ଆମେ ପୂର୍ବରୁ ରିପୋର୍ଟ କରିଥିଲୁ ଯେ ଯକୃତ ଫାଇବ୍ରୋସିସ୍ ରୋଗୀଙ୍କ କ୍ଷେତ୍ରରେ ଅନ୍ତନଳୀରୁ ପ୍ରାପ୍ତ ଟ୍ରିପ୍ଟୋଫାନ୍ ମେଟାବୋଲାଇଟ୍ ଇଣ୍ଡୋଲ୍-3-ପ୍ରୋପିଓନିକ୍ ଏସିଡ୍ (IPA) ର ସିରମ୍ ସ୍ତର କମ୍ ଥାଏ। ଏହି ଅଧ୍ୟୟନରେ, ଆମେ ସେରମ୍ IPA ସ୍ତର ସହିତ ମେଦବହୁଳ ଯକୃତରେ ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପ୍ଟୋମ୍ ଏବଂ DNA ମିଥାଇଲୋମ୍ ତଦନ୍ତ କରିଥିଲୁ, ଏବଂ ଭିଟ୍ରୋରେ ହେପାଟିକ୍ ଷ୍ଟେଲେଟ୍ କୋଷ (HSCs) ର ଫେନୋଟାଇପିକ୍ ନିଷ୍କ୍ରିୟତାକୁ ପ୍ରେରଣା ଦେବାରେ IPA ର ଭୂମିକା ବିଷୟରେ ମଧ୍ୟ ତଦନ୍ତ କରିଥିଲୁ।
ଏହି ଅଧ୍ୟୟନରେ ଟାଇପ୍ 2 ଡାଇବେଟିସ୍ ମେଲିଟସ୍ (T2DM) ବିନା 116 ଜଣ ସ୍ଥୂଳକାୟ ରୋଗୀ (ବୟସ 46.8 ± 9.3 ବର୍ଷ; BMI: 42.7 ± 5.0 kg/m²) ସାମିଲ ଥିଲେ ଯେଉଁମାନେ କୁଓପିଓ ବାରିଆଟ୍ରିକ୍ ସର୍ଜରୀ ସେଣ୍ଟର (KOBS) ରେ ବାରିଆଟ୍ରିକ୍ ସର୍ଜରୀ କରିଥିଲେ। ସର୍କୁଲେଟିଂ IPA ସ୍ତର ତରଳ କ୍ରୋମାଟୋଗ୍ରାଫି-ମାସ୍ ସ୍ପେକ୍ଟ୍ରୋମେଟ୍ରି (LC-MS) ଦ୍ୱାରା ମାପ କରାଯାଇଥିଲା, ଲିଭର ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପ୍ଟୋମ୍ ବିଶ୍ଳେଷଣ ମୋଟ RNA ସିକୋଇନ୍ସିଂ ଦ୍ୱାରା କରାଯାଇଥିଲା, ଏବଂ DNA ମିଥାଇଲେସନ୍ ବିଶ୍ଳେଷଣ ଇନଫିନିୟମ୍ ହ୍ୟୁମାନ୍ ମିଥାଇଲେସନ୍ 450 ବିଡ୍ଚିପ୍ ବ୍ୟବହାର କରି କରାଯାଇଥିଲା। ଇନ୍ ଭିଟ୍ରୋ ପରୀକ୍ଷଣ ପାଇଁ ମାନବ ହେପାଟିକ୍ ଷ୍ଟେଲେଟ୍ କୋଷ (LX-2) ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇଥିଲା।
ସେରମ୍ IPA ସ୍ତର ଯକୃତରେ ଆପୋପ୍ଟୋଟିକ୍, ମାଇଟୋଫାଜିକ୍ ଏବଂ ଦୀର୍ଘାୟୁ୍ୟ ପଥଗୁଡ଼ିକରେ ଜଡିତ ଜିନ୍‌ର ପ୍ରକାଶନ ସହିତ ସହସମ୍ପର୍କିତ ଥିଲା। AKT ସେରିନ୍/ଥ୍ରେଓନାଇନ୍ କାଇନେଜ୍ 1 (AKT1) ଜିନ୍ ଲିଭର୍ ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପ୍ଟ ଏବଂ DNA ମିଥାଇଲେସନ୍ ପ୍ରୋଫାଇଲ୍‌ରେ ସବୁଠାରୁ ପ୍ରଚୁର ଏବଂ ପ୍ରଭାବଶାଳୀ ପାରସ୍ପରିକ କ୍ରିୟାଶୀଳ ଜିନ୍ ଥିଲା। IPA ଚିକିତ୍ସା ଆପୋପ୍ଟୋସିସ୍ ପ୍ରେରିତ କରିଥିଲା, ମାଇଟୋଚୋଣ୍ଡ୍ରିଆଲ୍ ଶ୍ୱାସକ୍ରିୟା ହ୍ରାସ କରିଥିଲା, ଏବଂ LX-2 କୋଷର ଫାଇବ୍ରୋସିସ୍, ଆପୋପ୍ଟୋସିସ୍ ଏବଂ ବଞ୍ଚିବା ପାଇଁ ଜଣାଶୁଣା ଜିନ୍‌ର ପ୍ରକାଶନକୁ ମଡ୍ୟୁଲେଟ୍ କରି କୋଷ ଆକୃତି ଏବଂ ମାଇଟୋଚୋଣ୍ଡ୍ରିଆଲ୍ ଗତିବିଧିକୁ ପରିବର୍ତ୍ତନ କରିଥିଲା।
ଏକତ୍ରିତ ଭାବରେ, ଏହି ତଥ୍ୟଗୁଡ଼ିକ ସମର୍ଥନ କରେ ଯେ IPA ର ସମ୍ଭାବ୍ୟ ଚିକିତ୍ସା ପ୍ରଭାବ ଅଛି ଏବଂ ଏହା ଆପୋପ୍ଟୋସିସ୍ ପ୍ରେରିତ କରିପାରେ ଏବଂ HSC ଫେନୋଟାଇପ୍ କୁ ଏକ ନିଷ୍କ୍ରିୟ ଅବସ୍ଥାକୁ ସ୍ଥାନାନ୍ତରିତ କରିପାରେ, ଯାହା ଫଳରେ HSC ସକ୍ରିୟକରଣ ଏବଂ ମାଇଟୋକଣ୍ଡ୍ରିଆଲ୍ ମେଟାବୋଲିଜିମ୍ ସହିତ ବାଧା ସୃଷ୍ଟି କରି ଲିଭର ଫାଇବ୍ରୋସିସ୍ କୁ ନିଷେଧ କରିବାର ସମ୍ଭାବନା ବୃଦ୍ଧି ପାଏ।
ସ୍ଥୂଳତା ଏବଂ ମେଟାବୋଲିକ୍ ସିଣ୍ଡ୍ରୋମର ପ୍ରଚଳନ ମେଟାବୋଲିକ୍ ଭାବରେ ଜଡିତ ଫ୍ୟାଟି ଲିଭର ରୋଗ (MASLD) ର ବର୍ଦ୍ଧିତ ଘଟଣା ସହିତ ଜଡିତ; ଏହି ରୋଗ ସାଧାରଣ ଜନସଂଖ୍ୟାର 25% ରୁ 30% କୁ ପ୍ରଭାବିତ କରେ [1]। MASLD ଏଟିଓଲୋଜିର ମୁଖ୍ୟ ପରିଣାମ ହେଉଛି ଲିଭର ଫାଇବ୍ରୋସିସ୍, ଏକ ଗତିଶୀଳ ପ୍ରକ୍ରିୟା ଯାହା ତନ୍ତୁମୟ ବାହ୍ୟକୋଷୀୟ ମାଟ୍ରିକ୍ସ (ECM) [2] ର ନିରନ୍ତର ସଂଗ୍ରହ ଦ୍ୱାରା ବର୍ଣ୍ଣିତ। ଲିଭର ଫାଇବ୍ରୋସିସ୍ ରେ ଜଡିତ ମୁଖ୍ୟ କୋଷଗୁଡ଼ିକ ହେଉଛି ହେପାଟିକ୍ ଷ୍ଟେଲେଟ୍ କୋଷ (HSCs), ଯାହା ଚାରୋଟି ଜଣାଶୁଣା ଫେନୋଟାଇପ୍ ପ୍ରଦର୍ଶନ କରେ: ଶାନ୍ତ, ସକ୍ରିୟ, ନିଷ୍କ୍ରିୟ ଏବଂ ସେନେସେଣ୍ଟ [3, 4]। HSC ଗୁଡ଼ିକୁ ସକ୍ରିୟ କରାଯାଇପାରିବ ଏବଂ α-ସ୍ମୁଥ୍ ମାଂସପେଶୀ ଆକ୍ଟିନ (α-SMA) ଏବଂ ପ୍ରକାର I କୋଲାଜେନ (Col-I) [5, 6] ର ବର୍ଦ୍ଧିତ ପ୍ରକାଶନ ସହିତ ଏକ ଶାନ୍ତ ରୂପରୁ ପ୍ରୋଲିଫେରେଟିଭ୍ ଫାଇବ୍ରୋବ୍ଲାଷ୍ଟ ପରି କୋଷରେ ପରିବର୍ତ୍ତନ କରାଯାଇପାରିବ। ଲିଭର ଫାଇବ୍ରୋସିସ୍ ରିଭର୍ସଲ୍ ସମୟରେ, ସକ୍ରିୟ HSC ଗୁଡ଼ିକୁ ଆପୋପ୍ଟୋସିସ୍ କିମ୍ବା ନିଷ୍କ୍ରିୟତା ମାଧ୍ୟମରେ ଦୂର କରିଦିଆଯାଏ। ଏହି ପ୍ରକ୍ରିୟାଗୁଡ଼ିକରେ ଫାଇବ୍ରୋଜେନିକ୍ ଜିନ୍‌ର ନିମ୍ନନିୟନ୍ତ୍ରଣ ଏବଂ ପ୍ରୋସର୍ଭାଇଭାଲ୍ ଜିନ୍‌ର ମଡ୍ୟୁଲେସନ୍ (ଯେପରିକି NF-κB ଏବଂ PI3K/Akt ସିଗନାଲିଂ ପାଥ୍ୱେ) [7, 8], ଏବଂ ମାଇଟୋକୋଣ୍ଡ୍ରିଆଲ୍ ଗତିଶୀଳତା ଏବଂ କାର୍ଯ୍ୟରେ ପରିବର୍ତ୍ତନ [9] ଅନ୍ତର୍ଭୁକ୍ତ।
ଅନ୍ତନଳୀରେ ଉତ୍ପାଦିତ ଟ୍ରିପ୍ଟୋଫାନ୍ ମେଟାବୋଲାଇଟ୍ ଇଣ୍ଡୋଲ୍-3-ପ୍ରୋପିଓନିକ୍ ଏସିଡ୍ (IPA) ର ସିରମ୍ ସ୍ତର, MASLD [10-13] ସମେତ ମାନବ ମେଟାବୋଲିକ୍ ରୋଗରେ ହ୍ରାସ ପାଇଥିବା ଦେଖାଯାଇଛି। IPA ଖାଦ୍ୟ ଫାଇବର ଗ୍ରହଣ ସହିତ ଜଡିତ, ଏହାର ଆଣ୍ଟିଅକ୍ସିଡାଣ୍ଟ ଏବଂ ଆଣ୍ଟି-ଇନ୍ଫ୍ଲାମେଟରୀ ପ୍ରଭାବ ପାଇଁ ଜଣାଶୁଣା, ଏବଂ ଭିଭୋ ଏବଂ ଇନ ଭିଟ୍ରୋରେ ଖାଦ୍ୟ-ପ୍ରେରିତ ନନ୍-ଆଲକୋହଲିକ୍ ଷ୍ଟିଟୋହେପାଟାଇଟିସ୍ (NASH) ଫେନୋଟାଇପ୍‌କୁ କମ କରିଥାଏ [11-14]। କିଛି ପ୍ରମାଣ ଆମର ପୂର୍ବ ଅଧ୍ୟୟନରୁ ଆସିଛି, ଯାହା ଦର୍ଶାଉଛି ଯେ କୁଓପିଓ ବାରିଆଟ୍ରିକ୍ ସର୍ଜରୀ ଅଧ୍ୟୟନ (KOBS) ରେ ଲିଭର ଫାଇବ୍ରୋସିସ୍ ବିନା ସ୍ଥୂଳକାୟ ରୋଗୀଙ୍କ ତୁଳନାରେ ଲିଭର ଫାଇବ୍ରୋସିସ୍ ଥିବା ରୋଗୀଙ୍କ ମଧ୍ୟରେ ସିରମ୍ IPA ସ୍ତର କମ୍ ଥିଲା। ଏହା ବ୍ୟତୀତ, ଆମେ ଦେଖାଇଛୁ ଯେ IPA ଚିକିତ୍ସା ଜିନ୍ ର ପ୍ରକାଶନକୁ ହ୍ରାସ କରିପାରିବ ଯାହା ଏକ ମାନବ ହେପାଟିକ୍ ଷ୍ଟେଲେଟ୍ କୋଷ (LX-2) ମଡେଲରେ କୋଷ ଆଡେସନ୍, କୋଷ ସ୍ଥାନାନ୍ତର ଏବଂ ହେମାଟୋପୋଏଟିକ୍ ଷ୍ଟେମ୍ ସେଲ୍ ସକ୍ରିୟକରଣର ଶାସ୍ତ୍ରୀୟ ମାର୍କର ଏବଂ ଏକ ସମ୍ଭାବ୍ୟ ହେପାଟୋପ୍ରୋଟେକ୍ଟିଭ୍ ମେଟାବୋଲାଇଟ୍ [15]। ତଥାପି, ଏହା ସ୍ପଷ୍ଟ ନୁହେଁ ଯେ IPA HSC ଆପୋପ୍ଟୋସିସ୍ ଏବଂ ମାଇଟୋକଣ୍ଡ୍ରିଆଲ୍ ବାୟୋଏନର୍ଜେଟିକ୍ସକୁ ସକ୍ରିୟ କରି ଲିଭର ଫାଇବ୍ରୋସିସ୍ ରିଗ୍ରେସନ୍ କିପରି ପ୍ରେରଣା ଦିଏ।
ଏଠାରେ, ଆମେ ପ୍ରଦର୍ଶନ କରୁଛୁ ଯେ ସେରମ୍ IPA ସ୍ଥୂଳକାୟ କିନ୍ତୁ ଅଣ-ଟାଇପ୍ 2 ମଧୁମେହ (KOBS) ବ୍ୟକ୍ତିମାନଙ୍କ ଯକୃତରେ ଆପୋପ୍ଟୋସିସ୍, ମାଇଟୋଫାଗି ଏବଂ ଦୀର୍ଘାୟୁଗ୍ୟ ପଥଗୁଡ଼ିକରେ ସମୃଦ୍ଧ ଜିନ୍ ପ୍ରକାଶନ ସହିତ ଜଡିତ। ଏହା ବ୍ୟତୀତ, ଆମେ ପାଇଲୁ ଯେ IPA ନିଷ୍କ୍ରିୟକରଣ ପଥ ମାଧ୍ୟମରେ ସକ୍ରିୟ ହେମାଟୋପୋଏଟିକ୍ ଷ୍ଟେମ୍ କୋଷ (HSCs) ର କ୍ଲିୟରାନ୍ସ ଏବଂ ଅବନତିକୁ ପ୍ରୋତ୍ସାହିତ କରିପାରେ। ଏହି ଫଳାଫଳଗୁଡ଼ିକ IPA ପାଇଁ ଏକ ନୂତନ ଭୂମିକା ପ୍ରକାଶ କରେ, ଏହାକୁ ଯକୃତ ଫାଇବ୍ରୋସିସ୍ ରିଗ୍ରେସନ୍କୁ ପ୍ରୋତ୍ସାହିତ କରିବା ପାଇଁ ଏକ ସମ୍ଭାବ୍ୟ ଚିକିତ୍ସା ଲକ୍ଷ୍ୟ କରିଥାଏ।
KOBS କୋହର୍ଟରେ ଏକ ପୂର୍ବ ଅଧ୍ୟୟନରୁ ଜଣାପଡିଛି ଯେ ଲିଭର ଫାଇବ୍ରୋସିସ୍ ଥିବା ରୋଗୀମାନଙ୍କର ଲିଭର ଫାଇବ୍ରୋସିସ୍ ନଥିବା ରୋଗୀଙ୍କ ତୁଳନାରେ କମ୍ ସଞ୍ଚାଳନ IPA ସ୍ତର ଥିଲା [15]। ଟାଇପ୍ 2 ମଧୁମେହର ସମ୍ଭାବ୍ୟ ବିଭ୍ରାନ୍ତିକର ପ୍ରଭାବକୁ ବାଦ ଦେବା ପାଇଁ, ଆମେ ଟାଇପ୍ 2 ମଧୁମେହ ବିନା 116 ଜଣ ସ୍ଥୂଳକାୟ ରୋଗୀଙ୍କୁ (ହାରାହାରି ବୟସ ± SD: 46.8 ± 9.3 ବର୍ଷ; BMI: 42.7 ± 5.0 kg/m2) (ସାରଣୀ 1) ଅଧ୍ୟୟନ ଜନସଂଖ୍ୟା [16] ଭାବରେ ଚାଲୁଥିବା KOBS ଅଧ୍ୟୟନରୁ ନିଯୁକ୍ତ କରିଥିଲୁ। ସମସ୍ତ ଅଂଶଗ୍ରହଣକାରୀ ଲିଖିତ ସୂଚନା ପ୍ରଦାନ କରିଥିଲେ ଏବଂ ହେଲସିଙ୍କିର ଘୋଷଣା (54/2005, 104/2008 ଏବଂ 27/2010) ଅନୁଯାୟୀ ଉତ୍ତର ସାଭୋ କାଉଣ୍ଟି ହସ୍ପିଟାଲର ନୀତିଶାସ୍ତ୍ର କମିଟି ଦ୍ୱାରା ଅଧ୍ୟୟନ ପ୍ରୋଟୋକଲକୁ ଅନୁମୋଦିତ କରାଯାଇଥିଲା।
ବାରିଆଟ୍ରିକ୍ ଅସ୍ତ୍ରୋପଚାର ସମୟରେ ଲିଭର ବାୟୋପସି ନମୁନା ସଂଗ୍ରହ କରାଯାଇଥିଲା ଏବଂ ପୂର୍ବରୁ ବର୍ଣ୍ଣିତ ମାନଦଣ୍ଡ [17, 18] ଅନୁଯାୟୀ ଅଭିଜ୍ଞ ରୋଗ ବିଶେଷଜ୍ଞଙ୍କ ଦ୍ୱାରା ହିଷ୍ଟୋଲୋଜିକାଲ୍ ମୂଲ୍ୟାଙ୍କନ କରାଯାଇଥିଲା। ମୂଲ୍ୟାଙ୍କନ ମାନଦଣ୍ଡଗୁଡ଼ିକ ପରିପୂରକ ସାରଣୀ S1 ରେ ସଂକ୍ଷିପ୍ତ କରାଯାଇଛି ଏବଂ ପୂର୍ବରୁ ବର୍ଣ୍ଣିତ ହୋଇଛି [19]।
ମେଟାବୋଲୋମିକ୍ସ ବିଶ୍ଳେଷଣ (n = 116) ପାଇଁ ଅଣଲକ୍ଷ୍ୟିତ ତରଳ କ୍ରୋମାଟୋଗ୍ରାଫି-ମାସ୍ ସ୍ପେକ୍ଟ୍ରୋମେଟ୍ରି (LC-MS) ଦ୍ୱାରା ଫାଷ୍ଟିଂ ସେରମ୍ ନମୁନାଗୁଡ଼ିକୁ ବିଶ୍ଳେଷଣ କରାଯାଇଥିଲା। ପୂର୍ବରୁ ବର୍ଣ୍ଣିତ ହୋଇଥିବା ପରି ଏକ UHPLC-qTOF-MS ସିଷ୍ଟମ୍ (1290 LC, 6540 qTOF-MS, Agilent Technologies, Waldbronn, Karlsruhe, Germany) ବ୍ୟବହାର କରି ନମୁନାଗୁଡ଼ିକୁ ବିଶ୍ଳେଷଣ କରାଯାଇଥିଲା। ଆଇସୋପ୍ରୋପିଲ୍ ଆଲକୋହଲ୍ (IPA) ର ଚିହ୍ନଟ ଧାରଣ ସମୟ ଏବଂ MS/MS ସ୍ପେକ୍ଟ୍ରମକୁ ଶୁଦ୍ଧ ମାନଦଣ୍ଡ ସହିତ ତୁଳନା ଉପରେ ଆଧାରିତ ଥିଲା। ସମସ୍ତ ପରବର୍ତ୍ତୀ ବିଶ୍ଳେଷଣରେ IPA ସିଗନାଲ ତୀବ୍ରତା (ଶିଖର କ୍ଷେତ୍ର) ବିଚାର କରାଯାଇଥିଲା [20]।
