21 ± 2.61, ଏବଂ 92.33 ± 3.06%), L-ଅର୍ନିଥିନ୍ ପରୀକ୍ଷଣ ସମୟରେ ରୋଗ ତୀବ୍ରତା (%)କୁ ଯଥେଷ୍ଟ ହ୍ରାସ କରିଛି (8.97 ± 0.15, 18.00 ± 1.00, ଏବଂ 26.36 ± 3.07) ଯଥାକ୍ରମେ 7, 14 ଏବଂ 21 ଦିନ ପରେ (dpt) (ଚିତ୍ର 3A)। ସେହିପରି, ଯେତେବେଳେ S. sclerotiorum-ସଂକ୍ରମିତ ବିନ୍ ଗଛଗୁଡ଼ିକୁ 250 mg/L L-ornithine ସହିତ ଚିକିତ୍ସା କରାଯାଇଥିଲା, ରୋଗ ଅଗ୍ରଗତି କର୍ଭ (AUDPC) ଅଧୀନରେ ଥିବା କ୍ଷେତ୍ରଫଳ ଚିକିତ୍ସା ନ କରାଯାଇଥିବା ନିୟନ୍ତ୍ରଣରେ 1274.33 ± 33.13 ରୁ ହ୍ରାସ ପାଇ 281.03 ± 7.95 ହୋଇଥିଲା, ଯାହା ପଜିଟିଭ୍ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ 50 mg/L Rizolex-T କବକନାଶକ (183.61 ± 7.71; ଚିତ୍ର 3B) ତୁଳନାରେ ସାମାନ୍ୟ କମ୍ ଥିଲା। ଦ୍ୱିତୀୟ ପରୀକ୍ଷଣରେ ମଧ୍ୟ ସମାନ ଧାରା ପରିଲକ୍ଷିତ ହୋଇଥିଲା।
ଚିତ୍ର 3. ଗ୍ରୀନହାଉସ୍ ପରିସ୍ଥିତିରେ ସ୍କ୍ଲେରୋଟିନିଆ ସ୍କ୍ଲେରୋଟିଓରମ୍ ଦ୍ୱାରା ସାଧାରଣ ବିନ୍ ର ଧଳା ପଚା ବିକାଶ ଉପରେ L-ଅର୍ନିଥିନ୍ ର ବାହ୍ୟ ପ୍ରୟୋଗର ପ୍ରଭାବ। (A) 250 mg/L L-ଅର୍ନିଥିନ୍ ସହିତ ଚିକିତ୍ସା ପରେ ସାଧାରଣ ବିନ୍ ର ଧଳା ଛାଞ୍ଚର ରୋଗ ଅଗ୍ରଗତି ବକ୍ର। (B) L-ଅର୍ନିଥିନ୍ ସହିତ ଚିକିତ୍ସା ପରେ ସାଧାରଣ ବିନ୍ ର ଧଳା ଛାଞ୍ଚର ରୋଗ ଅଗ୍ରଗତି ବକ୍ର (AUDPC) ଅଧୀନରେ ଥିବା କ୍ଷେତ୍ର। ମୂଲ୍ୟଗୁଡ଼ିକ ପାଞ୍ଚଟି ଜୈବିକ ପ୍ରତିକୃତିର ହାରାହାରି ± SD (n = 5) ପ୍ରତିନିଧିତ୍ୱ କରେ। ବିଭିନ୍ନ ଅକ୍ଷର ଚିକିତ୍ସା ମଧ୍ୟରେ ପରିସଂଖ୍ୟାନଗତ ଭାବରେ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ପାର୍ଥକ୍ୟକୁ ସୂଚିତ କରେ (p < 0.05)।
250 mg/L L-ଅର୍ନିଥିନର ବାହ୍ୟ ପ୍ରୟୋଗ 42 ଦିନ ପରେ ଧୀରେ ଧୀରେ ଗଛର ଉଚ୍ଚତା (ଚିତ୍ର 4A), ପ୍ରତି ଗଛର ଶାଖା ସଂଖ୍ୟା (ଚିତ୍ର 4B), ଏବଂ ପ୍ରତି ଗଛର ପତ୍ର ସଂଖ୍ୟା (ଚିତ୍ର 4C) ବୃଦ୍ଧି କରିଥିଲା। ବାଣିଜ୍ୟିକ କବକନାଶକ Rizolex-T (50 mg/L) ଅଧ୍ୟୟନ କରାଯାଇଥିବା ସମସ୍ତ ପୁଷ୍ଟିକର ପାରାମିଟର ଉପରେ ସର୍ବାଧିକ ପ୍ରଭାବ ପକାଇଥିଲେ, 250 mg/L L-ଅର୍ନିଥିନର ବାହ୍ୟ ପ୍ରୟୋଗ ଚିକିତ୍ସା ବିନା ନିୟନ୍ତ୍ରଣ ତୁଳନାରେ ଦ୍ୱିତୀୟ ସର୍ବାଧିକ ପ୍ରଭାବ ପକାଇଥିଲା (ଚିତ୍ର 4A–C)। ଅନ୍ୟପକ୍ଷରେ, L-ଅର୍ନିଥିନ୍ ଚିକିତ୍ସା ଆଲୋକସଂଶ୍ଳେଷଣାତ୍ମକ ରଙ୍ଗକ କ୍ଲୋରୋଫିଲ୍ a (ଚିତ୍ର 4D) ଏବଂ କ୍ଲୋରୋଫିଲ୍ b (ଚିତ୍ର 4E) ର ପରିମାଣ ଉପରେ କୌଣସି ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ପ୍ରଭାବ ପକାଇ ନଥିଲା, କିନ୍ତୁ ନକାରାତ୍ମକ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ (0.44 ± 0.02 mg/g fr wt) ଏବଂ ଯୁକ୍ତାତ୍ମକ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ (0.46 ± 0.02 mg/g fr wt; ଚିତ୍ର 4F) ତୁଳନାରେ ମୋଟ କାରୋଟିନଏଡ୍ ପରିମାଣ (0.56 ± 0.03 mg/g fr wt) ସାମାନ୍ୟ ବୃଦ୍ଧି କରିଥିଲା। ସାମଗ୍ରିକ ଭାବରେ, ଏହି ଫଳାଫଳଗୁଡ଼ିକ ସୂଚାଇ ଦିଏ ଯେ L-ଅର୍ନିଥିନ୍ ଚିକିତ୍ସା କରାଯାଇଥିବା ଶିମ୍ବଗୁଡ଼ିକ ପାଇଁ ଫାଇଟୋଟକ୍ସିକ ନୁହେଁ ଏବଂ ସେମାନଙ୍କର ବୃଦ୍ଧିକୁ ମଧ୍ୟ ଉତ୍ତେଜିତ କରିପାରେ।
ଚିତ୍ର 4. ଗ୍ରୀନହାଉସ୍ ପରିସ୍ଥିତିରେ ସ୍କ୍ଲେରୋଟିନିଆ ସ୍କ୍ଲେରୋଟିଓରମ୍ ଦ୍ୱାରା ସଂକ୍ରମିତ ବିନ୍ ପତ୍ରର ବୃଦ୍ଧି ଗୁଣ ଏବଂ ଆଲୋକସଂଶ୍ଳେଷଣ ରଙ୍ଗକ ଉପରେ ବାହ୍ୟ L-ଅର୍ନିଥିନ୍ ପ୍ରୟୋଗର ପ୍ରଭାବ। (A) ଉଦ୍ଭିଦ ଉଚ୍ଚତା (ସେମି), (B) ପ୍ରତି ଉଦ୍ଭିଦରେ ଶାଖା ସଂଖ୍ୟା, (C) ପ୍ରତି ଉଦ୍ଭିଦରେ ପତ୍ର ସଂଖ୍ୟା, (D) କ୍ଲୋରୋଫିଲ୍ a ବିଷୟବସ୍ତୁ (mg g-1 fr wt), (E) କ୍ଲୋରୋଫିଲ୍ b ବିଷୟବସ୍ତୁ (mg g-1 fr wt), (F) ମୋଟ କ୍ୟାରୋଟିନଏଡ୍ ବିଷୟବସ୍ତୁ (mg g-1 fr wt)। ମୂଲ୍ୟଗୁଡ଼ିକ ପାଞ୍ଚଟି ଜୈବିକ ପ୍ରତିକୃତିର ହାରାହାରି ± SD (n = 5)। ବିଭିନ୍ନ ଅକ୍ଷର ଚିକିତ୍ସା ମଧ୍ୟରେ ପରିସଂଖ୍ୟାନଗତ ଭାବରେ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ପାର୍ଥକ୍ୟ ସୂଚାଇଥାଏ (p < 0.05)।
ପ୍ରତିକ୍ରିୟାଶୀଳ ଅମ୍ଳଜାନ ପ୍ରଜାତି (ROS; ହାଇଡ୍ରୋଜେନ ପେରକ୍ସାଇଡ [H2O2] ଭାବରେ ପ୍ରକାଶିତ) ଏବଂ ମୁକ୍ତ ରେଡିକାଲ୍ସ (ସୁପରଅକ୍ସାଇଡ୍ ଆନାୟନ୍ସ [O2•−] ଭାବରେ ପ୍ରକାଶିତ) ର ସିଟୁ ହିଷ୍ଟୋକେମିକାଲ୍ ସ୍ଥାନୀୟକରଣରୁ ଜଣାପଡିଛି ଯେ L-ଅର୍ନିଥିନ୍ (250 mg/L) ର ବାହ୍ୟ ପ୍ରୟୋଗ H2O2 (96.05 ± 5.33 nmol.g−1 FW; ଚିତ୍ର 5A) ଏବଂ O2•− (32.69 ± 8.56 nmol.g−1 FW; ଚିତ୍ର 