ଇଲୁମିନା ହାଇସେକ୍ 2500 ବ୍ୟବହାର କରି ସମ୍ପୂର୍ଣ୍ଣ ଯକୃତ RNA ସିକୋଇନ୍ସିଂ କରାଯାଇଥିଲା ଏବଂ ପୂର୍ବରୁ ବର୍ଣ୍ଣିତ [19, 21, 22] ଅନୁଯାୟୀ ତଥ୍ୟକୁ ପୂର୍ବ ପ୍ରକ୍ରିୟାକରଣ କରାଯାଇଥିଲା। ଆମେ MitoMiner 4.0 ଡାଟାବେସ୍ [23] ରୁ ଚୟନ କରାଯାଇଥିବା 1957 ଜିନ୍ ବ୍ୟବହାର କରି ମାଇଟୋକଣ୍ଡ୍ରିଆଲ୍ କାର୍ଯ୍ୟ/ବାୟୋଜେନେସିସ୍ ପ୍ରଭାବିତ ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପ୍ଟର ଲକ୍ଷ୍ୟଭେଦକ ପ୍ରକାଶନ ବିଶ୍ଳେଷଣ କରିଥିଲୁ। ପୂର୍ବରୁ ବର୍ଣ୍ଣିତ [24, 25] ପରି ସମାନ ପଦ୍ଧତି ବ୍ୟବହାର କରି Infinium HumanMethylation450 BeadChip (Illumina, San Diego, CA, USA) ବ୍ୟବହାର କରି ଯକୃତ DNA ମିଥାଇଲେସନ୍ ବିଶ୍ଳେଷଣ କରାଯାଇଥିଲା।
ମାନବ ଯକୃତ ଷ୍ଟେଲେଟ୍ କୋଷ (LX-2) କୁ ପ୍ରଫେସର ଷ୍ଟେଫାନୋ ରୋମିଓ ଦୟାପୂର୍ବକ ପ୍ରଦାନ କରିଥିଲେ ଏବଂ DMEM/F12 ମାଧ୍ୟମରେ (Biowest, L0093-500, 1% Pen/Strep; Lonza, DE17-602E, 2% FBS; Gibco, 10270-106) କଲଚର ଏବଂ ରକ୍ଷଣାବେକ୍ଷଣ କରାଯାଇଥିଲା। IPA ର କାର୍ଯ୍ୟକାରୀ ଡୋଜ୍ ଚୟନ କରିବା ପାଇଁ, LX-2 କୋଷଗୁଡ଼ିକୁ 24 ଘଣ୍ଟା ପାଇଁ DMEM/F12 ମାଧ୍ୟମରେ IPA ର ବିଭିନ୍ନ ସାନ୍ଦ୍ରତା (10 μM, 100 μM ଏବଂ 1 mM; Sigma, 220027) ସହିତ ଚିକିତ୍ସା କରାଯାଇଥିଲା। ଏହା ବ୍ୟତୀତ, HSC ଗୁଡିକୁ ନିଷ୍କ୍ରିୟ କରିବା ପାଇଁ IPA ର କ୍ଷମତା ଅନୁସନ୍ଧାନ କରିବା ପାଇଁ, LX-2 କୋଷଗୁଡ଼ିକୁ 5 ng/ml TGF-β1 (R&D ସିଷ୍ଟମ, 240-B-002/CF) ଏବଂ 1 mM IPA ସହିତ 24 ଘଣ୍ଟା ପାଇଁ ସେରମ୍-ମୁକ୍ତ ମାଧ୍ୟମରେ ସହ-ଚିକିତ୍ସା କରାଯାଇଥିଲା। ସମ୍ପୃକ୍ତ ଯାନବାହନ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ ପାଇଁ, TGF-β1 ଚିକିତ୍ସା ପାଇଁ 0.1% BSA ଯୁକ୍ତ 4 nM HCL ଏବଂ IPA ଚିକିତ୍ସା ପାଇଁ 0.05% DMSO ବ୍ୟବହୃତ ହୋଇଥିଲା, ଏବଂ ଉଭୟକୁ ମିଶ୍ରଣ ଚିକିତ୍ସା ପାଇଁ ଏକାଠି ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇଥିଲା।
ନିର୍ମାତାଙ୍କ ନିର୍ଦ୍ଦେଶ ଅନୁଯାୟୀ 7-AAD (Biolegend, San Diego, CA, USA, Cat# 640922) ସହିତ FITC Annexin V Apoptosis Detection Kit ବ୍ୟବହାର କରି Apoptosis ମୂଲ୍ୟାଙ୍କନ କରାଯାଇଥିଲା। ସଂକ୍ଷେପରେ, LX-2 (1 × 105 କୋଷ/କୂପ) କୁ 12-କୂପ ପ୍ଲେଟରେ ରାତାରାତି କଲଚର କରାଯାଇଥିଲା ଏବଂ ତା’ପରେ IPA କିମ୍ବା IPA ଏବଂ TGF-β1 ର ବହୁ ଡୋଜ୍ ସହିତ ଚିକିତ୍ସା କରାଯାଇଥିଲା। ପରଦିନ, ଭାସମାନ ଏବଂ ଆଡେରେଣ୍ଟ କୋଷଗୁଡ଼ିକୁ ସଂଗ୍ରହ କରାଯାଇଥିଲା, ଟ୍ରିପ୍ସିନାଇଜେସନ୍ କରାଯାଇଥିଲା, PBS ସହିତ ଧୋଇ ଦିଆଯାଇଥିଲା, Annexin V ବାଇଣ୍ଡିଂ ବଫରରେ ପୁନଃସ୍ଥାପିତ କରାଯାଇଥିଲା, ଏବଂ 15 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ FITC-Annexin V ଏବଂ 7-AAD ସହିତ ଇନକ୍ୟୁବେଟେଡ୍ କରାଯାଇଥିଲା।
ଜୀବନ୍ତ କୋଷଗୁଡିକରେ ଥିବା ମାଇଟୋକଣ୍ଡ୍ରିଆକୁ Mitotracker™ Red CMXRos (MTR) (ଥର୍ମୋ ଫିସର ସାଇଣ୍ଟିଫିକ୍, କାର୍ଲସବାଡ୍, CA) ବ୍ୟବହାର କରି ଅକ୍ସିଡେଟିଭ୍ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ପାଇଁ ଷ୍ଟେନ୍ କରାଯାଇଥିଲା। MTR ପରୀକ୍ଷା ପାଇଁ, LX-2 କୋଷଗୁଡିକୁ IPA ଏବଂ TGF-β1 ସହିତ ସମାନ ଘନତ୍ୱରେ ଇନକ୍ୟୁବେଟେଡ୍ କରାଯାଇଥିଲା। 24 ଘଣ୍ଟା ପରେ, ଜୀବନ୍ତ କୋଷଗୁଡିକୁ ଟ୍ରିପ୍ସିନାଇଜେଡ୍ କରାଯାଇଥିଲା, PBS ସହିତ ଧୋଇ ଦିଆଯାଇଥିଲା, ଏବଂ ତା’ପରେ ପୂର୍ବରୁ ବର୍ଣ୍ଣିତ [26] ଅନୁସାରେ 37 °C ରେ 20 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ ସେରମ୍-ମୁକ୍ତ ମାଧ୍ୟମରେ 100 μM MTR ସହିତ ଇନକ୍ୟୁବେଟେଡ୍ କରାଯାଇଥିଲା। ଜୀବନ୍ତ କୋଷ ଆକାର ଏବଂ ସାଇଟପ୍ଲାଜମିକ୍ ଜଟିଳତାକୁ ଯଥାକ୍ରମେ ଫରୱାର୍ଡ ସ୍କେଟର (FSC) ଏବଂ ପାର୍ଶ୍ୱ ସ୍କେଟର (SSC) ପାରାମିଟର ବ୍ୟବହାର କରି ବିଶ୍ଳେଷଣ କରାଯାଇଥିଲା।
ସମସ୍ତ ତଥ୍ୟ (30,000 ଇଭେଣ୍ଟ) NovoCyte Quanteon (Agilent) ବ୍ୟବହାର କରି ସଂଗ୍ରହ କରାଯାଇଥିଲା ଏବଂ NovoExpress® 1.4.1 କିମ୍ବା FlowJo V.10 ସଫ୍ଟୱେର୍ ବ୍ୟବହାର କରି ବିଶ୍ଳେଷଣ କରାଯାଇଥିଲା।
ନିର୍ମାତାଙ୍କ ନିର୍ଦ୍ଦେଶ ଅନୁଯାୟୀ ସିହର୍ସ ଏକ୍ସଟ୍ରାସେଲ୍ୟୁଲାର ଫ୍ଲକ୍ସ ଆନାଲାଇଜର (ଏଜିଲେଣ୍ଟ ଟେକ୍ନୋଲୋଜିସ୍, ସାଣ୍ଟା କ୍ଲାରା, CA) ବ୍ୟବହାର କରି ଅମ୍ଳଜାନ ବ୍ୟବହାର ହାର (OCR) ଏବଂ ଏକ୍ସଟ୍ରାସେଲ୍ୟୁଲାର ଏସିଡିଫିକେସନ୍ ହାର (ECAR) ପ୍ରକୃତ ସମୟରେ ମାପ କରାଯାଇଥିଲା ଯାହା ସିହର୍ସ XF ସେଲ୍ ମିଟୋ ଷ୍ଟ୍ରେସ୍ ସହିତ ସଜ୍ଜିତ ଥିଲା। ସଂକ୍ଷେପରେ, 2 × 104 LX-2 ସେଲ୍ / କୂପକୁ XF96 ସେଲ୍ କଲଚର୍ ପ୍ଲେଟ୍ ଉପରେ ସିଡ୍ କରାଯାଇଥିଲା। ରାତାରାତି ଇନକ୍ୟୁବେସନ୍ ପରେ, କୋଷଗୁଡ଼ିକୁ ଆଇସୋପ୍ରୋପାନୋଲ୍ (IPA) ଏବଂ TGF-β1 (ପରିପୂରକ ପଦ୍ଧତି 1) ସହିତ ଚିକିତ୍ସା କରାଯାଇଥିଲା। ସିହର୍ସ XF ୱେଭ୍ ସଫ୍ଟୱେର୍ ବ୍ୟବହାର କରି ଡାଟା ବିଶ୍ଳେଷଣ କରାଯାଇଥିଲା, ଯେଉଁଥିରେ ସିହର୍ସ XF ସେଲ୍ ଏନର୍ଜି ଫେନୋଟାଇପ୍ ଟେଷ୍ଟ ରିପୋର୍ଟ ଜେନେରେଟର୍ ଅନ୍ତର୍ଭୁକ୍ତ। ଏଥିରୁ, ଏକ ବାୟୋଏନର୍ଜେଟିକ୍ ହେଲ୍ଥ ଇଣ୍ଡେକ୍ସ (BHI) ଗଣନା କରାଯାଇଥିଲା [27]।
ମୋଟ RNA କୁ cDNA ରେ ଲିପିବଦ୍ଧ କରାଯାଇଥିଲା। ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ପଦ୍ଧତି ପାଇଁ, ସନ୍ଦର୍ଭ ଦେଖନ୍ତୁ [15]। ମାନବ 60S ରାଇବୋସୋମାଲ ଏସିଡିକ୍ ପ୍ରୋଟିନ୍ P0 (RPLP0) ଏବଂ ସାଇକ୍ଲୋଫିଲିନ୍ A1 (PPIA) mRNA ସ୍ତରଗୁଡ଼ିକୁ ଗଠନାତ୍ମକ ଜିନ୍ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ ଭାବରେ ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇଥିଲା। QuantStudio 6 pro Real-Time PCR ସିଷ୍ଟମ୍ (ଥର୍ମୋ ଫିସର, ଲ୍ୟାଣ୍ଡସ୍ମିୟର, ଦି ନେଦରଲ୍ୟାଣ୍ଡ) TaqMan™ ଫାଷ୍ଟ ଆଡଭାନ୍ସଡ୍ ମାଷ୍ଟର ମିକ୍ସ କିଟ୍ (ଆପ୍ଲାଏଡ୍ ବାୟୋସିଷ୍ଟମ୍ସ) କିମ୍ବା ସେନ୍ସିଫାଷ୍ଟ SYBR Lo-ROX କିଟ୍ (ବାୟୋଲାଇନ୍, BIO 94050) ସହିତ ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇଥିଲା, ଏବଂ ତୁଳନାତ୍ମକ Ct ମୂଲ୍ୟ ସାଇକେଲିଂ ପାରାମିଟର (ΔΔCt) ଏବଂ ∆∆Ct ପଦ୍ଧତି ବ୍ୟବହାର କରି ଆପେକ୍ଷିକ ଜିନ୍ ପ୍ରକାଶନ ଫୋଲ୍ଡ ଗଣନା କରାଯାଇଥିଲା। ପ୍ରାଇମରଗୁଡ଼ିକର ବିବରଣୀ ପରିପୂରକ ସାରଣୀ S2 ଏବଂ S3 ରେ ପ୍ରଦାନ କରାଯାଇଛି।
ପୂର୍ବରୁ ବର୍ଣ୍ଣିତ [28] ଅନୁଯାୟୀ DNeasy ରକ୍ତ ଏବଂ ଟିସୁ କିଟ୍ (Qiagen) ବ୍ୟବହାର କରି ନ୍ୟୁକ୍ଲିୟର DNA (ncDNA) ଏବଂ mitochondrial DNA (mtDNA) ବାହାର କରାଯାଇଥିଲା। ପ୍ରତ୍ୟେକ ଲକ୍ଷ୍ୟ mtDNA କ୍ଷେତ୍ରର ଅନୁପାତ ତିନୋଟି ନ୍ୟୁକ୍ଲିୟର DNA କ୍ଷେତ୍ର (mtDNA/ncDNA) ର ଜ୍ୟାମିତିକ ମଧ୍ୟମା ଗଣନା କରି mtDNA ର ଆପେକ୍ଷିକ ପରିମାଣ ଗଣନା କରାଯାଇଥିଲା, ଯେପରି ପରିପୂରକ ପଦ୍ଧତି 2 ରେ ବିସ୍ତୃତ ଭାବରେ ଦର୍ଶାଯାଇଛି। mtDNA ଏବଂ ncDNA ପାଇଁ ପ୍ରାଇମରଗୁଡ଼ିକର ବିବରଣୀ ପରିପୂରକ ସାରଣୀ S4 ରେ ପ୍ରଦାନ କରାଯାଇଛି।
ଜୀବନ୍ତ କୋଷଗୁଡ଼ିକୁ Mitotracker™ Red CMXRos (MTR) (ଥର୍ମୋ ଫିସର ସାଇଣ୍ଟିଫିକ୍, କାର୍ଲସବାଡ୍, CA) ସହିତ ରଙ୍ଗିତ କରାଯାଇଥିଲା ଯାହା ଦ୍ୱାରା ଆନ୍ତଃକୋଷୀୟ ଏବଂ ଆନ୍ତଃକୋଷୀୟ ମାଇଟୋକଣ୍ଡ୍ରିଆଲ୍ ନେଟୱାର୍କଗୁଡ଼ିକୁ ଦୃଶ୍ୟମାନ କରାଯାଇଥିଲା। LX-2 କୋଷଗୁଡ଼ିକ (1 × 104 କୋଷ/କୂପ) କୁ ଅନୁରୂପ ଗ୍ଲାସ୍-ବଟମ୍ କଲଚର ପ୍ଲେଟ୍ (Ibidi GmbH, Martinsried, ଜର୍ମାନୀ) ରେ କାଚ ସ୍ଲାଇଡ୍ ଉପରେ କଲଚର କରାଯାଇଥିଲା। 24 ଘଣ୍ଟା ପରେ, ଜୀବନ୍ତ LX-2 କୋଷଗୁଡ଼ିକୁ 100 μM MTR ସହିତ 20 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ 37 °C ରେ ଇନକ୍ୟୁବେଟେଡ୍ କରାଯାଇଥିଲା ଏବଂ କୋଷ ନ୍ୟୁକ୍ଲିକାଗୁଡ଼ିକୁ DAPI (1 μg/ml, Sigma-Aldrich) ସହିତ ରଙ୍ଗିତ କରାଯାଇଥିଲା ଯେପରି ପୂର୍ବରୁ ବର୍ଣ୍ଣିତ ହୋଇଥିଲା [29]। 63×NA 1.3 ଅବଜେକ୍ଟିଭ୍ ବ୍ୟବହାର କରି 5% CO2 ସହିତ ଆର୍ଦ୍ର ବାତାବରଣରେ 37 °C ରେ Zeiss Axio Observer ଇନଭାର୍ଟଡ୍ ମାଇକ୍ରୋସ୍କୋପ୍ (କାର୍ଲ Zeiss ମାଇକ୍ରୋଇମେଜିଂ GmbH, ଜେନା, ଜର୍ମାନୀ) ସହିତ ଏକ Zeiss LSM 800 କନଫୋକାଲ୍ ମଡ୍ୟୁଲ୍ ସହିତ ସଜ୍ଜିତ ଏକ Zeiss Axio Observer ଇନଭାର୍ଟଡ୍ ମାଇକ୍ରୋସ୍କୋପ୍ (କାର୍ଲ Zeiss ମାଇକ୍ରୋଇମେଜିଂ GmbH, ଜେନା, ଜର୍ମାନୀ) ବ୍ୟବହାର କରି ଭିଜୁଆଲାଇଜ୍ କରାଯାଇଥିଲା। ଆମେ ପ୍ରତ୍ୟେକ ନମୁନା ପ୍ରକାର ପାଇଁ ଦଶଟି Z-ସିରିଜ୍ ପ୍ରତିଛବି ହାସଲ କରିଛୁ। ପ୍ରତ୍ୟେକ Z-ସିରିଜ୍ ରେ 30ଟି ବିଭାଗ ଅଛି, ପ୍ରତ୍ୟେକଟିର ଘନତା 9.86 μm। ପ୍ରତ୍ୟେକ ନମୁନା ପାଇଁ, ZEN 2009 ସଫ୍ଟୱେର୍ (କାର୍ଲ ଜେସ୍ ମାଇକ୍ରୋଇମେଜିଂ GmbH, ଜେନା, ଜର୍ମାନୀ) ବ୍ୟବହାର କରି ଦଶଟି ଭିନ୍ନ ଦୃଷ୍ଟିକୋଣ କ୍ଷେତ୍ରର ପ୍ରତିଛବି ହାସଲ କରାଯାଇଥିଲା, ଏବଂ ପରିପୂରକ ପଦ୍ଧତି 3 ରେ ବିସ୍ତୃତ ପାରାମିଟର ଅନୁସାରେ ImageJ ସଫ୍ଟୱେର୍ (v1.54d) [30, 31] ବ୍ୟବହାର କରି ମାଇଟୋକଣ୍ଡ୍ରିଆଲ୍ ମର୍ଫୋଲୋଜି ବିଶ୍ଳେଷଣ କରାଯାଇଥିଲା।
କୋଷଗୁଡ଼ିକୁ 0.1 M ଫସଫେଟ୍ ବଫରରେ 2% ଗ୍ଲୁଟାରାଲଡିହାଇଡ୍ ସହିତ ସ୍ଥିର କରାଯାଇଥିଲା, ତା’ପରେ 1% ଓସମିୟମ୍ ଟେଟ୍ରୋକ୍ସାଇଡ୍ ଦ୍ରବଣ (ସିଗ୍ମା ଆଲଡ୍ରିଚ୍, MO, USA) ସହିତ ସ୍ଥିର କରାଯାଇଥିଲା, ଧୀରେ ଧୀରେ ଆସିଟୋନ୍ ସହିତ ନିର୍ଜଳିତ କରାଯାଇଥିଲା (ମର୍କ, ଡାର୍ମଷ୍ଟାଡ୍, ଜର୍ମାନୀ), ଏବଂ ଶେଷରେ ଇପୋକ୍ସି ରେଜିନ୍ ରେ ସ୍ଥାପିତ କରାଯାଇଥିଲା। ଅଲଟ୍ରାଥିନ୍ ବିଭାଗଗୁଡ଼ିକୁ 1% ୟୁରାନିଲ୍ ଆସେଟେଟ୍ (ମର୍କ, ଡାର୍ମଷ୍ଟାଡ୍, ଜର୍ମାନୀ) ଏବଂ 1% ସୀସା ସାଇଟ୍ରେଟ୍ (ମର୍କ, ଡାର୍ମଷ୍ଟାଡ୍, ଜର୍ମାନୀ) ସହିତ ପ୍ରସ୍ତୁତ ଏବଂ ରଙ୍ଗ କରାଯାଇଥିଲା। 80 kV ର ତ୍ୱରାନ୍ୱିତ ଭୋଲଟେଜରେ JEM 2100F EXII ଟ୍ରାନ୍ସମିସନ୍ ଇଲେକ୍ଟ୍ରୋନ୍ ମାଇକ୍ରୋସ୍କୋପ୍ (JEOL ଲିମିଟେଡ୍, ଟୋକିଓ, ଜାପାନ) ବ୍ୟବହାର କରି ଅଲଟ୍ରାଷ୍ଟ୍ରକ୍ଚରାଲ୍ ପ୍ରତିଛବିଗୁଡ଼ିକ ପ୍ରାପ୍ତ କରାଯାଇଥିଲା।
Zeiss ଇନଭାର୍ଟଡ୍ ଲାଇଟ୍ ମାଇକ୍ରୋସ୍କୋପ୍ (Zeiss Axio Vert.A1 ଏବଂ AxioCam MRm, ଜେନା, ଜର୍ମାନୀ) ବ୍ୟବହାର କରି 50x ମ୍ୟାଗ୍ନିଫିକେସନ୍ ରେ ଫେଜ୍-କଣ୍ଟ୍ରାଷ୍ଟ ମାଇକ୍ରୋସ୍କୋପି ଦ୍ୱାରା 24 ଘଣ୍ଟା ପାଇଁ IPA ସହିତ ଚିକିତ୍ସା କରାଯାଇଥିବା LX-2 କୋଷଗୁଡ଼ିକର ଆକୃତି ବିଶ୍ଳେଷଣ କରାଯାଇଥିଲା।
କ୍ଲିନିକାଲ୍ ତଥ୍ୟକୁ ମଧ୍ୟମ ± ମାନକ ବିଚ୍ୟୁତି କିମ୍ବା ମଧ୍ୟମା (ଇଣ୍ଟରକ୍ୱାର୍ଟାଇଲ୍ ପରିସର: IQR) ଭାବରେ ପ୍ରକାଶ କରାଯାଇଥିଲା। ତିନୋଟି ଅଧ୍ୟୟନ ଗୋଷ୍ଠୀ ମଧ୍ୟରେ ପାର୍ଥକ୍ୟ ତୁଳନା କରିବା ପାଇଁ ଭିନ୍ନତା (ନିରନ୍ତର ଚଳକ) କିମ୍ବା χ² ପରୀକ୍ଷା (ବର୍ଗୀୟ ଚଳକ) ର ଏକ-ପାଖ ବିଶ୍ଳେଷଣ ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇଥିଲା। ଏକାଧିକ ପରୀକ୍ଷଣ ପାଇଁ ସଂଶୋଧନ କରିବା ପାଇଁ ମିଥ୍ୟା ପଜିଟିଭ୍ ହାର (FDR) ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇଥିଲା, ଏବଂ FDR < 0.05 ସହିତ ଜିନ୍ କୁ ପରିସଂଖ୍ୟାନଗତ ଭାବରେ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ବିବେଚନା କରାଯାଇଥିଲା। IPA ସିଗନାଲ ତୀବ୍ରତା ସହିତ CpG DNA ମିଥାଇଲେସନ ସହ ସମ୍ପର୍କ ସ୍ଥାପନ କରିବା ପାଇଁ ସ୍ପିୟର୍ମ୍ୟାନ୍ ସହସଂବନ୍ଧ ବିଶ୍ଳେଷଣ ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇଥିଲା, ନାମମାତ୍ର p ମୂଲ୍ୟ (p < 0.05) ରିପୋର୍ଟ କରାଯାଇଥିଲା।
ପଥୱେ ବିଶ୍ଳେଷଣ ଏକ ୱେବ୍-ଆଧାରିତ ଜିନ୍ ସେଟ୍ ବିଶ୍ଳେଷଣ ଉପକରଣ (WebGestalt) ବ୍ୟବହାର କରି ୨୬୮ଟି ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପ୍ଟ (ନାମାନ୍ତ p < ୦.୦୧), ୧୧୯ଟି ମାଇଟୋକଣ୍ଡ୍ରିଆ-ସଂଯୁକ୍ତ ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପ୍ଟ (ନାମାନ୍ତ p < ୦.୦୫), ଏବଂ ୩୦୯୩ଟି ଲିଭର ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପ୍ଟ ମଧ୍ୟରୁ ୪୩୫୦ CpG ପାଇଁ କରାଯାଇଥିଲା ଯାହା ସଞ୍ଚାଳନ ସିରମ୍ IPA ସ୍ତର ସହିତ ଜଡିତ ଥିଲା। ମୁକ୍ତ ଭାବରେ ଉପଲବ୍ଧ Venny DB (ସଂସ୍କରଣ ୨.୧.୦) ଉପକରଣକୁ ଓଭରଲାପିଂ ଜିନ୍ ଖୋଜିବା ପାଇଁ ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇଥିଲା, ଏବଂ StringDB (ସଂସ୍କରଣ ୧୧.୫) ପ୍ରୋଟିନ୍-ପ୍ରୋଟିନ୍ ପାରସ୍ପରିକ କ୍ରିୟାକୁ ଦୃଶ୍ୟମାନ କରିବା ପାଇଁ ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇଥିଲା।
LX-2 ପରୀକ୍ଷଣ ପାଇଁ, D'Agostino-Pearson ପରୀକ୍ଷା ବ୍ୟବହାର କରି ସାଧାରଣତା ପାଇଁ ନମୁନାଗୁଡ଼ିକୁ ପରୀକ୍ଷା କରାଯାଇଥିଲା। ଅତି କମରେ ତିନୋଟି ଜୈବିକ ପ୍ରତିକୃତିରୁ ତଥ୍ୟ ପ୍ରାପ୍ତ କରାଯାଇଥିଲା ଏବଂ Bonferroni ପୋଷ୍ଟ ହକ୍ ପରୀକ୍ଷା ସହିତ ଏକ-ପାଖ ANOVA କରାଯାଇଥିଲା। 0.05 ରୁ କମ୍ p-ମୂଲ୍ୟକୁ ପରିସଂଖ୍ୟାନଗତ ଭାବରେ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ବୋଲି ବିବେଚନା କରାଯାଇଥିଲା। ତଥ୍ୟକୁ ମଧ୍ୟମ ± SD ଭାବରେ ଉପସ୍ଥାପନ କରାଯାଇଛି, ଏବଂ ପ୍ରତ୍ୟେକ ଚିତ୍ରରେ ପରୀକ୍ଷଣ ସଂଖ୍ୟା ସୂଚିତ କରାଯାଇଛି। ସମସ୍ତ ବିଶ୍ଳେଷଣ ଏବଂ ଗ୍ରାଫ୍ ୱିଣ୍ଡୋଜ୍ ପାଇଁ GraphPad Prism 8 ପରିସଂଖ୍ୟାନ ସଫ୍ଟୱେର୍ ବ୍ୟବହାର କରି କରାଯାଇଥିଲା (GraphPad Software Inc., ସଂସ୍କରଣ 8.4.3, ସାନ ଡିଏଗୋ, USA)।
ପ୍ରଥମେ, ଆମେ ଯକୃତ, ସମ୍ପୂର୍ଣ୍ଣ ଶରୀର ଏବଂ ମାଇଟୋକଣ୍ଡ୍ରିଆଲ ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପ୍ଟ ସହିତ ସେରମ୍ IPA ସ୍ତରର ସମ୍ପର୍କ ଅନୁସନ୍ଧାନ କରିଥିଲୁ। ମୋଟ ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପ୍ଟ ପ୍ରୋଫାଇଲରେ, ସେରମ୍ IPA ସ୍ତର ସହିତ ଜଡିତ ସବୁଠାରୁ ଶକ୍ତିଶାଳୀ ଜିନ୍ ଥିଲା MAPKAPK3 (FDR = 0.0077; ମାଇଟୋଜେନ୍-ସକ୍ରିୟ ପ୍ରୋଟିନ୍ କାଇନେଜ୍-ସକ୍ରିୟ ପ୍ରୋଟିନ୍ କାଇନେଜ୍ 3); ମାଇଟୋକଣ୍ଡ୍ରିଆ-ସକ୍ରିୟ ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପ୍ଟ ପ୍ରୋଫାଇଲରେ, ସବୁଠାରୁ ଶକ୍ତିଶାଳୀ ଜଡିତ ଜିନ୍ ଥିଲା AKT1 (FDR = 0.7621; AKT ସେରିନ୍/ଥ୍ରେଓନାଇନ୍ କାଇନେଜ୍ 1) (ଅତିରିକ୍ତ ଫାଇଲ୍ 1 ଏବଂ ଅତିରିକ୍ତ ଫାଇଲ୍ 2)।
ତା'ପରେ ଆମେ ବିଶ୍ୱସ୍ତରୀୟ ପ୍ରତିଲିପି (n = 268; p < 0.01) ଏବଂ ମାଇଟୋକଣ୍ଡ୍ରିଆ-ସଂଯୁକ୍ତ ପ୍ରତିଲିପି (n = 119; p < 0.05) ବିଶ୍ଳେଷଣ କରିଥିଲୁ, ଶେଷରେ ଆପୋପ୍ଟୋସିସକୁ ସବୁଠାରୁ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ କାନୋନିକାଲ୍ ପଥ (p = 0.0089) ଭାବରେ ଚିହ୍ନଟ କରିଥିଲୁ। ସେରମ୍ IPA ସ୍ତର ସହିତ ଜଡିତ ମାଇଟୋକଣ୍ଡ୍ରିଆଲ୍ ପ୍ରତିଲିପି ପାଇଁ, ଆମେ ଆପୋପ୍ଟୋସିସ (FDR = 0.00001), ମାଇଟୋଫାଗି (FDR = 0.00029), ଏବଂ TNF ସଙ୍କେତ ପଥ (FDR = 0.000006) (ଚିତ୍ର 1A, ସାରଣୀ 2, ଏବଂ ପରିପୂରକ ଚିତ୍ର 1A-B) ଉପରେ ଧ୍ୟାନ ଦେଇଥିଲୁ।