5B) ର ସଂଗ୍ରହକୁ ଉଲ୍ଲେଖନୀୟ ଭାବରେ ହ୍ରାସ କରିଛି ଯାହା ଚିକିତ୍ସା ନକରି ସଂକ୍ରମିତ ଗଛ (173.31 ± 12.06 ଏବଂ 149.35 ± 7.94 nmol.g−1 FW, ଯଥାକ୍ରମେ) ଏବଂ ବାଣିଜ୍ୟିକ ଫଙ୍ଗସାଇଡ୍ Rizolex-T (170.12 ± 9.50 ଏବଂ 157.00 ± 7.81 nmol.g−1 fr wt) ର ସଂଗ୍ରହ ତୁଳନାରେ, ଯଥାକ୍ରମେ) 72 ଘଣ୍ଟାରେ। hpt (ଚିତ୍ର 5A, B) ଅଧୀନରେ H2O2 ଏବଂ O2•− ର ଉଚ୍ଚ ସ୍ତର ଜମା ହୋଇଥିଲା। ସେହିପରି, TCA-ଆଧାରିତ ମାଲୋଣ୍ଡିଆଲଡିହାଇଡ୍ (MDA) ପରୀକ୍ଷା ଦେଖାଇଥିଲା ଯେ S. ସ୍କ୍ଲେରୋଟିଓରମ୍-ସଂକ୍ରମିତ ବିନ୍ ଗଛଗୁଡ଼ିକ ସେମାନଙ୍କର ପତ୍ରରେ MDA (113.48 ± 10.02 nmol.g fr wt) ର ଅଧିକ ସ୍ତର ଜମା କରିଥିଲା ​​(ଚିତ୍ର 5C)। ତଥାପି, L-ଅର୍ନିଥିନର ବାହ୍ୟ ପ୍ରୟୋଗ ଲିପିଡ୍ ପେରୋକ୍ସିଡେସନ୍କୁ ଉଲ୍ଲେଖନୀୟ ଭାବରେ ହ୍ରାସ କରିଥିଲା ​​ଯାହା ଚିକିତ୍ସା କରାଯାଇଥିବା ଉଦ୍ଭିଦଗୁଡ଼ିକରେ MDA ପରିମାଣ ହ୍ରାସ ଦ୍ୱାରା ପ୍ରମାଣିତ ହୋଇଛି (33.08 ± 4.00 nmol.g fr wt)।
ଚିତ୍ର 5. ଗ୍ରୀନହାଉସ୍ ପରିସ୍ଥିତିରେ ସଂକ୍ରମଣ ପରେ 72 ଘଣ୍ଟାରେ S. sclerotiorum ଦ୍ୱାରା ସଂକ୍ରମିତ ବିନ୍ ପତ୍ରରେ ଅକ୍ସିଡେଟିଭ୍ ଚାପ ଏବଂ ଅଣ-ଏନଜାଇମେଟିକ୍ ଆଣ୍ଟିଅକ୍ସିଡାଣ୍ଟ ପ୍ରତିରକ୍ଷା ଯନ୍ତ୍ରର ପ୍ରମୁଖ ମାର୍କର ଉପରେ ବାହ୍ୟ L-ଅର୍ନିଥିନ୍ ପ୍ରୟୋଗର ପ୍ରଭାବ। (A) 72 hpt ରେ ହାଇଡ୍ରୋଜେନ୍ ପେରକ୍ସାଇଡ୍ (H2O2; nmol g−1 FW), (B) 72 hpt ରେ ସୁପରଅକ୍ସାଇଡ୍ ଆନିଅନ୍ (O2•−; nmol g−1 FW), (C) 72 hpt ରେ ମାଲୋଣ୍ଡିଆଲଡିହାଇଡ୍ (MDA; nmol g−1 FW), (D) 72 hpt ରେ ମୋଟ ଦ୍ରବଣୀୟ ଫିନୋଲ୍ସ (mg GAE g−1 FW), (E) 72 hpt ରେ ମୋଟ ଦ୍ରବଣୀୟ ଫ୍ଲାଭୋନଏଡ୍ସ (mg RE g−1 FW), (F) 72 hpt ରେ ମୋଟ ମୁକ୍ତ ଆମିନୋ ଏସିଡ୍ (mg g−1 FW), ଏବଂ (G) 72 hpt ରେ ପ୍ରୋଲାଇନ୍ ବିଷୟବସ୍ତୁ (mg g−1 FW)। ମୂଲ୍ୟଗୁଡ଼ିକ 5ଟି ଜୈବିକ ପ୍ରତିକୃତି (n = 5) ର ହାରାହାରି ± ମାନକ ବିଚ୍ୟୁତି (ହାରାହାରି ± SD) ପ୍ରତିନିଧିତ୍ୱ କରେ। ବିଭିନ୍ନ ଅକ୍ଷର ଚିକିତ୍ସା ମଧ୍ୟରେ ପରିସଂଖ୍ୟାନଗତ ଭାବରେ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ପାର୍ଥକ୍ୟ ସୂଚାଇଥାଏ (p < 0.05)।