ସେରମ୍ IPA ସ୍ତର ସହିତ ମାନବ ଯକୃତରେ ବିଶ୍ୱସ୍ତରୀୟ, ମାଇଟୋକଣ୍ଡ୍ରିଆ-ସମ୍ବନ୍ଧିତ ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପ୍ଟ ଏବଂ DNA ମିଥାଇଲେସନର ଓଭରଲାପିଂ ବିଶ୍ଳେଷଣ। A 268 ବିଶ୍ୱସ୍ତରୀୟ ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପ୍ଟ, 119 ମାଇଟୋକଣ୍ଡ୍ରିଆ-ସମ୍ବନ୍ଧିତ ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପ୍ଟ ଏବଂ DNA ମିଥାଇଲେଟେଡ୍ ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପ୍ଟକୁ ପ୍ରତିନିଧିତ୍ୱ କରେ ଯାହା ସେରମ୍ IPA ସ୍ତର ସହିତ ଜଡିତ 3092 CpG ସାଇଟ୍ ସହିତ ମ୍ୟାପ୍ କରାଯାଇଛି (p ମୂଲ୍ୟ < 0.01 ବିଶ୍ୱସ୍ତରୀୟ ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପ୍ଟ ଏବଂ DNA ମିଥାଇଲେଟେଡ୍ ପାଇଁ, ଏବଂ ମାଇଟୋକଣ୍ଡ୍ରିଆଲ୍ ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପ୍ଟ ପାଇଁ p ମୂଲ୍ୟ < 0.05)। ପ୍ରମୁଖ ଓଭରଲାପିଂ ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପ୍ଟଗୁଡ଼ିକ ମଧ୍ୟଭାଗରେ ଦେଖାଯାଇଛି (AKT1 ଏବଂ YKT6)। B ଅନ୍ୟାନ୍ୟ ଜିନ୍ ସହିତ ସର୍ବାଧିକ ପାରସ୍ପରିକ କ୍ରିୟା ସ୍କୋର (0.900) ସହିତ 13 ଜିନ୍‌ର ପାରସ୍ପରିକ କ୍ରିୟା ମାନଚିତ୍ର 56 ଟି ଓଭରଲାପିଂ ଜିନ୍ (କଳା ରେଖା ଅଞ୍ଚଳ) ରୁ ନିର୍ମିତ ହୋଇଥିଲା ଯାହା ଅନଲାଇନ୍ ଟୁଲ୍ StringDB ବ୍ୟବହାର କରି ସେରମ୍ IPA ସ୍ତର ସହିତ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ଭାବରେ ଜଡିତ ଥିଲା। ସବୁଜ: ଜିନ୍ ଅଣ୍ଟୋଲୋଜି (GO) ସେଲୁଲାର୍ ଉପାଦାନ ସହିତ ମ୍ୟାପ୍ କରାଯାଇଛି: ମାଇଟୋକଣ୍ଡ୍ରିଆ (GO:0005739)। AKT1 ହେଉଛି ତଥ୍ୟ ଉପରେ ଆଧାରିତ ଅନ୍ୟ ପ୍ରୋଟିନ ସହିତ ପାରସ୍ପରିକ କ୍ରିୟା ପାଇଁ ସର୍ବାଧିକ ସ୍କୋର (0.900) ସହିତ ପ୍ରୋଟିନ (ଟେକ୍ସଟ୍ ମାଇନିଂ, ପରୀକ୍ଷଣ, ଡାଟାବେସ୍ ଏବଂ ସହ-ପ୍ରକାଶନ ଉପରେ ଆଧାରିତ)। ନେଟୱାର୍କ ନୋଡ୍ ପ୍ରୋଟିନକୁ ପ୍ରତିନିଧିତ୍ୱ କରେ, ଏବଂ ଧାରଗୁଡ଼ିକ ପ୍ରୋଟିନ ମଧ୍ୟରେ ସଂଯୋଗକୁ ପ୍ରତିନିଧିତ୍ୱ କରେ।
ଯେହେତୁ ଅନ୍ତନଳୀ ମାଇକ୍ରୋବାୟୋଟା ମେଟାବୋଲାଇଟ୍ସ DNA ମିଥାଇଲେସନ୍ ମାଧ୍ୟମରେ ଏପିଜେନେଟିକ୍ ରଚନାକୁ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ କରିପାରିବ [32], ଆମେ ତଦନ୍ତ କରିଥିଲୁ ଯେ ସେରମ୍ IPA ସ୍ତର ଲିଭର DNA ମିଥାଇଲେସନ୍ ସହିତ ଜଡିତ ଥିଲା କି ନାହିଁ। ଆମେ ପାଇଲୁ ଯେ ସେରମ୍ IPA ସ୍ତର ସହିତ ଜଡିତ ଦୁଇଟି ପ୍ରମୁଖ ମିଥାଇଲେସନ୍ ସ୍ଥାନ ପ୍ରୋଲାଇନ୍-ସେରିନ୍-ସମୃଦ୍ଧ ଅଞ୍ଚଳ 3 (C19orf55) ଏବଂ ହିଟ୍ ସକ୍ ପ୍ରୋଟିନ୍ ପରିବାର B (ଛୋଟ) ସଦସ୍ୟ 6 (HSPB6) (ଅତିରିକ୍ତ ଫାଇଲ୍ 3) ନିକଟରେ ଥିଲା। 4350 CpG (p < 0.01) ର DNA ମିଥାଇଲେସନ୍ ସେରମ୍ IPA ସ୍ତର ସହିତ ସହସମ୍ପର୍କିତ ଥିଲା ଏବଂ ଦୀର୍ଘାୟୁ ନିୟାମକ ପଥ (p = 0.006) (ଚିତ୍ର 1A, ସାରଣୀ 2, ଏବଂ ପରିପୂରକ ଚିତ୍ର 1C) ରେ ସମୃଦ୍ଧ ହୋଇଥିଲା।
ମାନବ ଯକୃତରେ ସେରମ୍ IPA ସ୍ତର, ଗ୍ଲୋବାଲ୍ ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପ୍ଟ, ମାଇଟୋକଣ୍ଡ୍ରିଆ-ସମ୍ବନ୍ଧିତ ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପ୍ଟ ଏବଂ DNA ମିଥାଇଲେସନ୍ ମଧ୍ୟରେ ସମ୍ପର୍କକୁ ବୁଝିବା ପାଇଁ, ଆମେ ପୂର୍ବ ପାଥୱେ ବିଶ୍ଳେଷଣ (ଚିତ୍ର 1A) ରେ ଚିହ୍ନଟ ହୋଇଥିବା ଜିନ୍‌ଗୁଡ଼ିକର ଏକ ଓଭରଲାପ୍ ବିଶ୍ଳେଷଣ କରିଥିଲୁ। 56ଟି ଓଭରଲାପ୍ ଜିନ୍ (ଚିତ୍ର 1A ରେ କଳା ରେଖା ଭିତରେ) ର ପାଥୱେ ସମୃଦ୍ଧି ବିଶ୍ଳେଷଣର ଫଳାଫଳ ଦେଖାଇଥିଲା ଯେ ଆପୋପ୍ଟୋସିସ୍ ପାଥୱେ (p = 0.00029) ତିନୋଟି ବିଶ୍ଳେଷଣରେ ସାଧାରଣ ଦୁଇଟି ଜିନ୍ ହାଇଲାଇଟ୍ କରିଥିଲା: AKT1 ଏବଂ YKT6 (YKT6 v-SNARE homolog), ଯେପରି Venn ଚିତ୍ରରେ ଦେଖାଯାଇଛି (ପରିପୂରକ ଚିତ୍ର 2 ଏବଂ ଚିତ୍ର 1A)। ଆଶ୍ଚର୍ଯ୍ୟଜନକ ଭାବରେ, ଆମେ ପାଇଲୁ ଯେ AKT1 (cg19831386) ଏବଂ YKT6 (cg24161647) ସେରମ୍ IPA ସ୍ତର ସହିତ ସକାରାତ୍ମକ ଭାବରେ ସହବନ୍ଧିତ ଥିଲା (ଅତିରିକ୍ତ ଫାଇଲ୍ 3)। ଜିନ୍ ଉତ୍ପାଦଗୁଡ଼ିକ ମଧ୍ୟରେ ସମ୍ଭାବ୍ୟ ପ୍ରୋଟିନ୍ ପାରସ୍ପରିକ କ୍ରିୟା ଚିହ୍ନଟ କରିବା ପାଇଁ, ଆମେ ଇନପୁଟ୍ ଭାବରେ 56ଟି ଓଭରଲାପ୍ ଜିନ୍ ମଧ୍ୟରୁ ସର୍ବାଧିକ ସାଧାରଣ ଅଞ୍ଚଳ ସ୍କୋର (0.900) ସହିତ 13ଟି ଜିନ୍ ଚୟନ କରିଥିଲୁ ଏବଂ ଏକ ପାରସ୍ପରିକ କ୍ରିୟା ମାନଚିତ୍ର ନିର୍ମାଣ କରିଥିଲୁ। ଆତ୍ମବିଶ୍ୱାସ ସ୍ତର (ସୀମାନ୍ତ ଆତ୍ମବିଶ୍ୱାସ) ଅନୁସାରେ, ସର୍ବାଧିକ ସ୍କୋର (0.900) ସହିତ AKT1 ଜିନ୍ ଶୀର୍ଷରେ ଥିଲା (ଚିତ୍ର 1B)।
ପଥ ବିଶ୍ଳେଷଣ ଉପରେ ଆଧାର କରି, ଆମେ ଜାଣିଲୁ ଯେ ଆପୋପ୍ଟୋସିସ୍ ହେଉଛି ପ୍ରମୁଖ ପଥ, ତେଣୁ ଆମେ ଅନୁସନ୍ଧାନ କରିଥିଲୁ ଯେ IPA ଚିକିତ୍ସା ଭିଟ୍ରୋରେ HSC ର ଆପୋପ୍ଟୋସିସ୍ କୁ ପ୍ରଭାବିତ କରିବ କି ନାହିଁ। ଆମେ ପୂର୍ବରୁ ପ୍ରଦର୍ଶନ କରିଥିଲୁ ଯେ IPA ର ବିଭିନ୍ନ ଡୋଜ୍ (10 μM, 100 μM, ଏବଂ 1 mM) LX-2 କୋଷ ପାଇଁ ଅଣବିଷାକ୍ତ ଥିଲା [15]। ଏହି ଅଧ୍ୟୟନରୁ ଜଣାପଡିଛି ଯେ 10 μM ଏବଂ 100 μM ରେ IPA ଚିକିତ୍ସା କାର୍ଯ୍ୟକ୍ଷମ ଏବଂ ନେକ୍ରୋଟିକ୍ କୋଷ ସଂଖ୍ୟା ବୃଦ୍ଧି କରିଥିଲା। ତଥାପି, ନିୟନ୍ତ୍ରଣ ଗୋଷ୍ଠୀ ତୁଳନାରେ, କୋଷ କାର୍ଯ୍ୟକ୍ଷମତା 1 mM IPA ସାନ୍ଦ୍ରତାରେ ହ୍ରାସ ପାଇଥିଲା, ଯେତେବେଳେ କୋଷ ନେକ୍ରୋସିସ୍ ହାର ଅପରିବର୍ତ୍ତିତ ରହିଥିଲା ​​(ଚିତ୍ର 2A, B)। ପରବର୍ତ୍ତୀ ସମୟରେ, LX-2 କୋଷରେ ଆପୋପ୍ଟୋସିସ୍ ପ୍ରେରଣା ପାଇଁ ସର୍ବୋତ୍ତମ ସାନ୍ଦ୍ରତା ଖୋଜିବା ପାଇଁ, ଆମେ 24 ଘଣ୍ଟା ପାଇଁ 10 μM, 100 μM, ଏବଂ 1 mM IPA ପରୀକ୍ଷା କରିଥିଲୁ (ଚିତ୍ର 2A-E ଏବଂ ପରିପୂରକ ଚିତ୍ର 3A-B)। ଆଶ୍ଚର୍ଯ୍ୟଜନକ ଭାବରେ, IPA 10 μM ଏବଂ 100 μM ଆପୋପ୍ଟୋସିସ୍ ହାର (%) ହ୍ରାସ କରିଥିଲା, ତଥାପି, IPA 1 mM ନିୟନ୍ତ୍ରଣ ତୁଳନାରେ ବିଳମ୍ବ ଆପୋପ୍ଟୋସିସ୍ ଏବଂ ଆପୋପ୍ଟୋସିସ୍ ହାର (%) ବୃଦ୍ଧି କରିଥିଲା ​​ଏବଂ ତେଣୁ ପରବର୍ତ୍ତୀ ପରୀକ୍ଷଣ ପାଇଁ ବାଛି ଦିଆଯାଇଥିଲା (ଚିତ୍ର 2A–D)।
IPA LX-2 କୋଷର ଆପୋପ୍ଟୋସିସ୍ ପ୍ରେରଣା ଦିଏ। ପ୍ରବାହ ସାଇଟୋମେଟ୍ରି ଦ୍ୱାରା ଆପୋପ୍ଟୋଟିକ୍ ହାର ଏବଂ କୋଷ ଆକାର୍ଲୋଜି ପରିମାଣ କରିବା ପାଇଁ ଆନେକ୍ସିନ୍ V ଏବଂ 7-AAD ଡବଲ ଷ୍ଟେନିଂ ପଦ୍ଧତି ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇଥିଲା। BA କୋଷଗୁଡ଼ିକୁ 24 ଘଣ୍ଟା ପାଇଁ 10 μM, 100 μM ଏବଂ 1 mM IPA ସହିତ କିମ୍ବା 24 ଘଣ୍ଟା ପାଇଁ ସେରମ୍-ମୁକ୍ତ ମାଧ୍ୟମରେ F–H TGF-β1 (5 ng/ml) ଏବଂ 1 mM IPA ସହିତ ଇନକ୍ୟୁବେଟେଡ୍ କରାଯାଇଥିଲା। A: ଜୀବନ୍ତ କୋଷ (Annexin V -/ 7AAD-); B: ନେକ୍ରୋଟିକ୍ କୋଷ (Annexin V -/ 7AAD+); C, F: ପ୍ରାରମ୍ଭିକ (Annexin V +/ 7AAD-); D, G: ବିଳମ୍ବ (Annexin V+/7AAD.+); E, H: ଆପୋପ୍ଟୋଟିକ୍ ହାରରେ ମୋଟ ପ୍ରାରମ୍ଭିକ ଏବଂ ବିଳମ୍ବ ଆପୋପ୍ଟୋଟିକ୍ କୋଷର ପ୍ରତିଶତ (%)। ତଥ୍ୟକୁ ମଧ୍ୟମ ± SD, n = 3 ସ୍ୱାଧୀନ ପରୀକ୍ଷଣ ଭାବରେ ପ୍ରକାଶ କରାଯାଇଛି। ବନଫେରୋନି ପୋଷ୍ଟ ହକ୍ ପରୀକ୍ଷା ସହିତ ଏକ-ପାଖିଆ ANOVA ବ୍ୟବହାର କରି ପରିସଂଖ୍ୟାନ ତୁଳନା କରାଯାଇଥିଲା। *p < 0.05; ****p < 0.0001
ଆମେ ପୂର୍ବରୁ ଦେଖାଇଛୁ ଯେ, 5 ng/ml TGF-β1 ଶାସ୍ତ୍ରୀୟ ମାର୍କର ଜିନ୍ [15] ର ପ୍ରକାଶନ ବୃଦ୍ଧି କରି HSC ସକ୍ରିୟକରଣକୁ ପ୍ରେରିତ କରିପାରିବ। LX-2 କୋଷଗୁଡ଼ିକୁ 5 ng/ml TGF-β1 ଏବଂ 1 mM IPA ମିଶ୍ରଣରେ ଚିକିତ୍ସା କରାଯାଇଥିଲା (ଚିତ୍ର 2E–H)। TGF-β1 ଚିକିତ୍ସା ଆପୋପ୍ଟୋସିସ୍ ହାରକୁ ପରିବର୍ତ୍ତନ କରିନଥିଲା, ତଥାପି, IPA ସହ-ଚିକିତ୍ସା TGF-β1 ଚିକିତ୍ସା (ଚିତ୍ର 2E–H) ତୁଳନାରେ ବିଳମ୍ବ ଆପୋପ୍ଟୋସିସ୍ ଏବଂ ଆପୋପ୍ଟୋସିସ୍ ହାର (%) ବୃଦ୍ଧି କରିଥିଲା। ଏହି ଫଳାଫଳଗୁଡ଼ିକ ସୂଚାଇ ଦିଏ ଯେ 1 mM IPA TGF-β1 ପ୍ରେରଣାଠାରୁ ସ୍ୱାଧୀନ ଭାବରେ LX-2 କୋଷରେ ଆପୋପ୍ଟୋସିସ୍କୁ ପ୍ରୋତ୍ସାହିତ କରିପାରିବ।
ଆମେ LX-2 କୋଷରେ ମାଇଟୋକଣ୍ଡ୍ରିଆଲ୍ ଶ୍ୱାସକ୍ରିୟା ଉପରେ IPA ର ପ୍ରଭାବ ବିଷୟରେ ଆହୁରି ଅନୁସନ୍ଧାନ କରିଥିଲୁ। ଫଳାଫଳଗୁଡ଼ିକ ଦର୍ଶାଇଥିଲା ଯେ 1 mM IPA ଅମ୍ଳଜାନ ବ୍ୟବହାର ହାର (OCR) ପାରାମିଟରଗୁଡ଼ିକୁ ହ୍ରାସ କରିଥିଲା: ଅଣ-ମାଇଟୋକଣ୍ଡ୍ରିଆଲ୍ ଶ୍ୱାସକ୍ରିୟା, ବେସାଲ୍ ଏବଂ ସର୍ବାଧିକ ଶ୍ୱାସକ୍ରିୟା, ପ୍ରୋଟନ୍ ଲିକ୍ ଏବଂ ATP ଉତ୍ପାଦନ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ ଗୋଷ୍ଠୀ (ଚିତ୍ର 3A, B) ତୁଳନାରେ, ଯେତେବେଳେ ବାୟୋଏନର୍ଜେଟିକ୍ ସ୍ୱାସ୍ଥ୍ୟ ସୂଚକାଙ୍କ (BHI) ପରିବର୍ତ୍ତନ ହୋଇନଥିଲା।
IPA LX-2 କୋଷରେ ମାଇଟୋକଣ୍ଡ୍ରିଆଲ୍ ଶ୍ୱାସକ୍ରିୟା ହ୍ରାସ କରେ। ମାଇଟୋକଣ୍ଡ୍ରିଆଲ୍ ଶ୍ୱାସକ୍ରିୟା କର୍ଭ (OCR) କୁ ମାଇଟୋକଣ୍ଡ୍ରିଆଲ୍ ଶ୍ୱାସକ୍ରିୟା ପାରାମିଟର (ନନ୍-ମାଇଟୋକଣ୍ଡ୍ରିଆଲ୍ ଶ୍ୱାସକ୍ରିୟା, ବେସାଲ୍ ଶ୍ୱାସକ୍ରିୟା, ସର୍ବାଧିକ ଶ୍ୱାସକ୍ରିୟା, ପ୍ରୋଟନ୍ ଲିକ୍, ATP ଜେନେରେସନ୍, SRC ଏବଂ BHI) ଭାବରେ ଉପସ୍ଥାପିତ କରାଯାଏ। କୋଷ A ଏବଂ B କୁ 24 ଘଣ୍ଟା ପାଇଁ ଯଥାକ୍ରମେ 10 μM, 100 μM ଏବଂ 1 mM IPA ସହିତ ଇନକ୍ୟୁବେଟ୍ କରାଯାଇଥିଲା। କୋଷ C ଏବଂ D କୁ 24 ଘଣ୍ଟା ପାଇଁ ସେରମ୍-ମୁକ୍ତ ମାଧ୍ୟମରେ TGF-β1 (5 ng/ml) ଏବଂ 1 mM IPA ସହିତ ଇନକ୍ୟୁବେଟ୍ କରାଯାଇଥିଲା। ସମସ୍ତ ମାପକୁ CyQuant କିଟ୍ ବ୍ୟବହାର କରି DNA ବିଷୟବସ୍ତୁକୁ ସ୍ୱାଭାବିକ କରାଯାଇଥିଲା। BHI: ବାୟୋଏନର୍ଜେଟିକ୍ ସ୍ୱାସ୍ଥ୍ୟ ସୂଚକାଙ୍କ; SRC: ଶ୍ୱାସକ୍ରିୟା ସଂରକ୍ଷଣ କ୍ଷମତା; OCR: ଅମ୍ଳଜାନ ବ୍ୟବହାର ହାର। ତଥ୍ୟକୁ ମଧ୍ୟମ ± ମାନକ ବିଚ୍ୟୁତି (SD), n = 5 ସ୍ୱାଧୀନ ପରୀକ୍ଷଣ ଭାବରେ ଉପସ୍ଥାପିତ କରାଯାଏ। ଏକ-ପାଖ ANOVA ଏବଂ Bonferroni ପୋଷ୍ଟ ହକ୍ ପରୀକ୍ଷା ବ୍ୟବହାର କରି ପରିସଂଖ୍ୟାନ ତୁଳନା କରାଯାଇଥିଲା। *p < 0.05; **p < 0.01; ଏବଂ ***p < 0.001
TGF-β1-ସକ୍ରିୟ LX-2 କୋଷର ବାୟୋଏନର୍ଜେଟିକ୍ ପ୍ରୋଫାଇଲ୍ ଉପରେ IPA ର ପ୍ରଭାବ ବିଷୟରେ ଅଧିକ ବ୍ୟାପକ ବୁଝାମଣା ପାଇବା ପାଇଁ, ଆମେ OCR (ଚିତ୍ର 3C,D) ଦ୍ୱାରା ମାଇଟୋକଣ୍ଡ୍ରିଆଲ୍ ଅକ୍ସିଡେଟିଭ୍ ଫସଫୋରାଇଲେସନ୍ ବିଶ୍ଳେଷଣ କରିଥିଲୁ। ଫଳାଫଳଗୁଡ଼ିକ ଦର୍ଶାଇଥିଲା ଯେ TGF-β1 ଚିକିତ୍ସା ନିୟନ୍ତ୍ରଣ ଗୋଷ୍ଠୀ (ଚିତ୍ର 3C,D) ତୁଳନାରେ ସର୍ବାଧିକ ଶ୍ୱାସକ୍ରିୟା, ଶ୍ୱାସକ୍ରିୟା ସଂରକ୍ଷଣ କ୍ଷମତା (SRC) ଏବଂ BHI ହ୍ରାସ କରିପାରେ। ଏହା ସହିତ, ମିଶ୍ରଣ ଚିକିତ୍ସା ମୌଳିକ ଶ୍ୱାସକ୍ରିୟା, ପ୍ରୋଟନ୍ ଲିକ୍ ଏବଂ ATP ଉତ୍ପାଦନ ହ୍ରାସ କରିଥିଲା, କିନ୍ତୁ SRC ଏବଂ BHI TGF-β1 (ଚିତ୍ର 3C,D) ସହିତ ଚିକିତ୍ସା କରାଯାଇଥିବା ଅପେକ୍ଷା ଯଥେଷ୍ଟ ଅଧିକ ଥିଲା।
ଆମେ ସିହର୍ସ ସଫ୍ଟୱେର୍ ଦ୍ୱାରା ପ୍ରଦାନ କରାଯାଇଥିବା "ସେଲୁଲାର ଏନର୍ଜି ଫେନୋଟାଇପ୍ ପରୀକ୍ଷଣ" ମଧ୍ୟ କରିଥିଲୁ (ପରିପୂରକ ଚିତ୍ର 4A–D)। ପରିପୂରକ ଚିତ୍ର 3B ରେ ଦେଖାଯାଇଥିବା ପରି, TGF-β1 ଚିକିତ୍ସା ପରେ ଉଭୟ OCR ଏବଂ ECAR ମେଟାବୋଲିକ୍ ସମ୍ଭାବନା ହ୍ରାସ ପାଇଥିଲା, ତଥାପି, ନିୟନ୍ତ୍ରଣ ଗୋଷ୍ଠୀ ତୁଳନାରେ ମିଶ୍ରଣ ଏବଂ IPA ଚିକିତ୍ସା ଗୋଷ୍ଠୀରେ କୌଣସି ପାର୍ଥକ୍ୟ ପରିଲକ୍ଷିତ ହୋଇନଥିଲା। ଏହା ବ୍ୟତୀତ, ନିୟନ୍ତ୍ରଣ ଗୋଷ୍ଠୀ ତୁଳନାରେ ମିଶ୍ରଣ ଏବଂ IPA ଚିକିତ୍ସା ପରେ OCR ର ଉଭୟ ବେସାଲ୍ ଏବଂ ଚାପ ସ୍ତର ହ୍ରାସ ପାଇଥିଲା (ପରିପୂରକ ଚିତ୍ର 4C)। ଆଶ୍ଚର୍ଯ୍ୟଜନକ ଭାବରେ, ମିଶ୍ରଣ ଚିକିତ୍ସା ସହିତ ସମାନ ପ୍ୟାଟର୍ନ ପରିଲକ୍ଷିତ ହୋଇଥିଲା, ଯେଉଁଠାରେ TGF-β1 ଚିକିତ୍ସା ତୁଳନାରେ ECAR ର ବେସାଲ୍ ଏବଂ ଚାପ ସ୍ତରର କୌଣସି ପରିବର୍ତ୍ତନ ପରିଲକ୍ଷିତ ହୋଇନଥିଲା (ପରିପୂରକ ଚିତ୍ର 4C)। HSC ରେ, TGF-β1 ଚିକିତ୍ସାର ସଂସ୍ପର୍ଶ ପରେ ମାଇଟୋକଣ୍ଡ୍ରିଆଲ୍ ଅକ୍ସିଡେଟିଭ୍ ଫସଫୋରାଇଲେସନ୍ ହ୍ରାସ ଏବଂ SCR ଏବଂ BHI କୁ ପୁନଃସ୍ଥାପିତ କରିବା ପାଇଁ ମିଶ୍ରଣ ଚିକିତ୍ସାର କ୍ଷମତା ବିପାକ ସମ୍ଭାବନା (OCR ଏବଂ ECAR) କୁ ପରିବର୍ତ୍ତନ କରିନଥିଲା। ଏକତ୍ରିତ ଭାବରେ ନିଆଯାଇ, ଏହି ଫଳାଫଳଗୁଡ଼ିକ ସୂଚାଇ ଦିଏ ଯେ IPA HSC ରେ ବାୟୋଏନର୍ଜେଟିକ୍ସକୁ ହ୍ରାସ କରିପାରେ, ଏହା ସୂଚାଇ ଦିଏ ଯେ IPA ଏକ ନିମ୍ନ ଶକ୍ତିଶାଳୀ ପ୍ରୋଫାଇଲକୁ ପ୍ରେରଣା ଦେଇପାରେ ଯାହା HSC ଫେନୋଟାଇପ୍ କୁ ନିଷ୍କ୍ରିୟତା ଆଡ଼କୁ ସ୍ଥାନାନ୍ତରିତ କରେ (ପରିପୂରକ ଚିତ୍ର 4D)।
ମାଇଟୋକଣ୍ଡ୍ରିଆଲ୍ ଗତିବିଧି ଉପରେ IPA ର ପ୍ରଭାବକୁ ମାଇଟୋକଣ୍ଡ୍ରିଆଲ୍ ଆକୃତି ଏବଂ ନେଟୱାର୍କ ସଂଯୋଗର ତ୍ରି-ପରିମାଣିକ ପରିମାଣୀକରଣ ଏବଂ MTR ଷ୍ଟେନିଂ (ଚିତ୍ର 4 ଏବଂ ପରିପୂରକ ଚିତ୍ର 5) ବ୍ୟବହାର କରି ଅନୁସନ୍ଧାନ କରାଯାଇଥିଲା। ଚିତ୍ର 4 ଦର୍ଶାଉଛି ଯେ, ନିୟନ୍ତ୍ରଣ ଗୋଷ୍ଠୀ ସହିତ ତୁଳନା କଲେ, TGF-β1 ଚିକିତ୍ସା ହାରାହାରି ପୃଷ୍ଠ କ୍ଷେତ୍ରଫଳ, ଶାଖା ସଂଖ୍ୟା, ମୋଟ ଶାଖା ଲମ୍ବ ଏବଂ ଶାଖା ସଂଯୋଗ ସଂଖ୍ୟା (ଚିତ୍ର 4A ଏବଂ B) ହ୍ରାସ କରିଥିଲା ​​ଏବଂ ମାଇଟୋକଣ୍ଡ୍ରିଆର ଅନୁପାତକୁ ଗୋଲକରୁ ମଧ୍ୟବର୍ତ୍ତୀ ଆକୃତି (ଚିତ୍ର 4C) ରେ ପରିବର୍ତ୍ତନ କରିଥିଲା। କେବଳ IPA ଚିକିତ୍ସା ହାରାହାରି ମାଇଟୋକଣ୍ଡ୍ରିଆଲ୍ ଆୟତନକୁ ହ୍ରାସ କରିଥିଲା ​​ଏବଂ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ ଗୋଷ୍ଠୀ (ଚିତ୍ର 4A) ତୁଳନାରେ ମାଇଟୋକଣ୍ଡ୍ରିଆର ଅନୁପାତକୁ ଗୋଲକରୁ ମଧ୍ୟବର୍ତ୍ତୀ ଆକୃତିକୁ ପରିବର୍ତ୍ତନ କରିଥିଲା। ବିପରୀତରେ, ମାଇଟୋକଣ୍ଡ୍ରିଆଲ୍ ମେମ୍ବ୍ରାନ୍ ପୋଟେନ୍ସିଆଲ୍-ନିର୍ଭରଶୀଳ MTR (ଚିତ୍ର 4A ଏବଂ E) ଦ୍ୱାରା ମୂଲ୍ୟାଙ୍କିତ ଗୋଲକ, ହାରାହାରି ଶାଖା ଲମ୍ବ ଏବଂ ମାଇଟୋକଣ୍ଡ୍ରିଆଲ୍ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ଅପରିବର୍ତ୍ତିତ ରହିଥିଲା ​​ଏବଂ ଏହି ପାରାମିଟରଗୁଡ଼ିକ ଗୋଷ୍ଠୀ ମଧ୍ୟରେ ଭିନ୍ନ ନଥିଲା। ଏକତ୍ରିତ ଭାବରେ ନିଆଯାଇ, ଏହି ଫଳାଫଳଗୁଡ଼ିକ ସୂଚାଇଥାଏ ଯେ TGF-β1 ଏବଂ IPA ଚିକିତ୍ସା ଜୀବନ୍ତ LX-2 କୋଷଗୁଡ଼ିକରେ ମାଇଟୋକଣ୍ଡ୍ରିଆଲ୍ ଆକୃତି ଏବଂ ଆକାର ସହିତ ନେଟୱାର୍କ ଜଟିଳତାକୁ ପରିବର୍ତ୍ତନ କରୁଥିବା ଦେଖାଯାଉଛି।
IPA LX-2 କୋଷରେ ମାଇଟୋକଣ୍ଡ୍ରିଆଲ୍ ଗତିଶୀଳତା ଏବଂ ମାଇଟୋକଣ୍ଡ୍ରିଆଲ୍ DNA ପ୍ରଚୁରତାକୁ ପରିବର୍ତ୍ତନ କରେ। A. TGF-β1 (5 ng/ml) ଏବଂ 1 mM IPA ସହିତ 24 ଘଣ୍ଟା ପାଇଁ ସେରମ୍-ମୁକ୍ତ ମାଧ୍ୟମରେ ସଂଗୃହିତ ଜୀବନ୍ତ LX-2 କୋଷଗୁଡ଼ିକର ପ୍ରତିନିଧିତ୍ୱକାରୀ କନଫୋକାଲ୍ ପ୍ରତିଛବିଗୁଡ଼ିକ ଯାହା Mitotracker™ Red CMXRos ସହିତ ରଙ୍ଗିତ ମାଇଟୋକଣ୍ଡ୍ରିଆଲ୍ ନେଟୱାର୍କ ଏବଂ DAPI ସହିତ ନୀଳ ରଙ୍ଗର ନ୍ୟୁକ୍ଲିୟସ୍ ଦର୍ଶାଉଛି। ସମସ୍ତ ତଥ୍ୟରେ ପ୍ରତି ଗୋଷ୍ଠୀରେ ଅତି କମରେ 15 ପ୍ରତିଛବି ଅଛି। ଆମେ ପ୍ରତ୍ୟେକ ନମୁନା ପ୍ରକାର ପାଇଁ 10 ଟି Z-ଷ୍ଟାକ୍ ପ୍ରତିଛବି ହାସଲ କରିଛୁ। ପ୍ରତ୍ୟେକ Z-ଅକ୍ଷ କ୍ରମରେ 30 ଟି ସ୍ଲାଇସ୍ ଅଛି, ପ୍ରତ୍ୟେକଟିର ଘନତା 9.86 μm। ସ୍କେଲ୍ ବାର୍: 10 μm। B. ପ୍ରତିଛବିରେ ଅନୁକୂଳିତ ଥ୍ରେସହୋଲ୍ଡିଂ ପ୍ରୟୋଗ କରି ଚିହ୍ନଟ କରାଯାଇଥିବା ପ୍ରତିନିଧିତ୍ୱକାରୀ ବସ୍ତୁ (କେବଳ ମାଇଟୋକଣ୍ଡ୍ରିଆ)। ପ୍ରତ୍ୟେକ ଗୋଷ୍ଠୀର ସମସ୍ତ କୋଷ ପାଇଁ ମାଇଟୋକଣ୍ଡ୍ରିଆଲ୍ ମର୍ଫୋଲୋଜିକାଲ ନେଟୱାର୍କ ସଂଯୋଗର ପରିମାଣାତ୍ମକ ବିଶ୍ଳେଷଣ ଏବଂ ତୁଳନା କରାଯାଇଥିଲା। C. ମାଇଟୋକଣ୍ଡ୍ରିଆଲ୍ ଆକୃତି ଅନୁପାତର ଆବୃତ୍ତି। 0 ପାଖାପାଖି ମୂଲ୍ୟ ଗୋଲାକାର ଆକାରକୁ ସୂଚିତ କରେ, ଏବଂ 1 ପାଖରେ ମୂଲ୍ୟ ଫିଲାମେଣ୍ଟସ୍ ଆକାରକୁ ସୂଚିତ କରେ। D ମାଇଟୋକଣ୍ଡ୍ରିଆଲ୍ DNA (mtDNA) ବିଷୟବସ୍ତୁ ସାମଗ୍ରୀ ଏବଂ ପଦ୍ଧତିରେ ବର୍ଣ୍ଣିତ ଅନୁସାରେ ନିର୍ଣ୍ଣୟ କରାଯାଇଥିଲା। E Mitotracker™ Red CMXRos ବିଶ୍ଳେଷଣ ସାମଗ୍ରୀ ଏବଂ ପଦ୍ଧତିରେ ବର୍ଣ୍ଣିତ ପ୍ରବାହ ସାଇଟୋମେଟ୍ରି (30,000 ଇଭେଣ୍ଟ) ଦ୍ୱାରା କରାଯାଇଥିଲା। ତଥ୍ୟକୁ ମଧ୍ୟମ ± SD, n = 3 ସ୍ୱାଧୀନ ପରୀକ୍ଷଣ ଭାବରେ ଉପସ୍ଥାପନ କରାଯାଇଛି। ଏକ-ପାଖ ANOVA ଏବଂ Bonferroni ପୋଷ୍ଟ ହକ୍ ପରୀକ୍ଷା ବ୍ୟବହାର କରି ପରିସଂଖ୍ୟାନ ତୁଳନା କରାଯାଇଥିଲା। *p < 0.05; **p < 0.01; ***p < 0.001; ****p < 0.0001
ତା’ପରେ ଆମେ LX-2 କୋଷରେ mtDNA ବିଷୟବସ୍ତୁକୁ ମାଇଟୋଚୋଣ୍ଡ୍ରିଆଲ୍ ସଂଖ୍ୟାର ସୂଚକ ଭାବରେ ବିଶ୍ଳେଷଣ କଲୁ। ନିୟନ୍ତ୍ରଣ ଗୋଷ୍ଠୀ ସହିତ ତୁଳନା କଲେ, TGF-β1-ଚିକିତ୍ସା ଗୋଷ୍ଠୀରେ mtDNA ବିଷୟବସ୍ତୁ ବୃଦ୍ଧି ପାଇଲା (ଚିତ୍ର 4D)। TGF-β1-ଚିକିତ୍ସା ଗୋଷ୍ଠୀ ସହିତ ତୁଳନା କଲେ, ମିଶ୍ରଣ ଚିକିତ୍ସା ଗୋଷ୍ଠୀରେ mtDNA ବିଷୟବସ୍ତୁ ହ୍ରାସ ପାଇଲା (ଚିତ୍ର 4D), ଯାହା ସୂଚାଇ ଦିଏ ଯେ IPA mtDNA ବିଷୟବସ୍ତୁ ଏବଂ ସମ୍ଭବତଃ ମାଇଟୋଚୋଣ୍ଡ୍ରିଆଲ୍ ସଂଖ୍ୟା ଏବଂ ମାଇଟୋଚୋଣ୍ଡ୍ରିଆଲ୍ ଶ୍ୱାସକ୍ରିୟା (ଚିତ୍ର 3C) ହ୍ରାସ କରିପାରେ। ଅଧିକନ୍ତୁ, IPA ମିଶ୍ରଣ ଚିକିତ୍ସାରେ mtDNA ବିଷୟବସ୍ତୁ ହ୍ରାସ କରିବା ପରି ମନେ ହେଉଥିଲା କିନ୍ତୁ MTR-ମଧ୍ୟସ୍ଥତା ମାଇଟୋଚୋଣ୍ଡ୍ରିଆଲ୍ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପକୁ ପ୍ରଭାବିତ କରିନଥିଲା (ଚିତ୍ର 4A–C)।
ଆମେ LX-2 କୋଷରେ ଫାଇବ୍ରୋସିସ୍, ଆପୋପ୍ଟୋସିସ୍, ବଞ୍ଚିବା ଏବଂ ମାଇଟୋକଣ୍ଡ୍ରିଆଲ୍ ଗତିଶୀଳତା ସହିତ ଜଡିତ ଜିନ୍‌ର mRNA ସ୍ତର ସହିତ IPA ର ସମ୍ପର୍କ ଅନୁସନ୍ଧାନ କରିଥିଲୁ (ଚିତ୍ର 5A–D)। ନିୟନ୍ତ୍ରଣ ଗୋଷ୍ଠୀ ସହିତ ତୁଳନା କରି, TGF-β1-ଚିକିତ୍ସା ଗୋଷ୍ଠୀ କୋଲାଜେନ୍ ପ୍ରକାର I α2 ଚେନ୍ (COL1A2), α-ସ୍ମୁଥ୍ ମାଂସପେଶୀ ଆକ୍ଟିନ୍ (αSMA), ମ୍ୟାଟ୍ରିକ୍ସ ମେଟାଲୋପ୍ରୋଟିନେଜ୍ 2 (MMP2), ମେଟାଲୋପ୍ରୋଟିନେଜ୍ 1 (TIMP1) ର ଟିସୁ ଇନହିବିଟର, ଏବଂ ଡାଇନାମିନ୍ 1-ପରି ଜିନ୍ (DRP1) ପରି ଜିନ୍‌ର ବର୍ଦ୍ଧିତ ପ୍ରକାଶନ ଦେଖାଇଥିଲୁ, ଯାହା ବର୍ଦ୍ଧିତ ଫାଇବ୍ରୋସିସ୍ ଏବଂ ସକ୍ରିୟକରଣ ସୂଚାଇଥାଏ। ଏହା ବ୍ୟତୀତ, ନିୟନ୍ତ୍ରଣ ଗୋଷ୍ଠୀ ସହିତ ତୁଳନା କରି, TGF-β1 ଚିକିତ୍ସା ନ୍ୟୁକ୍ଲିୟର ଗର୍ଭାବସ୍ଥା X ରିସେପ୍ଟର (PXR), କାସ୍ପେଜ୍ 8 (CASP8), MAPKAPK3, B-କୋଷ α ର ଇନହିବିଟର, ନ୍ୟୁକ୍ଲିୟର ଫ୍ୟାକ୍ଟର κ ଜିନ୍ ଲାଇଟ୍ ପେପ୍ଟାଇଡ୍ (NFκB1A) ର ଏନହିବିଟର, ଏବଂ ନ୍ୟୁକ୍ଲିୟର ଫ୍ୟାକ୍ଟର κB କାଇନେଜ୍ ସବୟୁନିଟ୍ β (IKBKB) ର ଇନହିବିଟର (ଚିତ୍ର 5A–D) ର mRNA ସ୍ତର ହ୍ରାସ କରିଥିଲା। TGF-β1 ଚିକିତ୍ସା ତୁଳନାରେ, TGF-β1 ଏବଂ IPA ସହିତ ମିଶ୍ରଣ ଚିକିତ୍ସା COL1A2 ଏବଂ MMP2 ର ପ୍ରକାଶନକୁ ହ୍ରାସ କରିଥିଲା, କିନ୍ତୁ PXR, TIMP1, B-କୋଷ ଲିମ୍ଫୋମା-2 (BCL-2), CASP8, NFκB1A, NFκB1-β, ଏବଂ IKBKB ର mRNA ସ୍ତରକୁ ବୃଦ୍ଧି କରିଥିଲା। IPA ଚିକିତ୍ସା MMP2, Bcl-2-ସଂଯୁକ୍ତ ପ୍ରୋଟିନ୍ X (BAX), AKT1, ଅପ୍ଟିକ୍ ଆଟ୍ରୋଫି ପ୍ରୋଟିନ୍ 1 (OPA1), ଏବଂ ମାଇଟୋକଣ୍ଡ୍ରିଆଲ୍ ଫ୍ୟୁଜନ୍ ପ୍ରୋଟିନ୍ 2 (MFN2) ର ପ୍ରକାଶନକୁ ଯଥେଷ୍ଟ ହ୍ରାସ କରିଥିଲା, ଯେତେବେଳେ CASP8, NFκB1A, NFκB1B, ଏବଂ IKBKB ର ପ୍ରକାଶନକୁ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ ଗୋଷ୍ଠୀ ତୁଳନାରେ ବୃଦ୍ଧି କରାଯାଇଥିଲା। ତଥାପି, କାସ୍ପେସ୍-3 (CASP3), ଆପୋପ୍ଟୋଟିକ୍ ପେପ୍ଟିଡେଜ୍ ସକ୍ରିୟକାରୀ ଫ୍ୟାକ୍ଟର 1 (APAF1), ମାଇଟୋକଣ୍ଡ୍ରିଆଲ୍ ଫ୍ୟୁଜନ୍ ପ୍ରୋଟିନ୍ 1 (MFN1), ଏବଂ ଫିସନ୍ ପ୍ରୋଟିନ୍ 1 (FIS1) ର ପ୍ରକାଶନରେ କୌଣସି ପାର୍ଥକ୍ୟ ମିଳିଲା ନାହିଁ। ସାମୂହିକ ଭାବରେ, ଏହି ଫଳାଫଳଗୁଡ଼ିକ ସୂଚାଇ ଦିଏ ଯେ IPA ଚିକିତ୍ସା ଫାଇବ୍ରୋସିସ୍, ଆପୋପ୍ଟୋସିସ୍, ବଞ୍ଚିବା ଏବଂ ମାଇଟୋକଣ୍ଡ୍ରିଆଲ୍ ଗତିଶୀଳତା ସହିତ ଜଡିତ ଜିନ୍‌ର ପ୍ରକାଶନକୁ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ କରେ। ଆମର ତଥ୍ୟ ସୂଚାଇ ଦିଏ ଯେ IPA ଚିକିତ୍ସା LX-2 କୋଷରେ ଫାଇବ୍ରୋସିସ୍ ହ୍ରାସ କରେ; ସେହି ସମୟରେ, ଏହା ଫେନୋଟାଇପ୍‌କୁ ନିଷ୍କ୍ରିୟତା ଆଡ଼କୁ ସ୍ଥାନାନ୍ତର କରି ବଞ୍ଚିବା ପାଇଁ ଉତ୍ସାହିତ କରେ।
IPA LX-2 କୋଷଗୁଡ଼ିକରେ ଫାଇବ୍ରୋବ୍ଲାଷ୍ଟ, ଆପୋପ୍ଟୋଟିକ୍, ପାରଦର୍ଶିତା ଏବଂ ମାଇଟୋକଣ୍ଡ୍ରିଆଲ୍ ଡାଇନାମିକ୍ସ ଜିନ୍‌ର ପ୍ରକାଶନକୁ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ କରେ। LX-2 କୋଷଗୁଡ଼ିକୁ 24 ଘଣ୍ଟା ପାଇଁ ସିରମ୍-ମୁକ୍ତ ମାଧ୍ୟମରେ TGF-β1 ଏବଂ IPA ସହିତ ପ୍ରେରିତ କରାଯିବା ପରେ ହିଷ୍ଟୋଗ୍ରାମଗୁଡ଼ିକ ଏଣ୍ଡୋଜେନ୍ସ୍ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ (RPLP0 କିମ୍ବା PPIA) ସାପେକ୍ଷ mRNA ପ୍ରକାଶନ ପ୍ରଦର୍ଶନ କରେ। A ଫାଇବ୍ରୋବ୍ଲାଷ୍ଟକୁ ସୂଚିତ କରେ, B ଆପୋପ୍ଟୋଟିକ୍ କୋଷଗୁଡ଼ିକୁ ସୂଚିତ କରେ, C ବଞ୍ଚି ରହିଥିବା କୋଷଗୁଡ଼ିକୁ ସୂଚିତ କରେ, ଏବଂ D ମାଇଟୋକଣ୍ଡ୍ରିଆଲ୍ ଡାଇନାମିକ୍ସ ଜିନ୍ ପ୍ରକାଶନକୁ ସୂଚିତ କରେ। ତଥ୍ୟକୁ ମଧ୍ୟମ ± ମାନକ ବିଚ୍ୟୁତି (SD), n = 3 ସ୍ୱାଧୀନ ପରୀକ୍ଷଣ ଭାବରେ ଉପସ୍ଥାପନ କରାଯାଏ। ଏକ-ପାଖ ANOVA ଏବଂ Bonferroni ପୋଷ୍ଟ ହକ୍ ପରୀକ୍ଷା ବ୍ୟବହାର କରି ପରିସଂଖ୍ୟାନ ତୁଳନା କରାଯାଇଥିଲା। *p < 0.05; **p < 0.01; ***p < 0.001; ****p < 0.0001
ତା’ପରେ, କୋଷ ଆକାର (FSC-H) ଏବଂ ସାଇଟୋପ୍ଲାଜମିକ୍ ଜଟିଳତା (SSC-H) ରେ ପରିବର୍ତ୍ତନ ପ୍ରବାହ ସାଇଟୋମେଟ୍ରି (ଚିତ୍ର 6A,B) ଦ୍ୱାରା ମୂଲ୍ୟାଙ୍କନ କରାଯାଇଥିଲା, ଏବଂ IPA ଚିକିତ୍ସା ପରେ କୋଷ ଆକୃତିରେ ପରିବର୍ତ୍ତନ ଟ୍ରାନ୍ସମିସନ୍ ଇଲେକ୍ଟ୍ରନ୍ ମାଇକ୍ରୋସ୍କୋପି (TEM) ଏବଂ ପର୍ଯ୍ୟାୟ କଣ୍ଟ୍ରାଷ୍ଟ ମାଇକ୍ରୋସ୍କୋପି (ପରିପୂରକ ଚିତ୍ର 6A-B) ଦ୍ୱାରା ମୂଲ୍ୟାଙ୍କନ କରାଯାଇଥିଲା। ଆଶା ଅନୁଯାୟୀ, TGF-β1-ଚିକିତ୍ସା ଗୋଷ୍ଠୀରେ କୋଷଗୁଡ଼ିକ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ ଗୋଷ୍ଠୀ (ଚିତ୍ର 6A,B) ତୁଳନାରେ ଆକାରରେ ବୃଦ୍ଧି ପାଇଥିଲା, ଯାହା ରୁକ୍ଷ ଏଣ୍ଡୋପ୍ଲାଜମିକ୍ ରେଟିକୁଲମ୍ (ER*) ଏବଂ ଫାଗୋଲାଇସୋସୋମ୍ (P) ର କ୍ଲାସିକ୍ ପ୍ରସାରଣ ଦର୍ଶାଉଛି, ଯାହା ହେମାଟୋପୋଏଟିକ୍ ଷ୍ଟେମ୍ ସେଲ୍ (HSC) ସକ୍ରିୟକରଣ (ପରିପୂରକ ଚିତ୍ର 6A) ସୂଚାଇଥାଏ। ତଥାପି, TGF-β1-ଚିକିତ୍ସା ଗୋଷ୍ଠୀ ସହିତ ତୁଳନା କଲେ, TGF-β1 ଏବଂ IPA ମିଶ୍ରଣ ଚିକିତ୍ସା ଗୋଷ୍ଠୀ (ପରିପୂରକ ଚିତ୍ର 6A) ରେ କୋଷ ଆକାର, ସାଇଟୋପ୍ଲାଜମିକ୍ ଜଟିଳତା (ଚିତ୍ର 6A,B), ଏବଂ ER* ବିଷୟବସ୍ତୁ ହ୍ରାସ ପାଇଥିଲା। ଅଧିକନ୍ତୁ, IPA ଚିକିତ୍ସା ନିୟନ୍ତ୍ରଣ ଗୋଷ୍ଠୀ ତୁଳନାରେ କୋଷ ଆକାର, ସାଇଟୋପ୍ଲାଜମିକ୍ ଜଟିଳତା (ଚିତ୍ର 6A, B), P ଏବଂ ER* ବିଷୟବସ୍ତୁ (ପରିପୂରକ ଚିତ୍ର 6A) ହ୍ରାସ କରିଥିଲା। ଏହା ସହିତ, ନିୟନ୍ତ୍ରଣ ଗୋଷ୍ଠୀ ତୁଳନାରେ IPA ଚିକିତ୍ସାର 24 ଘଣ୍ଟା ପରେ ଆପୋପ୍ଟୋଟିକ୍ କୋଷଗୁଡ଼ିକର ବିଷୟବସ୍ତୁ ବୃଦ୍ଧି ପାଇଥିଲା (ଧଳା ତୀର, ପରିପୂରକ ଚିତ୍ର 6B)। ସାମୂହିକ ଭାବରେ, ଏହି ଫଳାଫଳଗୁଡ଼ିକ ସୂଚାଇ ଦିଏ ଯେ 1 mM IPA HSC ଆପୋପ୍ଟୋସିସ୍କୁ ଉତ୍ତେଜିତ କରିପାରିବ ଏବଂ TGF-β1 ଦ୍ୱାରା ପ୍ରେରିତ କୋଷ ଆକୃତି ପାରାମିଟରରେ ପରିବର୍ତ୍ତନକୁ ଓଲଟାଇପାରେ, ଏହା ଦ୍ଵାରା କୋଷ ଆକାର ଏବଂ ଜଟିଳତାକୁ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ କରିଥାଏ, ଯାହା HSC ନିଷ୍କ୍ରିୟତା ସହିତ ଜଡିତ ହୋଇପାରେ।
IPA LX-2 କୋଷରେ କୋଷ ଆକାର ଏବଂ ସାଇଟୋପ୍ଲାଜମିକ୍ ଜଟିଳତାକୁ ପରିବର୍ତ୍ତନ କରେ। ପ୍ରବାହ ସାଇଟୋମେଟ୍ରି ବିଶ୍ଳେଷଣର ପ୍ରତିନିଧିତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ପ୍ରତିଛବି। ବିଶ୍ଳେଷଣରେ LX-2 କୋଷ ପାଇଁ ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ଏକ ଗେଟିଂ ରଣନୀତି ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇଥିଲା: କୋଷ ଜନସଂଖ୍ୟାକୁ ପରିଭାଷିତ କରିବା ପାଇଁ SSC-A/FSC-A, ଡବଲ୍ଟ ଚିହ୍ନଟ କରିବା ପାଇଁ FSC-H/FSC-A, ଏବଂ କୋଷ ଆକାର ଏବଂ ଜଟିଳତା ବିଶ୍ଳେଷଣ ପାଇଁ SSC-H/FSC-H। କୋଷଗୁଡ଼ିକୁ 24 ଘଣ୍ଟା ପାଇଁ ସେରମ୍-ମୁକ୍ତ ମାଧ୍ୟମରେ TGF-β1 (5 ng/ml) ଏବଂ 1 mM IPA ସହିତ ଇନକ୍ୟୁବେଟେଡ୍ କରାଯାଇଥିଲା। LX-2 କୋଷଗୁଡ଼ିକୁ ନିମ୍ନ ବାମ ଚତୁର୍ଭୁଜ (SSC-H-/FSC-H-), ଉପର ବାମ ଚତୁର୍ଭୁଜ (SSC-H+/FSC-H-), ନିମ୍ନ ଡାହାଣ ଚତୁର୍ଭୁଜ (SSC-H-/FSC-H+), ଏବଂ ଉପର ଡାହାଣ ଚତୁର୍ଭୁଜ (SSC-H+/FSC-H+) ରେ କୋଷ ଆକାର ଏବଂ ସାଇଟୋପ୍ଲାଜମିକ୍ ଜଟିଳତା ବିଶ୍ଳେଷଣ ପାଇଁ ବଣ୍ଟନ କରାଯାଇଥିଲା। B. FSC-H (ଫରୱାର୍ଡ ସ୍କାଟର୍, କୋଷ ଆକାର) ଏବଂ SSC-H (ପାର୍ଶ୍ୱ ସ୍କାଟର୍, ସାଇଟୋପ୍ଲାଜମିକ୍ ଜଟିଳତା) (30,000 ଇଭେଣ୍ଟ) ବ୍ୟବହାର କରି ପ୍ରବାହ ସାଇଟୋମେଟ୍ରି ଦ୍ୱାରା କୋଷ ଆକୃତି ବିଶ୍ଳେଷଣ କରାଯାଇଥିଲା। ତଥ୍ୟକୁ ମଧ୍ୟମ ± SD, n = 3 ସ୍ୱାଧୀନ ପରୀକ୍ଷଣ ଭାବରେ ଉପସ୍ଥାପନ କରାଯାଇଛି। ଏକ-ପାଖ ANOVA ଏବଂ Bonferroni ପୋଷ୍ଟ ହକ୍ ପରୀକ୍ଷା ବ୍ୟବହାର କରି ପରିସଂଖ୍ୟାନ ତୁଳନା କରାଯାଇଥିଲା। *p < 0.05; **p < 0.01; ***p < 0.001 ଏବଂ ****p < 0.0001
IPA ଭଳି ଅନ୍ତନଳୀ ମେଟାବୋଲାଇଟ୍ସ ଗବେଷଣାର ଏକ ଉତ୍ତେଜକ ବିଷୟ ପାଲଟିଛି, ଯାହା ସୂଚାଇ ଦେଉଛି ଯେ ଅନ୍ତନଳୀ ମାଇକ୍ରୋବାୟୋଟାରେ ନୂତନ ଲକ୍ଷ୍ୟ ଆବିଷ୍କୃତ ହୋଇପାରେ। ତେଣୁ ଏହା ଆକର୍ଷଣୀୟ ଯେ IPA, ଏକ ମେଟାବୋଲାଇଟ୍ ଯାହାକୁ ଆମେ ମଣିଷରେ ଲିଭର ଫାଇବ୍ରୋସିସ୍ ସହିତ ଲିଙ୍କ୍ କରିଛୁ [15], ପ୍ରାଣୀ ମଡେଲରେ ଏକ ସମ୍ଭାବ୍ୟ ଆଣ୍ଟି-ଫାଇବ୍ରୋଟିକ୍ ଯୌଗିକ ଭାବରେ ଦେଖାଯାଇଛି [13, 14]। ଏଠାରେ, ଆମେ ପ୍ରଥମ ଥର ପାଇଁ ଟାଇପ୍ 2 ଡାଏବେଟିସ୍ (T2D) ବିନା ସ୍ଥୂଳକାୟ ବ୍ୟକ୍ତିମାନଙ୍କ ମଧ୍ୟରେ ସେରମ୍ IPA ଏବଂ ଗ୍ଲୋବାଲ୍ ଲିଭର ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପ୍ଟୋମିକ୍ସ ଏବଂ DNA ମିଥାଇଲେସନ୍ ମଧ୍ୟରେ ଏକ ସମ୍ପର୍କ ପ୍ରଦର୍ଶନ କରୁଛୁ, ଯାହା ଆପୋପ୍ଟୋସିସ୍, ମାଇଟୋଫାଗି ଏବଂ ଦୀର୍ଘାୟୁର୍ଯ୍ୟକୁ ହାଇଲାଇଟ୍ କରୁଛି, ଏବଂ ଏକ ସମ୍ଭାବ୍ୟ ପ୍ରାର୍ଥୀ ଜିନ୍ AKT1 ଯକୃତ ହୋମିଓଷ୍ଟାସିସ୍ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ କରୁଛି। ଆମର ଅଧ୍ୟୟନର ଆଉ ଏକ ନୂତନତ୍ୱ ହେଉଛି ଯେ ଆମେ LX-2 କୋଷରେ ଆପୋପ୍ଟୋସିସ୍, କୋଷ ମର୍ଫୋଲୋଜି, ମାଇଟୋକଣ୍ଡ୍ରିଆଲ୍ ବାୟୋଏନର୍ଜେଟିକ୍ସ ଏବଂ ଗତିଶୀଳତା ସହିତ IPA ଚିକିତ୍ସାର ପାରସ୍ପରିକ କ୍ରିୟା ପ୍ରଦର୍ଶନ କରିଛୁ, ଯାହା ଏକ ନିମ୍ନ ଶକ୍ତି ସ୍ପେକ୍ଟ୍ରମ୍ ସୂଚାଇଥାଏ ଯାହା HSC ଫେନୋଟାଇପ୍କୁ ନିଷ୍କ୍ରିୟତା ଆଡ଼କୁ ସ୍ଥାନାନ୍ତରିତ କରିଥାଏ, IPA କୁ ଲିଭର ଫାଇବ୍ରୋସିସ୍ ଉନ୍ନତ କରିବା ପାଇଁ ଏକ ସମ୍ଭାବ୍ୟ ପ୍ରାର୍ଥୀ କରିଥାଏ।
ଆମେ ଜାଣିଲୁ ଯେ ଆପୋପ୍ଟୋସିସ୍, ମାଇଟୋଫାଗି ଏବଂ ଦୀର୍ଘାୟୁତା ହେଉଛି ସଞ୍ଚାଳନ ସେରମ୍ IPA ସହିତ ଜଡିତ ଲିଭର ଜିନ୍‌ରେ ସମୃଦ୍ଧ ସବୁଠାରୁ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ କାନୋନିକାଲ୍ ପଥ। ମାଇଟୋକଣ୍ଡ୍ରିଆଲ୍ ଗୁଣବତ୍ତା ନିୟନ୍ତ୍ରଣ (MQC) ସିଷ୍ଟମର ବ୍ୟାଘାତ ମାଇଟୋକଣ୍ଡ୍ରିଆଲ୍ ଡିସଫଂକ୍ସନ୍, ମାଇଟୋଫାଗି ଏବଂ ଆପୋପ୍ଟୋସିସ୍ ଆଡ଼କୁ ନେଇପାରେ, ଯାହା ଦ୍ଵାରା MASLD [33, 34] ର ଘଟନାକୁ ପ୍ରୋତ୍ସାହିତ କରିଥାଏ। ତେଣୁ, ଆମେ ଅନୁମାନ କରିପାରିବା ଯେ IPA ଯକୃତରେ ଆପୋପ୍ଟୋସିସ୍, ମାଇଟୋଫାଗି ଏବଂ ଦୀର୍ଘାୟୁତା ମାଧ୍ୟମରେ କୋଷ ଗତିଶୀଳତା ଏବଂ ମାଇଟୋକଣ୍ଡ୍ରିଆଲ୍ ଅଖଣ୍ଡତା ବଜାୟ ରଖିବାରେ ସାମିଲ ହୋଇପାରେ। ଆମର ତଥ୍ୟ ଦର୍ଶାଇଛି ଯେ ତିନୋଟି ପରୀକ୍ଷାରେ ଦୁଇଟି ଜିନ୍ ସାଧାରଣ ଥିଲା: YKT6 ଏବଂ AKT1। ଏହା ଉଲ୍ଲେଖନୀୟ ଯେ YKT6 ହେଉଛି କୋଷ ଝିଲ୍ଲୀ ଫ୍ୟୁଜନ୍ ପ୍ରକ୍ରିୟାରେ ଜଡିତ ଏକ SNARE ପ୍ରୋଟିନ୍। ଏହା ଅଟୋଫାଗୋସୋମରେ STX17 ଏବଂ SNAP29 ସହିତ ଏକ ଇନିସିଏସନ୍ କମ୍ପ୍ଲେକ୍ସ ଗଠନ କରି ଅଟୋଫାଗି ଏବଂ ମାଇଟୋଫାଗିରେ ଏକ ଭୂମିକା ଗ୍ରହଣ କରେ, ଯାହା ଦ୍ଵାରା ଅଟୋଫାଗୋସୋମ ଏବଂ ଲାଇସୋସୋମଗୁଡ଼ିକର ଫ୍ୟୁଜନ୍ [35] କୁ ପ୍ରୋତ୍ସାହିତ କରେ। ଅଧିକନ୍ତୁ, YKT6 କାର୍ଯ୍ୟକ୍ଷମତା ହ୍ରାସ ପାଇବା ଫଳରେ ମାଇଟୋଫାଜି [36] ବାଧାପ୍ରାପ୍ତ ହୁଏ, ଯେତେବେଳେ YKT6 ର ଉପନିୟନ୍ତ୍ରଣ ହେପାଟୋସେଲୁଲାର୍ କର୍ସିନୋମା (HCC) ର ଅଗ୍ରଗତି ସହିତ ଜଡିତ, ଯାହା କୋଷର ବଞ୍ଚିବା ବୃଦ୍ଧି ଦେଖାଏ [37]। ଅନ୍ୟପକ୍ଷରେ, AKT1 ହେଉଛି ସବୁଠାରୁ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ପାରସ୍ପରିକ କ୍ରିୟାଶୀଳ ଜିନ୍ ଏବଂ PI3K/AKT ସିଗନାଲିଂ ପଥ, କୋଷ ଚକ୍ର, କୋଷ ସ୍ଥାନାନ୍ତରଣ, ପ୍ରସାର, ଫୋକାଲ୍ ଆଡେସନ୍, ମାଇଟୋକଣ୍ଡ୍ରିଆଲ୍ କାର୍ଯ୍ୟ ଏବଂ କୋଲାଜେନ୍ କ୍ଷରଣ [38-40] ସମେତ ଯକୃତ ରୋଗରେ ଏକ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ଭୂମିକା ଗ୍ରହଣ କରେ। ସକ୍ରିୟ PI3K/AKT ସିଗନାଲିଂ ପଥ ହେମାଟୋପୋଏଟିକ୍ ଷ୍ଟେମ୍ କୋଷ (HSCs) କୁ ସକ୍ରିୟ କରିପାରିବ, ଯାହା ବାହ୍ୟ କୋଷୀୟ ମାଟ୍ରିକ୍ସ (ECM) ଉତ୍ପାଦନ ପାଇଁ ଦାୟୀ କୋଷ, ଏବଂ ଏହାର ଅନିୟମିତତା ଲିଭର ଫାଇବ୍ରୋସିସ୍ [40] ର ଘଟନା ଏବଂ ଅଗ୍ରଗତିରେ ଅବଦାନ ରଖିପାରେ। ଏହା ସହିତ, AKT ହେଉଛି ପ୍ରମୁଖ କୋଷ ବଞ୍ଚିବା କାରକ ମଧ୍ୟରୁ ଗୋଟିଏ ଯାହା p53-ନିର୍ଭରଶୀଳ କୋଷ ଆପୋପ୍ଟୋସିସ୍ କୁ ବାଧା ଦିଏ, ଏବଂ AKT ସକ୍ରିୟକରଣ ଯକୃତ କୋଷ ଆପୋପ୍ଟୋସିସ୍ [41, 42] ର ନିରୋଧ ସହିତ ଜଡିତ ହୋଇପାରେ। ପ୍ରାପ୍ତ ଫଳାଫଳଗୁଡ଼ିକ ସୂଚାଇ ଦିଏ ଯେ IPA ହେପାଟୋସାଇଟ୍ସର ଆପୋପ୍ଟୋସିସ୍ ପ୍ରବେଶ କିମ୍ବା ବଞ୍ଚିବା ମଧ୍ୟରେ ନିଷ୍ପତ୍ତିକୁ ପ୍ରଭାବିତ କରି ଯକୃତ ମାଇଟୋକଣ୍ଡ୍ରିଆ-ସମ୍ପର୍କିତ ଆପୋପ୍ଟୋସିସ୍‌ରେ ଜଡିତ ହୋଇପାରେ। ଏହି ପ୍ରଭାବଗୁଡ଼ିକୁ AKT ଏବଂ/କିମ୍ବା YKT6 କ୍ୟାଣ୍ଡିଡେଟ୍ ଜିନ୍ ଦ୍ୱାରା ନିୟନ୍ତ୍ରିତ କରାଯାଇପାରେ, ଯାହା ଯକୃତ ହୋମିଓଷ୍ଟାସିସ୍ ପାଇଁ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ।
ଆମର ଫଳାଫଳ ଦେଖାଇଛି ଯେ 1 mM IPA TGF-β1 ଚିକିତ୍ସାରୁ ସ୍ୱାଧୀନ ଭାବରେ LX-2 କୋଷଗୁଡ଼ିକରେ ଆପୋଟୋସିୟା ଏବଂ ମାଇଟୋକଣ୍ଡ୍ରିଆଲ୍ ଶ୍ୱାସକ୍ରିୟା ହ୍ରାସ କରିଥିଲା। ଏହା ଉଲ୍ଲେଖନୀୟ ଯେ ଆପୋଟୋସିୟା ଫାଇବ୍ରୋସିସ୍ ସମାଧାନ ଏବଂ ହେମାଟୋପୋଏଟିକ୍ ଷ୍ଟେମ୍ ସେଲ୍ (HSC) ସକ୍ରିୟକରଣ ପାଇଁ ଏକ ପ୍ରମୁଖ ପଥ, ଏବଂ ଏହା ଲିଭର୍ ଫାଇବ୍ରୋସିସ୍ [4, 43] ର ପ୍ରତିବର୍ତ୍ତନୀୟ ଶାରୀରିକ ପ୍ରତିକ୍ରିୟାରେ ମଧ୍ୟ ଏକ ପ୍ରମୁଖ ଘଟଣା। ଅଧିକନ୍ତୁ, ମିଶ୍ରଣ ଚିକିତ୍ସା ପରେ LX-2 କୋଷଗୁଡ଼ିକରେ BHI ର ପୁନରୁଦ୍ଧାର ମାଇଟୋକଣ୍ଡ୍ରିଆଲ୍ ବାୟୋଏନର୍ଜେଟିକ୍ସର ନିୟନ୍ତ୍ରଣରେ IPA ର ସମ୍ଭାବ୍ୟ ଭୂମିକା ବିଷୟରେ ନୂତନ ଅନ୍ତର୍ଦୃଷ୍ଟି ପ୍ରଦାନ କରିଥିଲା। ବିଶ୍ରାମ ଏବଂ ନିଷ୍କ୍ରିୟ ଅବସ୍ଥାରେ, ହେମାଟୋପୋଏଟିକ୍ କୋଷଗୁଡ଼ିକ ସାଧାରଣତଃ ATP ଉତ୍ପାଦନ କରିବା ପାଇଁ ମାଇଟୋକଣ୍ଡ୍ରିଆଲ୍ ଅକ୍ସିଡେଟିଭ୍ ଫସଫୋରାଇଲେସନ୍ ବ୍ୟବହାର କରନ୍ତି ଏବଂ କମ୍ ମେଟାବୋଲିକ୍ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ଥାଏ। ଅନ୍ୟପକ୍ଷରେ, HSC ସକ୍ରିୟକରଣ ଗ୍ଲାଇକୋଲାଇଟିକ୍ ଅବସ୍ଥାରେ ପ୍ରବେଶ କରିବାର ଶକ୍ତି ଚାହିଦା ପୂରଣ କରିବା ପାଇଁ ମାଇଟୋକଣ୍ଡ୍ରିଆଲ୍ ଶ୍ୱାସକ୍ରିୟା ଏବଂ ଜୈବ ସଂଶ୍ଳେଷଣକୁ ବୃଦ୍ଧି କରେ [44]। IPA ମେଟାବୋଲିକ୍ ସମ୍ଭାବନା ଏବଂ ECAR କୁ ପ୍ରଭାବିତ କରିନଥିଲା ଏହା ସୂଚାଇ ଦିଏ ଯେ ଗ୍ଲାଇକୋଲାଇଟିକ୍ ପଥକୁ କମ୍ ପ୍ରାଥମିକତା ଦିଆଯାଇଛି। ସେହିପରି, ଅନ୍ୟ ଏକ ଅଧ୍ୟୟନରୁ ଜଣାପଡିଛି ଯେ 1 mM IPA କାର୍ଡିଓମାୟୋସାଇଟ୍ସ, ମାନବ ହେପାଟୋସାଇଟ୍ କୋଷ ରେଖା (Huh7) ଏବଂ ମାନବ ନାଭିକଳା ଶିରା ଏଣ୍ଡୋଥେଲିଆଲ୍ କୋଷ (HUVEC) ରେ ମାଇଟୋକଣ୍ଡ୍ରିଆଲ୍ ଶ୍ୱାସକ୍ରିୟା ଶୃଙ୍ଖଳ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପକୁ ମଡ୍ୟୁଲେଟ୍ କରିବାକୁ ସକ୍ଷମ ହୋଇଥିଲା; ତଥାପି, କାର୍ଡିଓମାୟୋସାଇଟ୍ସରେ ଗ୍ଲାଇକୋଲିସିସ୍ ଉପରେ IPA ର କୌଣସି ପ୍ରଭାବ ମିଳିଲା ନାହିଁ, ଯାହା ସୂଚାଇ ଦିଏ ଯେ IPA ଅନ୍ୟ କୋଷ ପ୍ରକାରର ବାୟୋଏନର୍ଜେଟିକ୍ସକୁ ପ୍ରଭାବିତ କରିପାରେ [45]। ତେଣୁ, ଆମେ ଅନୁମାନ କରୁଛୁ ଯେ 1 mM IPA ଏକ ମୃଦୁ ରାସାୟନିକ ଅନକପଲର୍ ଭାବରେ କାର୍ଯ୍ୟ କରିପାରେ, କାରଣ ଏହା mtDNA ର ପରିମାଣ ପରିବର୍ତ୍ତନ ନକରି ଫାଇବ୍ରୋଜେନିକ୍ ଜିନ୍ ପ୍ରକାଶନ, କୋଷ ମର୍ଫୋଲୋଜି ଏବଂ ମାଇଟୋକଣ୍ଡ୍ରିଆଲ୍ ବାୟୋଏନର୍ଜେଟିକ୍ସକୁ ଉଲ୍ଲେଖନୀୟ ଭାବରେ ହ୍ରାସ କରିପାରିବ [46]। ମାଇଟୋକଣ୍ଡ୍ରିଆଲ୍ ଅନକପଲର୍ ସଂସ୍କୃତି-ପ୍ରେରିତ ଫାଇବ୍ରୋସିସ୍ ଏବଂ HSC ସକ୍ରିୟକରଣକୁ ବାଧା ଦେଇପାରେ [47] ଏବଂ ଅନକପଲିଂ ପ୍ରୋଟିନ୍ (UCP) କିମ୍ବା ଆଡେନାଇନ୍ ନ୍ୟୁକ୍ଲିଓଟାଇଡ୍ ଟ୍ରାନ୍ସଲୋକେସ୍ (ANT) ପରି କିଛି ପ୍ରୋଟିନ୍ ଦ୍ୱାରା ନିୟନ୍ତ୍ରିତ କିମ୍ବା ପ୍ରେରିତ ମାଇଟୋକଣ୍ଡ୍ରିଆଲ୍ ATP ଉତ୍ପାଦନକୁ ହ୍ରାସ କରିପାରିବ। କୋଷ ପ୍ରକାର ଉପରେ ନିର୍ଭର କରି, ଏହି ଘଟଣା କୋଷଗୁଡ଼ିକୁ ଆପୋପ୍ଟୋସିସ୍ ରୁ ରକ୍ଷା କରିପାରିବ ଏବଂ/କିମ୍ବା ଆପୋପ୍ଟୋସିସ୍ କୁ ପ୍ରୋତ୍ସାହିତ କରିପାରିବ [46]। ତଥାପି, ହେମାଟୋପୋଏଟିକ୍ ଷ୍ଟେମ୍ କୋଷ ନିଷ୍କ୍ରିୟକରଣରେ ମାଇଟୋକଣ୍ଡ୍ରିଆଲ୍ ଅନକପଲର୍ ଭାବରେ IPA ର ଭୂମିକା ସ୍ପଷ୍ଟ କରିବା ପାଇଁ ଆହୁରି ଅଧ୍ୟୟନ ଆବଶ୍ୟକ।
ଆମେ ତା’ପରେ ଅନୁସନ୍ଧାନ କରିଥିଲୁ ଯେ ଜୀବନ୍ତ LX-2 କୋଷରେ ମାଇଟୋକଣ୍ଡ୍ରିଆଲ୍ ମର୍ଫୋଲୋଜିରେ ମାଇଟୋକଣ୍ଡ୍ରିଆଲ୍ ଶ୍ୱାସକ୍ରିୟାରେ ପରିବର୍ତ୍ତନ ପ୍ରତିଫଳିତ ହୁଏ କି ନାହିଁ। ଆଶ୍ଚର୍ଯ୍ୟଜନକ ଭାବରେ, TGF-β1 ଚିକିତ୍ସା ମାଇଟୋକଣ୍ଡ୍ରିଆଲ୍ ଅନୁପାତକୁ ଗୋଲାକାରରୁ ମଧ୍ୟବର୍ତ୍ତୀକୁ ପରିବର୍ତ୍ତନ କରେ, ମାଇଟୋକଣ୍ଡ୍ରିଆଲ୍ ଶାଖା ହ୍ରାସ ଏବଂ DRP1 ର ବୃଦ୍ଧି ସହିତ, ଯାହା ମାଇଟୋକଣ୍ଡ୍ରିଆଲ୍ ବିଭାଜନରେ ଏକ ପ୍ରମୁଖ କାରଣ [48]। ଏହା ବ୍ୟତୀତ, ମାଇଟୋକଣ୍ଡ୍ରିଆଲ୍ ଖଣ୍ଡନ ସାମଗ୍ରିକ ନେଟୱାର୍କ ଜଟିଳତା ସହିତ ଜଡିତ, ଏବଂ ଫ୍ୟୁଜନରୁ ବିଭାଜନକୁ ପରିବର୍ତ୍ତନ ହେମାଟୋପଏଟିକ୍ ଷ୍ଟେମ୍ ସେଲ୍ (HSC) ସକ୍ରିୟକରଣ ପାଇଁ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ, ଯେତେବେଳେ ମାଇଟୋକଣ୍ଡ୍ରିଆଲ୍ ବିଭାଜନର ନିରୋଧ HSC ଆପୋପ୍ଟୋସିସ୍ ଆଡ଼କୁ ନେଇଥାଏ [49]। ତେଣୁ, ଆମର ଫଳାଫଳ ସୂଚାଇଥାଏ ଯେ TGF-β1 ଚିକିତ୍ସା ହ୍ରାସିତ ଶାଖାକରଣ ସହିତ ମାଇଟୋକଣ୍ଡ୍ରିଆଲ୍ ନେଟୱାର୍କ ଜଟିଳତାରେ ହ୍ରାସ ଆଣିପାରେ, ଯାହା ସକ୍ରିୟ ହେମାଟୋପଏଟିକ୍ ଷ୍ଟେମ୍ ସେଲ୍ (HSCs) ସହିତ ଜଡିତ ମାଇଟୋକଣ୍ଡ୍ରିଆଲ୍ ବିଭାଜନରେ ଅଧିକ ସାଧାରଣ। ଅଧିକନ୍ତୁ, ଆମର ତଥ୍ୟ ଦର୍ଶାଇଛି ଯେ IPA ମାଇଟୋକଣ୍ଡ୍ରିଆର ଅନୁପାତକୁ ଗୋଲାକାରରୁ ମଧ୍ୟବର୍ତ୍ତୀ ଆକାରକୁ ପରିବର୍ତ୍ତନ କରିପାରେ, ଯାହା ଦ୍ଵାରା OPA1 ଏବଂ MFN2 ର ପ୍ରକାଶନ ହ୍ରାସ କରିପାରେ। ଅଧ୍ୟୟନରୁ ଜଣାପଡିଛି ଯେ OPA1 ର ନିମ୍ନନିୟନ୍ତ୍ରଣ ମାଇଟୋକଣ୍ଡ୍ରିଆଲ୍ ଝିଲ୍ଲୀ ସମ୍ଭାବନାରେ ହ୍ରାସ ଆଣିପାରେ ଏବଂ କୋଷ ଆପୋପ୍ଟୋସିସ୍ ଟ୍ରିଗର କରିପାରେ [50]। MFN2 ମାଇଟୋକଣ୍ଡ୍ରିଆଲ ଫ୍ୟୁଜନ୍ ଏବଂ ଆପୋପ୍ଟୋସିସ୍ ମଧ୍ୟସ୍ଥତା କରେ ବୋଲି ଜଣାଶୁଣା [51]। ପ୍ରାପ୍ତ ଫଳାଫଳଗୁଡ଼ିକ ସୂଚାଇ ଦିଏ ଯେ TGF-β1 ଏବଂ/କିମ୍ବା IPA ଦ୍ୱାରା LX-2 କୋଷଗୁଡ଼ିକର ପ୍ରେରଣା ମାଇଟୋକଣ୍ଡ୍ରିଆଲ ଆକୃତି ଏବଂ ଆକାର, ସହିତ ସକ୍ରିୟକରଣ ଅବସ୍ଥା ଏବଂ ନେଟୱାର୍କ ଜଟିଳତାକୁ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ କରେ ବୋଲି ମନେହୁଏ।
ଆମର ଫଳାଫଳ ସୂଚାଇ ଦିଏ ଯେ TGFβ-1 ଏବଂ IPA ର ମିଶ୍ରିତ ଚିକିତ୍ସା ଆପୋପ୍ଟୋସିସ୍-ଏଭିଡିଂ କୋଷଗୁଡ଼ିକରେ ଫାଇବ୍ରୋସିସ୍, ଆପୋପ୍ଟୋସିସ୍ ଏବଂ ବଞ୍ଚିବା-ସମ୍ବନ୍ଧୀୟ ଜିନ୍‌ର mRNA ପ୍ରକାଶନକୁ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ କରି mtDNA ଏବଂ କୋଷ ମର୍ଫୋଲିକାଲ୍ ପାରାମିଟରଗୁଡ଼ିକୁ ହ୍ରାସ କରିପାରିବ। ପ୍ରକୃତରେ, IPA AKT1 ଏବଂ COL1A2 ଏବଂ MMP2 ପରି ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ଫାଇବ୍ରୋସିସ୍ ଜିନ୍‌ର mRNA ପ୍ରକାଶନ ସ୍ତରକୁ ହ୍ରାସ କରିଥିଲା, କିନ୍ତୁ CASP8 ର ପ୍ରକାଶନ ସ୍ତରକୁ ବୃଦ୍ଧି କରିଥିଲା, ଯାହା ଆପୋପ୍ଟୋସିସ୍ ସହିତ ଜଡିତ। ଆମର ଫଳାଫଳ ଦର୍ଶାଇଛି ଯେ IPA ଚିକିତ୍ସା ପରେ, BAX ପ୍ରକାଶନ ହ୍ରାସ ପାଇଛି ଏବଂ TIMP1 ପରିବାର ସବୟୁନିଟ୍, BCL-2 ଏବଂ NF-κB ର mRNA ପ୍ରକାଶନ ବୃଦ୍ଧି ପାଇଛି, ଯାହା ସୂଚାଇ ଦିଏ ଯେ IPA ହେମାଟୋପୋଏଟିକ୍ ଷ୍ଟେମ୍ କୋଷ (HSCs) ରେ ବଞ୍ଚିବା ସଙ୍କେତଗୁଡ଼ିକୁ ଉତ୍ତେଜିତ କରିପାରିବ ଯାହା ଆଣ୍ଟି-ଆପୋପ୍ଟୋସିସ୍ ଏଡେଇଯାଏ। ଏହି ଅଣୁଗୁଡ଼ିକ ସକ୍ରିୟ ହେମାଟୋପୋଏଟିକ୍ ଷ୍ଟେମ୍ କୋଷଗୁଡ଼ିକରେ ବଞ୍ଚିବା ପାଇଁ ପ୍ରୋ-ସର୍ଭାଇଭାଲ୍ ସଙ୍କେତ ଭାବରେ କାର୍ଯ୍ୟ କରିପାରେ, ଯାହା ଆଣ୍ଟି-ଆପୋପ୍ଟୋସିକ୍ ପ୍ରୋଟିନ୍ (ଯେପରିକି Bcl-2) ର ବର୍ଦ୍ଧିତ ପ୍ରକାଶନ, ପ୍ରୋ-ଆପୋପ୍ଟୋସିକ୍ BAX ର ହ୍ରାସ ପ୍ରକାଶନ ଏବଂ TIMP ଏବଂ NF-κB ମଧ୍ୟରେ ଏକ ଜଟିଳ ଇଣ୍ଟରପ୍ଲେ ସହିତ ଜଡିତ ହୋଇପାରେ [5, 7]। IPA PXR ମାଧ୍ୟମରେ ଏହାର ପ୍ରଭାବ ପ୍ରୟୋଗ କରେ, ଏବଂ ଆମେ ପାଇଲୁ ଯେ TGF-β1 ଏବଂ IPA ସହିତ ମିଶ୍ରଣ ଚିକିତ୍ସା PXR mRNA ପ୍ରକାଶନ ସ୍ତରକୁ ବୃଦ୍ଧି କରିଛି, ଯାହା HSC ସକ୍ରିୟକରଣର ଦମନକୁ ସୂଚିତ କରେ। ସକ୍ରିୟ PXR ସିଗନାଲିଂ ଭିଭୋ ଏବଂ ଇନ ଭିଟ୍ରୋ [52, 53] ଉଭୟରେ HSC ସକ୍ରିୟକରଣକୁ ବାଧା ଦେବା ପାଇଁ ଜଣାଶୁଣା। ଆମର ଫଳାଫଳ ସୂଚାଇ ଦିଏ ଯେ IPA ଆପୋପ୍ଟୋସିସ୍ କୁ ପ୍ରୋତ୍ସାହିତ କରି, ଫାଇବ୍ରୋସିସ୍ ଏବଂ ମାଇଟୋକଣ୍ଡ୍ରିଆଲ୍ ମେଟାବୋଲିଜିମ୍ ହ୍ରାସ କରି ଏବଂ ବଞ୍ଚିବା ସଙ୍କେତକୁ ବୃଦ୍ଧି କରି ସକ୍ରିୟ HSC ର କ୍ଲିୟରାନ୍ସରେ ଅଂଶଗ୍ରହଣ କରିପାରେ, ଯାହା ସାଧାରଣ ପ୍ରକ୍ରିୟା ଯାହା ସକ୍ରିୟ HSC ଫେନୋଟାଇପ୍ କୁ ଏକ ନିଷ୍କ୍ରିୟ ପ୍ରକ୍ରିୟାରେ ପରିଣତ କରେ। ଆପୋପ୍ଟୋସିସ୍ ରେ IPA ର ସମ୍ଭାବ୍ୟ ଯନ୍ତ୍ର ଏବଂ ଭୂମିକା ପାଇଁ ଆଉ ଏକ ସମ୍ଭାବ୍ୟ ବ୍ୟାଖ୍ୟା ହେଉଛି ଯେ ଏହା ମୁଖ୍ୟତଃ ମାଇଟୋଫାଗି (ଆନ୍ତରିକ ପଥ) ଏବଂ ବାହ୍ୟ TNF ସିଗନାଲିଂ ପଥ (ସାରଣୀ 1) ମାଧ୍ୟମରେ ଅକ୍ଷମ ମାଇଟୋକଣ୍ଡ୍ରିଆକୁ ସଫା କରେ, ଯାହା NF-κB ବଞ୍ଚିବା ସଙ୍କେତ ପଥ (ପରିପୂରକ ଚିତ୍ର 7) ସହିତ ସିଧାସଳଖ ଲିଙ୍କ୍ ହୋଇଛି। ଆଶ୍ଚର୍ଯ୍ୟଜନକ ଭାବରେ, IPA-ସମ୍ବନ୍ଧିତ ସମୃଦ୍ଧ ଜିନ୍ ଆପୋପ୍ଟୋଟିକ୍ ପାଥୱେ [54] ରେ ପ୍ରୋ-ଆପୋପ୍ଟୋଟିକ୍ ଏବଂ ପ୍ରୋ-ଆପୋପ୍ଟୋଟିକ୍ ସିଗନାଲଗୁଡ଼ିକୁ ପ୍ରେରିତ କରିବାରେ ସକ୍ଷମ, ଯାହା ସୂଚାଇ ଦିଏ ଯେ IPA ଏହି ଜିନ୍ ସହିତ ପାରସ୍ପରିକ କ୍ରିୟା କରି ଆପୋପ୍ଟୋଟିକ୍ ପାଥୱେ କିମ୍ବା ବଞ୍ଚିବା ପ୍ରେରିତ କରିପାରେ। ତଥାପି, HSC ସକ୍ରିୟକରଣ ସମୟରେ IPA କିପରି ଆପୋପ୍ଟୋସିସ୍ କିମ୍ବା ବଞ୍ଚିବା ପ୍ରେରିତ କରେ ଏବଂ ଏହାର ଯାନ୍ତ୍ରିକ ପଥଗୁଡ଼ିକ ଅସ୍ପଷ୍ଟ ରହିଛି।
IPA ହେଉଛି ଖାଦ୍ୟପେୟ ଟ୍ରିପ୍ଟୋଫାନରୁ ଅନ୍ତନଳୀ ମାଇକ୍ରୋବାୟୋଟା ମାଧ୍ୟମରେ ଗଠିତ ଏକ ମାଇକ୍ରୋବାୟଲ୍ ମେଟାବୋଲାଇଟ୍। ଅଧ୍ୟୟନରୁ ଜଣାପଡିଛି ଯେ ଏହାର ଅନ୍ତନଳୀ ପରିବେଶରେ ପ୍ରଦାହ-ବିରୋଧୀ, ଆଣ୍ଟିଅକ୍ସିଡାଣ୍ଟ ଏବଂ ଏପିଜେନେଟିକ୍ ନିୟାମକ ଗୁଣ ଅଛି। [55] ଅଧ୍ୟୟନରୁ ଜଣାପଡିଛି ଯେ IPA ଅନ୍ତନଳୀ ବାଧା କାର୍ଯ୍ୟକୁ ପରିବର୍ତ୍ତନ କରିପାରିବ ଏବଂ ଅକ୍ସିଡେଟିଭ୍ ଚାପକୁ ହ୍ରାସ କରିପାରିବ, ଯାହା ଏହାର ସ୍ଥାନୀୟ ଶାରୀରିକ ପ୍ରଭାବରେ ଯୋଗଦାନ ଦେଇପାରେ। [56] ପ୍ରକୃତରେ, IPA ରକ୍ତ ସଞ୍ଚାଳନ ମାଧ୍ୟମରେ ଲକ୍ଷ୍ୟ ଅଙ୍ଗଗୁଡ଼ିକୁ ପରିବହନ କରାଯାଏ, ଏବଂ ଯେହେତୁ IPA ଟ୍ରିପ୍ଟୋଫାନ, ସେରୋଟୋନିନ୍ ଏବଂ ଇଣ୍ଡୋଲ୍ ଡେରିଭେଟିଭ୍ସ ସହିତ ସମାନ ପ୍ରମୁଖ ମେଟାବୋଲାଇଟ୍ ଗଠନ ଅଂଶୀଦାର କରେ, IPA ମେଟାବୋଲିକ୍ କାର୍ଯ୍ୟ କରିଥାଏ ଯାହାର ଫଳସ୍ୱରୂପ ପ୍ରତିଯୋଗିତାମୂଳକ ମେଟାବୋଲିକ୍ ଭାଗ୍ୟ ସୃଷ୍ଟି କରେ। [52] IPA ଏନଜାଇମ କିମ୍ବା ରିସେପ୍ଟରରେ ବାଇଣ୍ଡିଂ ସାଇଟ୍ ପାଇଁ ଟ୍ରିପ୍ଟୋଫାନରୁ ପ୍ରାପ୍ତ ମେଟାବୋଲାଇଟ୍ସ ସହିତ ପ୍ରତିଯୋଗିତା କରିପାରେ, ସମ୍ଭାବ୍ୟ ଭାବରେ ସାଧାରଣ ମେଟାବୋଲିକ୍ ପଥକୁ ବାଧାପ୍ରାପ୍ତ କରିଥାଏ। ଏହା ଏହାର ଚିକିତ୍ସା ୱିଣ୍ଡୋକୁ ଭଲ ଭାବରେ ବୁଝିବା ପାଇଁ ଏହାର ଫାର୍ମାକୋକାଇନେଟିକ୍ସ ଏବଂ ଫାର୍ମାକୋଡାଇନାମିକ୍ସ ଉପରେ ଅଧିକ ଅଧ୍ୟୟନର ଆବଶ୍ୟକତାକୁ ଉଜ୍ଜ୍ୱଳ କରେ। [57] ଏହା ଦେଖିବାକୁ ବାକି ଅଛି ଯେ ଏହା ହେମାଟୋପୋଏଟିକ୍ ଷ୍ଟେମ୍ ସେଲ୍ସ (HSCs) ରେ ମଧ୍ୟ ଘଟିପାରେ କି ନାହିଁ।
ଆମେ ସ୍ୱୀକାର କରୁଛୁ ଯେ ଆମର ଅଧ୍ୟୟନର କିଛି ସୀମା ରହିଛି। IPA ସହିତ ଜଡିତ ସମ୍ପର୍କଗୁଡ଼ିକୁ ବିଶେଷ ଭାବରେ ପରୀକ୍ଷା କରିବା ପାଇଁ, ଆମେ ଟାଇପ୍ 2 ଡାଇବେଟିସ୍ ମେଲିଟ୍ସ (T2DM) ଥିବା ରୋଗୀମାନଙ୍କୁ ବାଦ ଦେଇଛୁ। ଆମେ ସ୍ୱୀକାର କରୁଛୁ ଯେ ଏହା ଟାଇପ୍ 2 ଡାଇବେଟିସ୍ ମେଲିଟ୍ସ ଏବଂ ଉନ୍ନତ ଯକୃତ ରୋଗ ଥିବା ରୋଗୀଙ୍କ ପାଇଁ ଆମର ଫଳାଫଳର ବ୍ୟାପକ ପ୍ରଯୁଜ୍ୟତାକୁ ସୀମିତ କରେ। ଯଦିଓ ମାନବ ସିରମରେ IPA ର ଶାରୀରିକ ସାନ୍ଦ୍ରତା 1-10 μM [11, 20], ସର୍ବୋଚ୍ଚ ଅଣ-ବିଷାକ୍ତ ସାନ୍ଦ୍ରତା [15] ଏବଂ ଆପୋପ୍ଟୋସିସ୍ ର ସର୍ବୋଚ୍ଚ ହାର ଉପରେ ଆଧାର କରି 1 mM IPA ବାଛିଥିଲା, ଯାହା ନେକ୍ରୋଟିକ୍ କୋଷ ଜନସଂଖ୍ୟାର ପ୍ରତିଶତରେ କୌଣସି ପାର୍ଥକ୍ୟ ନୁହେଁ। ଯଦିଓ ଏହି ଅଧ୍ୟୟନରେ IPA ର ସୁପ୍ରାଫିଜିଓଲୋଜିକାଲ୍ ସ୍ତର ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇଥିଲା, ବର୍ତ୍ତମାନ IPA ର ପ୍ରଭାବଶାଳୀ ଡୋଜ୍ ବିଷୟରେ କୌଣସି ସହମତି ନାହିଁ [52]। ଯଦିଓ ଆମର ଫଳାଫଳ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ, IPA ର ବ୍ୟାପକ ମେଟାବୋଲିକ୍ ଭାଗ୍ୟ ଗବେଷଣାର ଏକ ସକ୍ରିୟ କ୍ଷେତ୍ର ରହିଛି। ଅଧିକନ୍ତୁ, ସେରମ୍ IPA ସ୍ତର ଏବଂ ଲିଭର ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପ୍ଟର DNA ମିଥାଇଲେସନ୍ ମଧ୍ୟରେ ସମ୍ପର୍କ ଉପରେ ଆମର ଫଳାଫଳ କେବଳ ହେମାଟୋପୋଏଟିକ୍ ଷ୍ଟେମ୍ କୋଷ (HSCs) ରୁ ନୁହେଁ ବରଂ ଯକୃତ ଟିସୁରୁ ମଧ୍ୟ ପ୍ରାପ୍ତ ହୋଇଥିଲା। ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପ୍ଟୋମ ବିଶ୍ଳେଷଣରୁ ଆମର ପୂର୍ବ ଫଳାଫଳ ଉପରେ ଆଧାର କରି ଆମେ ମାନବ LX-2 କୋଷ ବ୍ୟବହାର କରିବାକୁ ବାଛିଲୁ ଯେ IPA ହେମାଟୋପୋଏଟିକ୍ ଷ୍ଟେମ୍ ସେଲ୍ (HSC) ସକ୍ରିୟକରଣ ସହିତ ଜଡିତ [15], ଏବଂ HSC ହେଉଛି ଲିଭର ଫାଇବ୍ରୋସିସ୍ ର ପ୍ରଗତିରେ ସାମିଲ ପ୍ରମୁଖ କୋଷ। ଲିଭର ଏକାଧିକ କୋଷ ପ୍ରକାରରେ ଗଠିତ, ତେଣୁ କ୍ୟାସପେଜ୍ ସକ୍ରିୟକରଣ ଏବଂ DNA ବିଭାଜନ ସହିତ ମିଶ୍ରିତ ହେପାଟୋସାଇଟ୍-HSC-ପ୍ରତିରକ୍ଷା କୋଷ ସହ-ସଂସ୍କୃତି ପ୍ରଣାଳୀ ସହିତ ପ୍ରୋଟିନ୍ ସ୍ତର ସମେତ କାର୍ଯ୍ୟର କ୍ରିୟାକୁ IPA ର ଭୂମିକା ଏବଂ ଅନ୍ୟ ଲିଭର କୋଷ ପ୍ରକାର ସହିତ ଏହାର ପାରସ୍ପରିକ କ୍ରିୟା ଅଧ୍ୟୟନ କରିବା ପାଇଁ ଅନ୍ୟ କୋଷ ମଡେଲଗୁଡ଼ିକୁ ବିଚାର କରାଯିବା ଉଚିତ।